敲低CD73 的表達(dá)對(duì)人肺腺癌H1975 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力的影響及其機(jī)制△

肖文華，黃真，劉鳳娟，張弘，蘇紅，孫榮麗

1 青島大學(xué)青島醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266042 康復(fù)大學(xué)青島中心醫(yī)院（青島市中心醫(yī)院）2 院長(zhǎng)辦公室，3 藥物臨床試驗(yàn)中心一期病房，4 呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，5 基層醫(yī)療科，山東 青島 266042

中國(guó)國(guó)家癌癥中心統(tǒng)計(jì)報(bào)告顯示，肺癌是中國(guó)發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤[1]。肺癌的常見(jiàn)病理類(lèi)型為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC），NSCLC 中又以肺腺癌最為多見(jiàn)，占所有NSCLC 病理類(lèi)型的50%以上，且呈持續(xù)上升趨勢(shì)[2]。肺腺癌患者的病死率一直處于較高水平，中晚期肺腺癌患者的5 年生存率不足20%[3]。CT 等影像學(xué)檢查的普及明顯提高了早期肺癌的診斷率，降低了病死率，但對(duì)于中晚期肺癌患者無(wú)明顯受益[4]。近年來(lái)，隨著免疫檢查點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)及免疫檢查點(diǎn)抑制劑的應(yīng)用，患者的預(yù)后和生活質(zhì)量得到了明顯改善，且不良反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較低，表明免疫治療具有良好的發(fā)展前景[5-6]。盡管如此，仍然有一部分患者不能從現(xiàn)有的免疫治療中獲益。因此，積極探索新的潛在治療靶點(diǎn)至關(guān)重要。胞外5’-核苷酸酶（5’-nucleotidase ecto，NT5E），又稱(chēng)為CD73，是一種多功能跨膜糖蛋白，參與細(xì)胞外腺苷的生成，與免疫、炎癥和腫瘤等多種病理、生理反應(yīng)相關(guān)[7]。有研究表明，CD73 在多種腫瘤中高表達(dá)，且患者大多預(yù)后不良[8-11]，但其促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的具體作用機(jī)制尚未完全清楚，特別是CD73 促進(jìn)肺腺癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制鮮有報(bào)道。本研究探討敲低CD73的表達(dá)對(duì)人肺腺癌H1975 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力的影響，并進(jìn)一步探索其可能的機(jī)制，以期為肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制和治療方法的研究提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 細(xì)胞和試劑

人肺腺癌H1975 細(xì)胞購(gòu)自武漢普諾賽生命科技有限公司。慢病毒HBLV-ZsGreen-PURO 購(gòu)自上海漢恒科技公司。胎牛血清購(gòu)自以色列Biological Industries 公司，Matrigel 基質(zhì)膠、RPMI 1640 培養(yǎng)基、Transwell 細(xì)胞培養(yǎng)小室均購(gòu)自美國(guó)Corning公司，CD73、磷脂酰肌醇3 激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）p85a 抗體均購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司，磷酸化PI3K（phosphorylated PI3K，p-PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又稱(chēng)AKT）抗體均購(gòu)自美國(guó)ImmunoWay 公司，磷酸化AKT（phosphorylated AKT，p-AKT）抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology 公司，E-上皮鈣黏素（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）、辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）、羊抗兔免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）抗體均購(gòu)自武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司。本研究經(jīng)過(guò)青島市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)（KY202217502）。

1.2 人肺腺癌H1975 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染

將人肺腺癌H1975 細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素雙抗的RPMI 1640 完全培養(yǎng)基中，置于37 ℃、5% CO2的恒溫箱中常規(guī)培養(yǎng)。細(xì)胞消化離心后置入完全培養(yǎng)基重懸，配制1.5×105/ml 的細(xì)胞懸液，并加入6 孔板中（每孔接種1 ml）。待細(xì)胞密度生長(zhǎng)至50%左右，將原培養(yǎng)基棄去，每孔加入5 μg/ml 聚凝胺混合培養(yǎng)基1 ml。然后每孔加轉(zhuǎn)染慢病毒60μl[感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）=40]，4 h 后將混合培養(yǎng)基補(bǔ)齊至2 ml。轉(zhuǎn)染24 h 后棄去含病毒的培養(yǎng)基，換為新鮮完全培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染72 h 后置于熒光顯微鏡下觀(guān)察綠色熒光蛋白表達(dá)情況，若細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定，換上濃度適當(dāng)?shù)暮堰拭顾兀ū狙芯苦堰拭顾貪舛葹? μg/ml）的新鮮完全培養(yǎng)基進(jìn)行篩選培養(yǎng)，待無(wú)明顯細(xì)胞死亡后視為未轉(zhuǎn)染的正常細(xì)胞已全部殺死，此時(shí)更換新的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，定期重復(fù)篩選。將轉(zhuǎn)染慢病毒HBLV-ZsGreen-PURO NC 的人肺腺癌H1975細(xì)胞作為H1975-NC 組，將轉(zhuǎn)染3 種不同位點(diǎn)敲低CD73表達(dá)的慢病毒HBLV-h-CD73短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）-ZsGreen-PURO 的人肺腺癌H1975 細(xì)胞分別作為H1975-shCD73-1 組、H1975-shCD73-2 組、H1975-shCD73-3 組，以未轉(zhuǎn)染人肺腺癌H1975 細(xì)胞作為空白對(duì)照組。

