血清抗體ELISA、TPPA聯合檢測在梅毒診斷中的應用

劉玲玲

商丘市立醫院檢驗科 (河南 商丘 476000)

梅毒為一種系統性性傳播疾病，早期可多種組織器官，隨病情進展可侵犯至心血管、神經系統，對患者生命安全造成一定威脅[1-2]。報道顯示[3]，梅毒可提高機體感染艾滋病風險，經母體胎盤可傳播至胎兒，引起不良妊娠結局。因此，積極探討梅毒早期篩查診斷方案具有重大意義。梅毒螺旋體抗體檢測為臨床診斷梅毒的常用方案，其中酶聯免疫吸附試驗(ELISA)具有良好靈敏度，可通過自動化檢測系統進行檢測，具有簡便快捷、結果客觀準確等優點[4]。明膠顆粒凝集試驗(TPPA)利用梅毒螺旋體毒株制作抗原，測定特異性抗體，具有較高穩定性，且無需使用特定儀器[5]。但目前臨床關于其聯合應用于梅毒評估中相關研究鮮有，基于此，本研究試分析血清抗體ELISA、TPPA對梅毒的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料經我院倫理委員會審核批準，選取126例我院2020年8月～2022年8月就診的疑似梅毒患者，其中男68例，女58例，年齡21～55歲，平均(32.58±3.45)歲；臨床癥狀：硬下疳36例，扁平濕疣25例，生殖器潰瘍41例，梅毒疹24例。

1.2 納入及排除標準

納入標準：均經臨床初步診斷為疑似梅毒患者；可接受本研究檢查方案；知曉本研究，并簽訂同意書。排除標準：梅毒復發、二次感染者；合并重大臟器功能障礙；入院前1個月接受過抗生素治療者；合并其他感染型疾病；精神障礙或溝通障礙者。

1.3 方法標本采集：采集入院后外周靜脈血3mL，37℃條件下經離心半徑8cm、3500r/min離心10min后，分離血清、血漿于保存待測。

主要儀器與試劑：ELISA試劑盒購于北京萬泰生物藥業股份有限公司，TPPA試劑盒購于珠海麗珠試劑股份有限公司，選用儀器分別為北京白洋BY-400C型醫用離心機、煙臺艾德康ELISA400全自動酶免儀、江蘇新康600-A型電熱恒溫水浴箱、上海旌派自動梅毒旋轉振蕩器。

ELISA檢測：將濃縮洗滌液稀釋20倍，編號樣品對應微孔板，每板設置1孔空白對照、2孔陽性對照及3孔陰性對照，分別于相應孔內加入陰、陽對照100ul，于37℃條件下溫育60min，采用洗板機洗滌5遍，每孔內加入酶標試劑100ul，空白對照孔無需加入，于37℃條件下溫育30min，采用洗板機洗滌5遍，每孔內加入顯色劑A、B各50ul，振蕩均勻后避光顯色30min，每孔內加入終止液50ul，振蕩均勻后10min內測定結果，觀察并記錄反應圖像，采用酶標儀(波長于450/630nm處)用空白孔調零后，測量各孔吸光度(A)。其中A值＜臨界值判定為陰性，≥臨界值判定為陽性，臨界值=陰性對照孔A均值+0.18.

TPPA檢測：采用微量滴管將血清稀釋液滴加至微量反應板第1孔內，第2孔至最后一孔內各滴加1滴，取25ul樣品加入第1孔內，采用2n方式從第1孔稀釋至第4孔。于第3孔中滴加25ul未致敏粒子，第4孔至最后一孔內各滴加25ul致敏粒子。采用平板混合器混合30s，加蓋后靜置2h。發生凝集反應則判定為陽性。

梅毒分期評估：一期：合并生殖器潰瘍、硬下疳等臨床癥狀，梅毒特異性IgG抗體、IgM抗體或梅毒非特異性抗體中一項以上為陽性；二期：合并扁平濕疣、梅毒疹或黏膜斑等臨床癥狀，梅毒特異性IgG抗體、IgM抗體或梅毒非特異性抗體中一項以上為陽性；潛伏期：無梅毒既往史及相關臨床表現，梅毒特異性IgG抗體、IgM抗體或梅毒非特異性抗體中一項以上陽性。

1.4 觀察指標(1)比較血清抗體ELISA、TPPA單獨診斷結果。(2)比較血清抗體ELISA、TPPA聯合診斷結果，聯合診斷結果采用并聯原則。(3)比較血清抗體ELISA、TPPA診斷效能。(4)比較血清抗體ELISA、TPPA對不同分期梅毒陽性檢出率。

1.5 統計學方法采用SPSS 23.0軟件對不同類型數據進行相關處理分析，用EXCEL軟件建立數據庫，常規進行邏輯檢錯，計數資料用n(%)表示，兩組間比較行χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 血清抗體ELISA、TPPA單獨診斷結果經血清抗體ELISA檢測結果顯示，陽性37例，陰性89例；經血清抗體TPPA檢測結果顯示，陽性38例，陰性88例。見表1。

