丹參-當(dāng)歸治療缺血性腦卒中作用機(jī)制網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究*

王 紅，蔣 征，劉 玲，付媛媛，崔永偉，瞿 城△

（1. 江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院南部院區(qū)·南京市溧水區(qū)中醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇南京 211200； 2. 揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇南京 211200； 3. 南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京 210046）

缺血性腦卒中（CIS）常表現(xiàn)為平衡或協(xié)調(diào)能力的喪失、口眼喎斜、言語(yǔ)困難，甚至突然暈倒，意識(shí)障礙等［1］。由于溶栓時(shí)間窗及溶栓風(fēng)險(xiǎn)等原因，西醫(yī)治療存在一定局限。中醫(yī)稱CIS 為“中風(fēng)”，認(rèn)為瘀血存在于中風(fēng)發(fā)生的各個(gè)時(shí)期，血虛血瘀是中風(fēng)發(fā)病過(guò)程中的致病因素，現(xiàn)代中醫(yī)多從該角度來(lái)治療，如使用活血化瘀藥治療能取得良好效果［2-3］。丹參-當(dāng)歸藥對(duì)為常見(jiàn)的活血化瘀類藥物，兩者一溫一涼，相使配伍，具有活血化瘀、益氣強(qiáng)心、通脈止痛功效，常用于治療血瘀血虛諸證，也是經(jīng)典復(fù)方活絡(luò)效靈丹的重要組方藥材［4］。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，丹參主要含有丹酚酸類、丹參酮類成分，具有保護(hù)心腦血管系統(tǒng)、抗炎、抗氧化、清除自由基等藥理作用［5］；當(dāng)歸中主要含有揮發(fā)油、有機(jī)酸類成分，能保護(hù)心腦血管、增強(qiáng)造血功能、提高免疫功能等藥理作用［6］。王燦等［7］研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)虛藥（當(dāng)歸）及活血化瘀藥（丹參）出現(xiàn)頻次較高；王佳楠［8］的研究發(fā)現(xiàn)，丹參、當(dāng)歸為對(duì)腦卒中治療效果影響較大的核心藥物。但由于中藥成分和治療靶點(diǎn)的多樣性與復(fù)雜性，丹參-當(dāng)歸治療CIS 的藥效物質(zhì)、生物過(guò)程及分子機(jī)制尚未明晰。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)可通過(guò)構(gòu)建“藥物- 疾病- 靶點(diǎn)- 通路”網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)藥物治療疾病的作用機(jī)制［9］，符合中醫(yī)治病的整體觀念與辨證論治特點(diǎn)，與中藥多成分、多途徑、多靶點(diǎn)的作用機(jī)制相吻合。分子對(duì)接技術(shù)可為探究中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制提供可行的思路與方法［10］。因此，本研究中采用中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，篩選丹參-當(dāng)歸中的活性成分，預(yù)測(cè)治療CIS的作用靶點(diǎn)及信號(hào)通路，并以分子對(duì)接技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，為治療CIS 的藥物研發(fā)和指導(dǎo)臨床用藥提供參考。

1 資料與方法

1.1 活性成分篩選和作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，http：//tcmspw.com/tcmsp.php），設(shè)置口服生物利用度（OB）≥30%和類藥性（DL）≥0.18，獲取丹參和當(dāng)歸的主要活性成分及作用靶點(diǎn)，并通過(guò)PubMed、中國(guó)知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫(kù)查詢文獻(xiàn)補(bǔ)充活性成分及其作用靶點(diǎn)，使用Swiss TargetPrediction 數(shù)據(jù)庫(kù)補(bǔ)充各活性成分的作用靶點(diǎn)。以Uniprot 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//ebi14.uniprot.org）對(duì)所有靶點(diǎn)信息進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化和去重。

1.2 CIS 疾病靶點(diǎn)的獲取

利用人類基因數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneCards，http：// www.genecards.org）、人類孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)（OMIM，http：//www.omim.org）、DisGeNET（http：//www.Disgenet.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)，以“Cerebral ischemic stroke/ CIS”或“cerebral infarction/ CI”為關(guān)鍵詞，檢索CIS 的潛在靶點(diǎn)。匯總各數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的疾病靶點(diǎn)，去重后得到CIS疾病靶點(diǎn)。

