宮頸液基細胞P16、Ki-67 雙染檢測在1 250 例宮頸異常患者診斷中的診斷價值

田巖巖 王佳佳

（1 河南省周口市中心醫(yī)院 周口 466000；2 河南省鄭州人民醫(yī)院 鄭州 453000）

宮頸癌（Cervical Carcinoma）是婦科臨床常見腫瘤，長期位居中國女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第一位，每年新發(fā)病例在10 萬左右[1]。宮頸癌的發(fā)生是一個長期的過程，可通過早期篩查發(fā)現(xiàn)早期宮頸異常，早期進行干預(yù)可預(yù)防宮頸癌的發(fā)生[2]。目前宮頸癌篩查方案多樣，但均有不同程度的局限性。病理學(xué)檢查是臨床診斷宮頸癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但診斷成本較高，對患者有一定的創(chuàng)傷，且診斷時間比較長[3]。薄層液基細胞學(xué)檢查（Thinprep Cytologic Test, TCT）是利用宮頸刷刷取宮頸表面及部分宮頸管以獲取脫落細胞，通過專業(yè)細胞機進行全自動化的制片，提高了宮頸病變的檢出率，但診斷的特異點有待提高[4]。P16、Ki-67雙染是一種近年新出現(xiàn)的宮頸病變檢出手段，Ki-67是細胞增殖的標(biāo)記物，其表達量會隨著宮頸病變的加重而升高[5]；P16 在細胞周期的阻滯期具有抑制細胞增殖的功能，可抑制細胞的增殖，在宮頸異常人群中可持續(xù)表達[6]。P16、Ki-67 雙染檢測能夠檢測出機體的人乳頭狀瘤病毒（Human Papilloma Virus,HPV）持續(xù)感染情況，可反映宮頸病變的程度[7～8]。本研究探討與分析宮頸液基細胞P16、Ki-67 雙染檢測在1 250 例宮頸異常患者診斷中的診斷價值，以促進宮頸癌的早期檢出。現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年1 月至2023 年8 月在河南省周口市中心醫(yī)院進行宮頸疾病篩查的宮頸異常人群1 250 例作為研究對象，根據(jù)病理學(xué)檢測結(jié)果分為宮頸癌組（150 例）和非宮頸癌組（1 100例）。兩組年齡、體質(zhì)量指數(shù)、心率、受教育年限、收縮壓、舒張壓等一般資料對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。本研究獲得河南省周口市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（批號：2020-022）。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有人群在檢查前72 h 無性生活、陰道給藥等行為；年齡25～60 歲；所有患者自愿參與本研究；小學(xué)及其以上學(xué)歷；依從性良好。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期婦女；合并高危呼吸道疾病；調(diào)查資料缺乏；合并有其他部位腫瘤。

表1 兩組一般資料對比（±s）

表1 兩組一般資料對比（±s）

年齡（歲）宮頸癌組非宮頸癌組組別n體質(zhì)量指數(shù)（kg/m2）心率（次/min）受教育年限（年）收縮壓（mm Hg）舒張壓（mm Hg）150 1 100 t P 22.44±1.78 22.51±1.10 0.669 0.503 78.46±3.58 78.50±4.10 0.114 0.909 15.52±1.48 15.49±1.11 0.297 0.766 125.59±10.44 125.09±11.10 0.521 0.602 76.59±4.92 76.79±5.01 0.460 0.646 51.94±2.68 51.67±3.17 0.990 0.320

1.2 宮頸液基細胞P16、Ki-67 雙染檢測 使用窺陰器暴露所有患者的宮頸，棉簽擦凈宮口分泌物，使用宮頸液基細胞專用刷置入宮頸管內(nèi)，采集患者宮頸分泌物。取出后放入含有液基細胞處理試劑的專用容器內(nèi)，反復(fù)洗刷大約10 次后進行送檢。利用全自動液基薄層細胞制片機將細胞制成薄層細胞涂片，采用德國徠卡儀器有限公司的全自動免疫組化染色儀切片染色。P16、Ki-67 雙染采用德國羅氏公司的PLUS 細胞學(xué)試劑盒，采用免疫細胞化學(xué)法對細胞制片進行P16、Ki-67 免疫化學(xué)雙染色。設(shè)置陰性與陽性對照，由3 位專家們（副高及其以上職稱，8年及其以上工作經(jīng)驗）依次仔細閱片，同一細胞內(nèi)同時出現(xiàn)P16 與Ki-67 信號的胞質(zhì)棕染和胞核紅染，表明P16、Ki-67 雙染陽性。同時取同一樣本，進行P16、Ki-67 單染染色，P16 胞質(zhì)棕染代表為陽性，Ki-67 胞核紅染為陽性。

1.3 病理學(xué)檢查 所有人群都給予病理檢查，對可疑病變部位進行多點組織活檢，嚴(yán)格進行宮頸活檢病理分級，由臨床經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師（副高及其以上職稱，5 年及其以上工作經(jīng)驗）進行判斷。包括宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN1）級、CIN 2 級、CIN 3 級與宮頸癌等級別。以病理檢查作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，判斷上述檢測方法的敏感性與特異性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS26.00 軟件分析處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗；計量資料用（±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理檢查結(jié)果 在1 250 例患者中，病理檢查為CIN 1 級600 例、CIN 2 級320 例、CIN 3 級180例、宮頸癌150 例，其中宮頸癌占比12.00%。