表1 血清抗體ELISA、TPPA單獨診斷結果

2.2 血清抗體ELISA、TPPA聯合診斷結果經血清抗體ELISA、TPPA聯合診斷結果顯示，126例疑似梅毒患者中，陽性47例，陰性79例，診斷靈敏度為93.75%(45/48)、特異度為97.44%(76/78)、準確率為96.03%(121/126)。見表2。

表2 血清抗體ELISA、TPPA聯合診斷結果

2.3 血清抗體ELISA、TPPA單獨、聯合診斷效能與血清抗體ELISA、TPPA單獨診斷比較，聯合診斷靈敏度93.75%(45/48)、準確率為96.03%(121/126)較高，漏診率6.25%(3/48)較低，差異顯著(P＜0.05)。見表3。

表3 血清抗體ELISA、TPPA單獨、聯合診斷效能n(%)

2.4 梅毒分期評估價值經血清抗體結合臨床癥狀評估，48例梅毒患者中，一期20例，二期11例，潛伏期17例。與血清抗體ELISA、TPPA單獨診斷比較，聯合診斷對于梅毒一期陽性檢出率較高，差異顯著(P＜0.05)。見表4。

表4 梅毒分期評估價值n(%)

3 討 論

梅毒為一種由梅毒螺旋體感染引起的性疾病，感染后可累計多種臟器，臨床癥狀較為復雜，且病程較長，早期診斷存在一定難度[6]。報道顯示[7-8]，血清學為診斷梅毒的主要方案，通過非特異性類脂質抗體檢測具有較高敏感度，但反應素也存在于非梅毒患者中，且早期梅毒患者反應素出現時間較晚，反應素滴度下降時易發生前滯現象，存在一定局限性。因此，積極探討一種早期梅毒篩查診斷方案具有重大意義。

梅毒螺旋體鏡檢為臨床診斷梅毒“金標準”，可通過暗視野顯微鏡進行觀察，結合臨床癥狀、性接觸史等可進行確診，但梅毒螺旋體鏡檢需取病灶組織滲出物、淋巴結穿刺液或組織研磨液，患者接受度較低，不適用于篩查診斷[9]。血清抗體ELISA為一種基因功能特異性檢測技術，可通過檢測人血清、血漿標本中梅毒螺旋體IgG抗體進行診斷，具有較高敏感度，且ELISA法檢測可利用全自動酶免儀，結果清晰易整理，有利于大樣本量檢測，適用于早期篩查[10]。本研究結果發現，血清抗體ELISA檢測對于梅毒診斷靈敏度為72.92%、特異度為97.44%、準確率為88.09%，具有一定診斷價值，可用于早期初步篩查診斷中。分析本研究ELISA檢測存在一定假陽性率原因在于，ELISA檢測為梅毒IgM、IgG混合抗體，其中IgG抗體在治愈后仍存在一定陽性率，且部分皮膚病、自身免疫疾病及血清纖維蛋白異常患者均可引起ELISA檢測陽性[11-12]。因此，單純通過ELISA檢測部分梅毒患者易出現漏診、誤診現象，無法評估梅毒活動狀態及療效，可聯合其他檢測方案進行診斷，以提高診斷準確性。

本研究通過TPPA檢查結果發現，TPPA對于梅毒診斷準確率為90.48%，具有較高診斷價值。TPPA為一種通過梅毒螺旋體毒株制作抗原檢測特異性抗體的診斷方案，當人體感染梅毒螺旋體后，體內可產生梅毒螺旋體抗體，其中TP抗體為梅毒螺旋體的特有抗體，因此可通過TPPA檢測特異性抗體進行診斷，且其試劑具有較強穩定性，結果較為準確[13]。本研究還發現，血清抗體ELISA、TPPA聯合診斷靈敏度93.75%、準確率為96.03%顯著高于二者單獨診斷，可有效降低漏診率，提示臨床可通過血清抗體ELISA、TPPA聯合檢測進行早期篩查診斷。報道顯示[14]，梅毒患者感染后梅毒螺旋體抗體可在體內終生保留，且不隨患者病情進展、治療變化，因此TPPA檢測結果具有較強穩定性，不易出現假陽性反應，可有效彌補血清抗體ELISA檢測缺點。但TPPA檢測自動化程度較低，需通過肉眼進行判斷結果，無法保存檢測數據，且檢測時需將樣本進行系列稀釋，不利于大批量樣本篩查，因此血清抗體ELISA、TPPA檢測可相互彌補不足，臨床可先通過ELISA進行初步篩查后，再行TPPA檢測進行確診[15]。本研究結果還發現，血清抗體ELISA、TPPA聯合診斷相較于單獨診斷對于梅毒一期陽性檢出率較高，進一步說明二者聯合應用對梅毒具有較高的診斷價值，為臨床病情分期提供參考。

綜上所述，血清抗體ELISA、TPPA聯合檢測對于梅毒具有較高診斷價值，為臨床早期篩查診斷、病情分期提供依據，以制定相應干預方案。