1.3 共有靶點(diǎn)的獲取與蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將1.1項(xiàng)下篩選得到的活性成分作用靶點(diǎn)與1.2項(xiàng)下篩選的CIS 疾病靶點(diǎn)取交集，即得丹參- 當(dāng)歸治療CIS 的共有靶點(diǎn)，并利用Venny 2.1.0 工具制作維恩圖。將共有靶點(diǎn)上傳至String 11.0 平臺(tái)，生物種類選定“homo sapiens”，選擇高度可信（high confidence）的互相作用閾值（設(shè)為0.9），默認(rèn)其他設(shè)置，所得靶點(diǎn)通過(guò)Cytoscape 3.2.8進(jìn)行可視化處理，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)。

1.4 疾病-藥物-活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

運(yùn)用Cytoscape 3.8.2 軟件將獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行可視化處理，構(gòu)建丹參-當(dāng)歸治療CIS的疾病-藥物-活性成分-靶點(diǎn)的可視化網(wǎng)絡(luò)。在可視化網(wǎng)絡(luò)中，每個(gè)數(shù)據(jù)即為1 個(gè)節(jié)點(diǎn)，其度（Degree）值越高參與度越高，可信性越強(qiáng)。

1.5 富集分析

將共有靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID 數(shù)據(jù)庫(kù)，分別進(jìn)行基因本體論（GO）功能富集分析和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析。功能富集通過(guò)細(xì)胞成分（CC）、生物學(xué)過(guò)程（BP）、分子功能（MF）3 個(gè)維度來(lái)解釋和注釋基因，篩選條件為P＜0.01；根據(jù)通路富集結(jié)果獲得相應(yīng)的P值，選擇P≤0.01 作為聚類標(biāo)準(zhǔn)，篩選排名前25 的通路。最后將丹參-當(dāng)歸治療CIS 的核心靶點(diǎn)、核心靶點(diǎn)密切相關(guān)的活性成分及KEGG 富集得到的通路導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2 軟件中，構(gòu)建活性成分- 核心靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)。

1.6 分子對(duì)接

采用AutoDock Tools 軟件對(duì)疾病- 藥物- 活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)中度值排名前6 的靶點(diǎn)蛋白和活性成分進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。首先通過(guò)PubChem 數(shù)據(jù)庫(kù)和Chem-BioOffice 軟件獲得活性成分的3D 結(jié)構(gòu)，并將其保存為.mol2 格式；其次運(yùn)用PDB（http：//www.rcsb.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)檢索核心靶點(diǎn)的3D 結(jié)構(gòu)，利用PyMOL 軟件去除水分子，分離得到的蛋白及配體經(jīng)Autodock 軟件處理保存為. pdbqt 格式；最后使用Autodock Vina 軟件進(jìn)行分子對(duì)接。

2 結(jié)果

2.1 丹參-當(dāng)歸藥對(duì)活性成分及作用靶點(diǎn)篩選

共檢索到活性成分82 個(gè)，其中丹參65 個(gè)、當(dāng)歸17 個(gè)，詳見(jiàn)表1。丹參對(duì)應(yīng)716 個(gè)靶點(diǎn)，當(dāng)歸對(duì)應(yīng)401 個(gè)靶點(diǎn)，去除重復(fù)靶點(diǎn)，得到潛在作用靶點(diǎn)787個(gè)。

表1 丹參-當(dāng)歸的活性成分Tab.1 Active ingredients of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma - Angelicae Sinensis Radix

2.2 共有靶點(diǎn)篩選

檢索GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)得CIS 疾病靶點(diǎn)752 個(gè)，OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)131 個(gè)，DisGeNET 數(shù)據(jù)庫(kù)10 個(gè)，去重后得671個(gè)，丹參-當(dāng)歸治療CIS的共有靶點(diǎn)76個(gè)，詳見(jiàn)圖1。

圖1 丹參-當(dāng)歸活性成分作用靶點(diǎn)與CIS潛在靶點(diǎn)維恩圖Fig.1 Venn diagram of targets of active ingredients in Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma - Angelicae Sinensis Radix and potential targets of CIS

2.3 疾病-藥物-活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

疾病-藥物-活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)見(jiàn)圖2（圖中，圓形代表藥物與疾病的共有靶點(diǎn)，其中紫色代表丹參與當(dāng)歸共同作用的靶點(diǎn)；菱形代表活性成分）。該網(wǎng)絡(luò)由232個(gè)節(jié)點(diǎn)和1 016條邊組成，其中節(jié)點(diǎn)分別包括148個(gè)靶點(diǎn)、2 種藥物和82 種活性成分。以度值作為判別重要成分的指標(biāo)，使用Cytoscape 中的Network Analyzer 工具分析網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，關(guān)聯(lián)靶點(diǎn)數(shù)排名前6的活性成分為丹參醇B（丹參）、丹參新醌D（丹參）、木犀草素（丹參）、阿魏酸（當(dāng)歸）、藁本內(nèi)酯（當(dāng)歸）、丹參酮ⅡA（丹參）。

