外周血CD64、HNL及糞鈣衛蛋白檢測在細菌性腹瀉診斷中的價值*

賈瀟霄,王 馳,向帆麗

廣漢市人民醫院,四川德陽 618300

急性腹瀉是指發作時間短、持續時間較短的胃腸道癥狀[1],表現為大便數量增多、質地稀薄、黏液或血絲等不同程度的異常,伴有腹部疼痛、惡心、嘔吐、發熱等情況。急性腹瀉一般分為細菌性感染與病毒性感染,這兩種感染在兒童群體中的發病率較高[2],可嚴重危害兒童的身心健康。細菌性腹瀉和病毒性腹瀉的臨床表現相似,均可引起腹瀉、腹痛、發熱等癥狀,故鑒別診斷較為困難。目前,外周血中性粒細胞表面抗原CD64指數(CD64)、人中性粒細胞載脂蛋白(HNL)、糞便鈣衛蛋白(FC)作為臨床檢查指標,已經在鑒別細菌性腹瀉和病毒性腹瀉方面得到了廣泛應用[3]。在外周血檢查方面,CD64和HNL是兩種常見的白細胞活化標志物,其水平通常能夠反映機體對感染的免疫反應狀態。另外,FC主要分布于腸道上皮細胞和單核細胞中,并且與腸道炎癥程度關系密切。但CD64、HNL、FC在細菌性與病毒性感染患兒中的水平有何差異目前鮮有報道。基于此,筆者將2021年1月至2022年12月本院收治的急性腹瀉患兒納入研究,旨在探究外周血外周血CD64、HNL及FC在細菌性腹瀉和病毒性腹瀉患兒鑒別診斷中的價值,以幫助醫生更準確地判斷腹瀉的病因,指導臨床治療,現報道如下。

1 資料和方法

1.1一般資料 將2021年1月至2022年12月本院收治的90例急性腹瀉患兒納入研究。納入標準:(1)符合《中國腹瀉病診斷治療方案》[4]中病毒性腹瀉、細菌性腹瀉的診斷標準,而且患兒就診15 d內存在2次稀便;(2)發病后于本院就診,未接受院外治療,檢查前2周內未使用過抗菌藥物;(3)年齡6個月至6歲。排除標準:(1)重要臟器功能嚴重不全者;(2)其他烈性、感染性腹瀉;(3)細菌與病毒雙重感染者;(4)臨床資料不完整者;(5)有消化道腫瘤;(6)長期使用非甾體類抗炎藥物。按病原體將患兒分為病毒性腹瀉組(33例)、細菌性腹瀉組(57例);將細菌性腹瀉組患兒根據病情嚴重程度分為輕型組(18例)、中型組(26例)及重型組(13例)。另選取同期于本院體檢的健康兒童45例作為對照組。各組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05),見表1。納入研究的患兒或監護人對本研究知情同意并簽署知情同意書。本研究經醫院倫理委員會批準。

表1 一般資料比較(n/n或

1.2方法

1.2.1CD64的檢測 將CD64-藻紅蛋白抗體加入至乙二胺四乙酸抗凝靜脈全血中,劑量為20μL,將其混勻,在室溫下避光,孵育時間為1 h。待孵育完成后,在其中加入磷酸鹽緩沖液,劑量為430 μL,采用Attune NxT型流式細胞儀(賽默飛世爾科技有限公司)進行檢測。

1.2.2HNL的檢測 待患者血液凝固完全后,以3 000 r/min,離心15 min,將血清分離,采用酶聯免疫吸附法檢測患者HNL水平。每隔24 h檢測1次質控品,每次試劑盒更換后需進行質控品的檢驗。

1.2.3FC的檢測 將糞便標本置于室溫解凍,按1∶50的比例進行稀釋,之后進行常溫孵育,采用雙抗體夾心法檢測患者的FC。使用同一濃度質控品進行多次檢測,觀察結果的離散程度。例如,將濃度為50 mg/L的質控品每天隨機測量至少3次,持續至少30 d。計算其平均值、標準差和變異系數,評估結果的離散程度。如果標準差小于10%,變異系數小于15%,則說明檢測的精密度良好。

1.3觀察指標 (1)比較細菌性腹瀉組、病毒性腹瀉組與對照組外周血CD64、HNL、FC水平。(2)采用ROC曲線分析外周血CD64、HNL、FC單項及聯合檢測用于診斷細菌性腹瀉的效能。(3)采用Spearman秩相關分析外周血CD64、HNL、FC水平與細菌性腹瀉患兒嚴重程度的相關性。

2 結 果

2.13組間外周血CD64、HNL、FC比較 3組間外周血CD64、HNL、FC水平比較,差異有統計學意義(P<0.05),細菌性腹瀉組外周血CD64、HNL、FC水平高于病毒性腹瀉組(P<0.05),病毒性腹瀉組這3項指標均高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 3組間外周血CD64、HNL、FC水平比較

2.2外周血CD64、HNL、FC水平診斷細菌性腹瀉的效能分析 ROC曲線分析顯示,CD64、HNL、FC水平診斷細菌性腹瀉的曲線下面積(AUC)分別為0.820、0.870、0.854。將CD64、HNL、FC納入Logistic回歸模型,通過回歸系數β(分別為0.424、0.034、0.028)得出3項指標聯合診斷的預測變量計算公式為:預測變量=CD64+(0.034/0.424)×HNL+(0.028/0.424)×FC,3項聯合診斷細菌性腹瀉的AUC為0.924。見表3、圖1。