2.2 兩組宮頸液基細胞P16、Ki-67 陽性情況對比宮頸癌組的宮頸液基細胞P16、Ki-67 單染陽性與P16、Ki-67 雙染陽性分別為98.00% 、98.67% 、97.33%，非宮頸癌組分別為40.55%、49.27%、21.00%，兩組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組宮頸液基細胞P16、Ki-67 陽性情況對比[例（%）]

2.3 診斷價值 在1 250 例患者中，宮頸液基細胞P16、Ki-67 單染陽性與P16、Ki-67 雙染陽性對宮頸癌的診斷敏感性分別為98.00%、98.67%、97.33%，診斷特異性分別為59.45%、50.73%、79.00%。見表3、表4、表5、表6。

表3 宮頸液基細胞P16 單染檢測在宮頸異常患者診斷情況（例）

表4 宮頸液基細胞Ki-67 單染檢測在宮頸異常患者診斷情況（例）

表5 宮頸液基細胞P16、Ki-67 雙染檢測在宮頸異常患者診斷情況（例）

表6 宮頸液基細胞P16、Ki-67 檢測診斷價值[%（例/ 例）]

3 討論

宮頸癌是女性生殖道主要惡性腫瘤之一，隨著宮頸癌篩查的普及，體外宮頸癌的檢出率也逐年提升，嚴(yán)重危害了患者的生命健康及生存質(zhì)量[9]。宮頸癌的早期診斷對改善患者預(yù)后具有重要價值，且宮頸病變進展到宮頸癌的時間比較長，也為早期發(fā)現(xiàn)與早期干預(yù)提供了基礎(chǔ)。傳統(tǒng)宮頸涂片是宮頸癌的主要診斷方法，但操作時間比較長，且具有很強的主觀性，仍有假陰性的問題存在[10]。人乳頭瘤病毒檢測的敏感性比較高，對于宮頸癌診斷的特異性有待增加。因此如何提高宮頸癌篩查的靈敏度及特異度，探尋更加便捷、高效的檢測方法具有重要價值[11]。在1 250 例患者中，病理檢查為CIN 1 級600 例、CIN 2級320 例、CIN 3 級180 例、宮頸癌150 例，其中宮頸癌占比12.00%（宮頸癌組）；宮頸癌組的年齡、體質(zhì)量指數(shù)、心率、受教育年限、收縮壓、舒張壓等與非宮頸癌組對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），表明宮頸異常患者中宮頸癌的發(fā)病率比較高，但從臨床一般資料很難進行鑒別診斷。

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，P16、Ki-67 雙染作為一種現(xiàn)代化宮頸癌篩查手段，得到了廣泛重視。P16 是參與細胞周期調(diào)控的抑制劑，而Ki-67 是增殖細胞的核抗原基因。Ki-67 過表達則預(yù)示細胞處于細胞周期進展中的增殖活躍期，過表達P16 反映細胞處于細胞周期的阻滯期[12]。細胞正常狀態(tài)下兩者的表達互相制約[13]。但同一細胞出現(xiàn)兩者共同表達，也就是P16、Ki-67 雙染，則提示細胞周期失調(diào)，容易出現(xiàn)宮頸癌[14]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組的宮頸液基細胞P16、Ki-67 單染陽性與P16、Ki-67 雙染陽性分別為98.00%、98.67%、97.33%，非宮頸癌組分別為40.55%、49.27%、21.00%，兩組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明宮頸癌患者的宮頸液基細胞P16、Ki-67 雙染多表現(xiàn)為陽性狀況。有研究顯示，宮頸活檢病變程度越嚴(yán)重的患者，P16、Ki-67 雙染陽性率越高，CIN 3 級患者的P16、Ki-67 雙染陽性率高于CIN 2 級患者，表明P16、Ki-67 在宮頸細胞中共表達能強烈提示宮頸細胞高級別病變[15]。

宮頸癌的具體發(fā)病機制還不明確，主要由宮頸異常發(fā)展而來，且發(fā)展周期較長。宮頸癌的預(yù)后一般較差，但進行早期診斷與早期干預(yù)，可有效逆轉(zhuǎn)這個階段，促進改善患者的預(yù)后[16]。P16、Ki-67 雙染是近年來在廣泛使用的免疫細胞化學(xué)方法，P16 蛋白是細胞周期依賴性激酶抑制劑，對細胞增殖和分裂起負調(diào)節(jié)作用[17]。Ki-67 具有很好的增殖活力，是增殖性細胞核抗原，Ki-67 隨著細胞惡變程度的升高表達率也升高[18]。本研究結(jié)果顯示，在1 250 例患者中，宮頸液基細胞P16、Ki-67 單染陽性與P16、Ki-67雙染陽性對宮頸癌的診斷敏感性分別為98.00%、98.67%、97.33%，診斷特異性分別為59.45%、50.73%、79.00%，表明宮頸液基細胞P16、Ki-67 雙染檢測在宮頸異常患者診斷中的應(yīng)用可在保持敏感性的基礎(chǔ)上，提高診斷特異性。從機制上分析，作為細胞周期失調(diào)標(biāo)志物，P16、Ki-67 與人乳頭瘤病毒感染尤其是持續(xù)感染緊密相關(guān)。有研究顯示，P16、Ki-67 雙染篩查宮頸惡性病變的靈敏度與人乳頭瘤病毒檢測接近[19-20]。但P16 染色陽性并不局限于發(fā)生在宮頸細胞中，在輸卵管上皮細胞、內(nèi)膜細胞中也能表達，P16 單染染色陽性的診斷特異性有待提高[21～22]。由于時間問題，本研究沒有對其他方法進行對比分析，納入分析的指標(biāo)比較少，將在下一步研究中探討。