2.4 PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)分析

共有111 個(gè)節(jié)點(diǎn)和544 條邊代表靶點(diǎn)間的相互作用關(guān)系，平均度值為4.99，PPI 網(wǎng)絡(luò)見(jiàn)圖3。根據(jù)度值將核心靶點(diǎn)進(jìn)行排序，初步得到丹參-當(dāng)歸治療CIS中發(fā)揮重要作用的前10 個(gè)靶點(diǎn)為MAPK14，MAPK1，AKT1，PTGS2，EGFR，JAK2，VEGFA，ITGB3，MAPK3，ESR1。

A. 三維圖 B. 二維圖圖3 丹參-當(dāng)歸治療CIS的共有靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)A.Three - dimensional diagram B.Two - dimensional diagramFig.3 PPI network of common targets of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma - Angelicae Sinensis Radix in the treatment of CIS

2.5 富集分析

GO功能富集：共獲得2 545個(gè)條目。其中BP 2 244個(gè)，CC 128 個(gè)，MF 173 個(gè)；各選取排名前10 的條目進(jìn)行可視化分析，結(jié)果見(jiàn)圖4。其中BP 主要涉及對(duì)脂多糖的反應(yīng)，對(duì)細(xì)菌來(lái)源分子的反應(yīng)，細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激的反應(yīng)，對(duì)氧氣水平的反應(yīng)，化學(xué)突觸傳遞的調(diào)節(jié)等；靶點(diǎn)蛋白主要存在于膜筏、膜微區(qū)、膜區(qū)、囊泡腔等CC 中；與內(nèi)肽酶、絲氨酸水解酶、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶、金屬離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)器、通路的活性及蛋白酶、磷酸酶、生長(zhǎng)因子、酰胺的結(jié)合等MF關(guān)系密切。

圖4 丹參-當(dāng)歸治療CIS的GO功能富集分析柱狀圖Fig.4 Histogram of GO functional enrichment analysis of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma - Angelicae Sinensis Radix in the treatment of CIS

KEGG 通路富集：共得到152條信號(hào)通路，根據(jù)P值按篩選前25 個(gè)通路制作氣泡圖，結(jié)果見(jiàn)圖5。可見(jiàn)，丹參-當(dāng)歸藥對(duì)可能通過(guò)PI3K-Akt信號(hào)通路、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、鈣信號(hào)通路、Rap1 信號(hào)通路、神經(jīng)活性配體-受體相互作用等發(fā)揮治療CIS 的作用。活性成分-核心靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)見(jiàn)圖6（圖中，菱形代表活性成分，平行四邊形代表作用靶點(diǎn)，其他節(jié)點(diǎn)代表信號(hào)通路）。丹參- 當(dāng)歸藥對(duì)治療CIS 是多種活性成分作用于多個(gè)靶點(diǎn)并參與不同信號(hào)通路的結(jié)果。

圖5 丹參-當(dāng)歸治療CIS的KEGG通路富集分析氣泡圖Fig.5 Bubble chart of KEGG pathway enrichment analysis of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma - Angelicae Sinensis Radix in the treatment of CIS

圖6 丹參-當(dāng)歸治療CIS的活性成分-核心靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)Fig.6 Network of active ingredient - core target - pathway of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma - Angelicae Sinensis Radix in the treatment of CIS

2.6 分子對(duì)接

一般認(rèn)為，受體和配體的結(jié)合能數(shù)值越小，兩者結(jié)合越牢固，化學(xué)性質(zhì)越穩(wěn)定。當(dāng)結(jié)合能小于-5.0 kcal（-20.92 kJ/mol）時(shí)，兩者之間有較好的結(jié)合活性；當(dāng)結(jié)合能小于-7.0 kcal（-29.29 kJ/mol）時(shí)，兩者之間有強(qiáng)烈的結(jié)合活性［11］。將度值排名前6 的核心靶點(diǎn)與關(guān)聯(lián)靶點(diǎn)數(shù)排名前6的活性成分進(jìn)行分子對(duì)接，發(fā)現(xiàn)丹參-當(dāng)歸藥對(duì)中的活性成分與對(duì)應(yīng)的核心靶點(diǎn)均有較好的結(jié)合活性，詳見(jiàn)表2、圖7。