圖1 外周血CD64、HNL、FC用于診斷細菌性腹瀉的ROC曲線

表3 外周血CD64、HNL、FC診斷細菌性腹瀉的效能

2.3不同嚴重程度的細菌性腹瀉患兒外周血CD64、HNL、FC水平比較 不同嚴重程度細菌性腹瀉患兒外周血CD64、HNL、FC水平比較差異均有統計學意義(P<0.05)。重型組外周血CD64、HNL、FC水平高于中型組,中型組這3項指標均高于輕型組,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同嚴重程度的細菌性腹瀉患兒外周血CD64、HNL、FC水平比較

2.4外周血CD64、HNL、FC水平與細菌性腹瀉患兒嚴重程度的相關性分析 Spearman秩相關分析顯示,CD64、HNL、FC水平與細菌性腹瀉患兒嚴重程度均呈正相關(r=0.813、0.614、0.668,P<0.05)。

3 討 論

急性腹瀉是指胃腸道受到感染或刺激,導致胃腸道的炎癥反應和黏膜受損,從而引起腹瀉、腹痛等癥狀。常見的病因包括細菌、病毒、寄生蟲和真菌感染等。急性腹瀉一般分為病毒性腹瀉與細菌性腹瀉,無論是哪種腹瀉,都會對患兒產生一定的危害。其中,細菌性腹瀉可能會導致嚴重的腸道感染,有時甚至會導致敗血癥和其他并發癥[5]。對于年齡較小的兒童、老年人和免疫系統受損的人來說,這種危害更為明顯。而病毒性腹瀉通常不會造成嚴重的并發癥,但在兒童、老年人和免疫系統受損的人中,可能導致脫水和電解質紊亂等問題。

CD64在炎癥反應中起著重要作用[7]。HNL又稱天然殺傷細胞細胞活化指標[8],屬于細胞毒素類胞外酶。FC具備組織或體細胞特異性,屬于促炎癥蛋白。它主要存在于中性粒細胞、單核細胞和巨噬細胞等白細胞中,當腸道受到炎癥刺激時,腸壁細胞損傷導致FC的水平升高[9]。本研究結果表明,細菌性腹瀉組外周血CD64、HNL、FC水平高于病毒性腹瀉組,后者又高于對照組。可見在急性腹瀉中,外周血CD64、HNL、FC水平均處于增高狀態,而且細菌性腹瀉的外周血CD64、HNL、FC水平最高。分析原因:外周血CD64、HNL及FC都是炎癥指標[10],其升高可反映機體免疫系統對感染的應激反應[11]。在細菌性腹瀉患者中,這些指標的表達水平通常會更高,因為細菌感染比病毒感染引起的局部炎癥反應更強烈。同時,CD64和HNL是中性粒細胞的活化指標,它們的升高可以反映中性粒細胞的活化程度,而中性粒細胞的活化也是細菌感染的重要特征之一[12]。FC是腸黏膜中的一種蛋白質,在腸道炎癥和損傷時會大量釋放進入糞便。因此,它可以作為判斷腸道炎癥程度的指標。

細菌性腹瀉患兒病情越嚴重,細菌的數量越多,影響范圍越大[13],機體對感染的免疫反應也更加強烈。外周血CD64、HNL及FC都是機體炎癥反應的指標[14],其水平通常與病情的嚴重程度相關。本研究表明,重型組外周血CD64、HNL、FC水平高于中型組,后者又高于輕型組。相關性分析顯示,CD64、HNL、FC與細菌性腹瀉患兒嚴重程度呈正相關,提示細菌性腹瀉患兒的病情越嚴重,機體對感染的應激反應越強烈,外周血CD64、HNL及FC的水平也就越高。具體原因為CD64和HNL是中性粒細胞表面的蛋白質[15],在機體免疫系統被激活時,它們會被中性粒細胞釋放出來。中性粒細胞是免疫系統中最主要的細胞,它們會吞噬并摧毀入侵細菌。當細菌數量增多時,中性粒細胞需要被激活來對抗細菌,因此CD64和HNL水平會升高[16]。FC是一種由中性粒細胞和巨噬細胞分泌的蛋白質。在腸道受到感染或炎癥刺激時,腸黏膜上皮細胞就會分泌大量FC以抑制腸道中的細菌,這時候FC水平也會升高。FC反映了機體的炎癥反應狀態。

外周血CD64、HNL及糞便CF的檢測方法簡單[17]、快速、非侵入性,而且準確性較高,這些指標的聯合檢測可以提高對細菌性腹瀉的診斷效能。本研究結果顯示,3項指標聯合診斷細菌性腹瀉的AUC為0.924,提示聯合檢測外周血CD64、HNL及FC有助于提供更準確的細菌性腹瀉診斷結果[18]。原因分析:CD6表達水平會在感染過程中會發生變化,在細菌感染中,其表達水平會明顯升高,因此可以作為診斷的一個指標。HNL在病毒感染過程中高表達。檢測其水平可以幫助診斷病毒感染。FC在免疫反應中發揮重要作用。檢測其水平有助于了解免疫系統的反應。通過聯合檢測這3項指標,有助于判斷腹瀉的原因,從而提高診斷的準確性。

綜上所述,細菌性腹瀉患兒外周血CD64、HNL、FC水平高于病毒性腹瀉患兒,外周血CD64、HNL、FC水平可作為鑒別細菌性腹瀉和病毒性腹瀉患兒的有效指標,聯合檢測的診斷效能更高。外周血CD64、HNL、FC水平與細菌性腹瀉嚴重程度關系密切。本研究樣本量較小,難以得到更有說服力的結論,期望在今后的臨床工作中繼續累積樣本進行更為深入的研究。