A.MAPK14 - 丹參酮ⅡA B.MAPK1 - 丹參醇B C.AKT1 - 藁本內(nèi)酯 D.PTGS2 - 木犀草素 E.EGFR - 丹參醇B F.JAK2 - 丹參酮ⅡA圖7 丹參-當(dāng)歸治療CIS活性成分與核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接模式圖A.MAPK14 - tanshinone ⅡA B.MAPK1 - tanshinol B C.AKT1 - ligustilide D.PTGS2 - luteolin E.EGFR - tanshinol B F.JAK2 - tanshinone ⅡAFig.7 Molecular docking between active ingredients and core targets of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma - Angelicae Sinensis Radix in the treatment of CIS

表2 丹參-當(dāng)歸活性成分與核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接信息Tab.2 Molecular docking between active ingredients and core targets of Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma - Angelicae Sinensis Radix

3 討論

CIS 的病因病機(jī)較復(fù)雜，涉及神經(jīng)炎癥、能量衰竭、細(xì)胞凋亡及自噬等，且各環(huán)節(jié)相互影響，重疊發(fā)生，導(dǎo)致了疾病過(guò)程的復(fù)雜性。丹參、當(dāng)歸為常見(jiàn)的活血化瘀藥材，是張錫純《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》中活絡(luò)效靈丹的重要組成部分，具有活血化瘀、通絡(luò)止痛功效，可用于腦血栓形成、心絞痛等疾病的治療［12］。

本研究表明，按共有靶點(diǎn)統(tǒng)計(jì)，丹參醇B、丹參新醌D、木犀草素、阿魏酸、藁本內(nèi)酯、丹參酮ⅡA對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)較多，考慮為丹參-當(dāng)歸治療CIS的關(guān)鍵活性成分。其中，木犀草素具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等藥理作用，能抑制神經(jīng)細(xì)胞變性，減輕運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)功能障礙。體外試驗(yàn)表明，木犀草素能緩解小膠質(zhì)細(xì)胞激活引起的神經(jīng)細(xì)胞活力減弱，防止氧化應(yīng)激引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷［13］。劉亞鷺等［14］在大腦中動(dòng)脈栓塞模型大鼠中發(fā)現(xiàn)，阿魏酸在缺血前后、缺血再灌注等不同時(shí)間點(diǎn)均能減小梗死區(qū)面積，明顯下調(diào)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）、線粒體Bcl2關(guān)聯(lián)X蛋白（Bax）和半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的表達(dá)，調(diào)控P38 MAPK/p90RSK/CREB/Bcl-2 信號(hào)通路，對(duì)抗腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡。高娟等［15］發(fā)現(xiàn)，藁本內(nèi)酯可顯著改善卒中患者的神經(jīng)功能缺損，并促進(jìn)卒中后神經(jīng)再生。吳倩等［16］通過(guò)建立氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧OGD/R損傷后HT22細(xì)胞模型發(fā)現(xiàn)，藁本內(nèi)酯逆轉(zhuǎn)了細(xì)胞模型內(nèi)活性氧（ROS）的釋放、鈣離子超載及線粒體膜電位的下降等。徐璇等［17］研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA可增強(qiáng)腦缺血模型大鼠磷酸酯酶與張力蛋白同源物（PTEN）的表達(dá)，抑制自噬通路PI3K/Akt/mTOR 的表達(dá)，起到保護(hù)腦組織的作用。丹參醇B和丹參新醌D同屬丹參中的二萜類化合物，但其藥理作用研究遠(yuǎn)少于同類成分丹參酮ⅡA，缺少相應(yīng)的文獻(xiàn)考證。

PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龊Y選出的核心靶點(diǎn)包括MAPK14，MAPK1，AKT1，PTGS2，EGFR，JAK2，VEGFA 等。其中，絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)途徑普遍存在于生物體內(nèi)的大多數(shù)細(xì)胞中，與細(xì)胞的增殖、分化、存活、凋亡等生理過(guò)程密切相關(guān)，MAPK 的異常已被證實(shí)能導(dǎo)致多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病。MAPK14 能控制炎癥進(jìn)展，可阻止促炎細(xì)胞因子分泌，并控制抗氧化基因的表達(dá)［14，18］。MAPK1 又稱ERK2，ERK2 的磷酸化在神經(jīng)軸突和樹突狀細(xì)胞的生長(zhǎng)和穩(wěn)定中起重要作用，腦缺血會(huì)導(dǎo)致ERK 的時(shí)間依賴性激活，而上游MEK 的抑制則會(huì)導(dǎo)致?lián)p傷區(qū)炎性細(xì)胞因子和細(xì)胞凋亡的顯著降低［19］。蛋白激酶B（AKT1）在調(diào)節(jié)代謝、促進(jìn)血管生成，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能等方面發(fā)揮重要作用，能被多種上游細(xì)胞因子激活，從而對(duì)缺血性損傷后的神經(jīng)細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用［20］。PTGS2 是能催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素的類過(guò)氧化物酶，是重要的炎性介質(zhì)，參與炎癥初期到炎癥形成的全過(guò)程，PTGS2的過(guò)量表達(dá)可破壞內(nèi)環(huán)境平衡，參與腦損傷后的炎性反應(yīng)，并促進(jìn)腦梗死面積的擴(kuò)大［21］。表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）屬酪氨酸家族激酶受體，EGFR 通過(guò)其細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子的反應(yīng)。在大腦中動(dòng)脈同側(cè)皮質(zhì)梗死區(qū)神經(jīng)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞亞群中，EGFR明顯上調(diào)，可能參與了缺血性和創(chuàng)傷性腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞的可塑和修復(fù)機(jī)制［22］。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）家族中神經(jīng)保護(hù)的重要生長(zhǎng)因子，能促進(jìn)腦缺血后的血管生成。CHEN等［23］發(fā)現(xiàn)，當(dāng)VEGFA表達(dá)水平升高時(shí)，神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量也隨之增加。

GO 富集分析結(jié)果表明，關(guān)鍵靶點(diǎn)主要分布于膜筏、膜區(qū)、囊泡腔、質(zhì)膜外側(cè)，靶點(diǎn)中主要描述了內(nèi)肽酶、絲氨酸水解酶、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶等在分子水平上的活性。同時(shí)，主要靶點(diǎn)涉及了對(duì)脂多糖的反應(yīng)、對(duì)細(xì)菌來(lái)源分子的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激的反應(yīng)、對(duì)氧氣水平的反應(yīng)等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。在KEGG富集分析中，PI3K -Akt 信號(hào)通路與丹參- 當(dāng)歸藥對(duì)治療CIS高度相關(guān)，其在抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激、炎性反應(yīng)及自噬中發(fā)揮重要作用［24］。如PI3K/Akt信號(hào)通路的激活可抑制NF - κB 引起的促炎因子的表達(dá)，抑制細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥，促進(jìn)M1 型（促炎表型）小膠質(zhì)細(xì)胞向M2 型（抗炎表型）轉(zhuǎn)化，減輕炎性反應(yīng)［25］；能發(fā)生一系列磷酸化級(jí)聯(lián)反應(yīng)，延緩細(xì)胞凋亡；活化的Akt 可進(jìn)一步激活氧化應(yīng)激中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，阻止Kelch 樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白-1與其耦聯(lián)，增加抗氧化蛋白的表達(dá)；通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路的下游靶點(diǎn)mTOR，減少細(xì)胞的過(guò)度自噬與腦損傷的程度，保護(hù)缺血腦組織［26］。故丹參-當(dāng)歸可能通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號(hào)通路改善CIS的臨床癥狀，但仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。

分子對(duì)接技術(shù)發(fā)現(xiàn)，篩選的6個(gè)活性成分與核心靶點(diǎn)MAPK14，MAPK1，AKT1，PTGS2，EGFR，JAK2 的結(jié)合能均小于- 5.0 kcal，表明其具有較好的結(jié)合活性。其中，丹參醇B 與EGFR、丹參新醌D 分別與MAPK14，PTGS2，JAK2，木犀草素分別與PTGS2，EGFR，藁本內(nèi)酯分別與MAPK14，AKT1，JAK2，丹參酮ⅡA分別與MAPK14，AKT1，PTGS2，EGFR，JAK2 的結(jié)合能均小于等于- 7.0 kcal，強(qiáng)于原始配體的結(jié)合活性，表明這些活性成分與其對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)的結(jié)合活性強(qiáng)。

綜上所述，丹參- 當(dāng)歸可能通過(guò)丹參醇B、丹參新醌D、木犀草素、阿魏酸、藁本內(nèi)酯、丹參酮ⅡA等活性成分，作用于MAPK14，MAPK1，AKT1，PTGS2，EGFR，JAK2 等關(guān)鍵靶點(diǎn)，繼而調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激、抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡和自噬等生物學(xué)過(guò)程，調(diào)控PI3K/Akt 等主要的信號(hào)通路而發(fā)揮抗腦缺血損傷的作用。