1.3 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）篩選敲低效果最明顯的轉(zhuǎn)染細(xì)胞

分別收集空白對(duì)照組、H1975-NC 組、H1975-shCD73-1 組、H1975-shCD73-2 組、H1975-shCD73-3組細(xì)胞至1.5 ml 離心管中，加入適量的放射免疫沉淀（radio-immunoprecipitation assay，RIPA）裂解液和苯甲基磺酰氟（phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF）混合液（100∶1）于冰上裂解30 min 后低溫離心，取上清液，加入適量蛋白上樣緩沖液置于100 ℃金屬浴鍋中加熱10 min，提取總蛋白后進(jìn)行電泳，然后轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，封閉后加入適量抗體溶液進(jìn)行孵育（抗體溶液根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋?zhuān)缓髮⑴渲频陌l(fā)光液滴加在PVDF 膜條帶上，于暗室內(nèi)進(jìn)行曝光處理。曝光結(jié)束后采用ImageJ 軟件分析蛋白條帶相對(duì)灰度。選取敲低效果最明顯的轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，作為H1975-sh 組。

1.4 CCK8 法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力

選取H1975-NC、H1975-sh 組細(xì)胞，制備濃度為5×104/ml 的細(xì)胞懸液。接種至6 孔板中，每孔中加入100μl 細(xì)胞懸液，加入100μl 完全培養(yǎng)基培養(yǎng)4、24、48、72 h 后，每孔加入10 μl CCK8 溶液，置于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)2 h，采用酶標(biāo)儀檢測(cè)H1975-NC、H1975-sh 組細(xì)胞450 nm 處的吸光度（optical density，OD）值，酶標(biāo)儀以H1975-NC 組為對(duì)照調(diào)零。

1.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力

選取H1975-NC 組、H1975-sh 組細(xì)胞加入至6孔板中，并接種等量細(xì)胞（H1975-sh 組細(xì)胞可適當(dāng)增加接種量）置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，顯微鏡下觀(guān)察到6 孔板內(nèi)長(zhǎng)滿(mǎn)細(xì)胞后消毒，用200 μl 槍頭沿直尺垂直底部橫線(xiàn)從頂部向底部劃線(xiàn)。然后每孔加入2 ml 含1%胎牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)基后于鏡下拍照，拍照完畢后繼續(xù)于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)24、48 h 時(shí)再次于鏡下拍照，觀(guān)察細(xì)胞遷移情況。

1.6 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力

將Matrigel 膠加入RPMI 1640 培養(yǎng)基按照1∶40 稀釋?zhuān)總€(gè)細(xì)胞培養(yǎng)小室中加入100 μl 稀釋好的Matrigel 膠，置于培養(yǎng)箱中靜置4 h 后取出，吸走小室內(nèi)未凝固的培養(yǎng)液，每個(gè)小室下方加入600 μl 完全培養(yǎng)基。收集H1975-NC 組、H1975-sh組細(xì)胞，用不含血清的RPMI 1640 培養(yǎng)基制備濃度為2.5×105/ml 的細(xì)胞懸液，每個(gè)小室內(nèi)加入200 μl 細(xì)胞懸液，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，然后將孔板繼續(xù)置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)16 h 后將孔板拿出，將小室浸入甲醇溶液中固定細(xì)胞，然后用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）清洗風(fēng)干后將小室浸入0.1%結(jié)晶紫溶液中染色，染色完成后用PBS 沖洗2 次，再將小室倒置晾干。最后將小室放在載玻片上置于顯微鏡下觀(guān)察，隨機(jī)選擇5 個(gè)視野進(jìn)行拍照并計(jì)算侵襲細(xì)胞數(shù)目。

1.7 Western blot 檢測(cè)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）、PI3K/AKT 信號(hào)通路標(biāo)志蛋白的表達(dá)水平

Western blot 檢測(cè)方法同1.3 部分，檢測(cè)H1975-NC 組、H1975-sh 組EMT 通路標(biāo)志蛋白E-cadherin、vimentin 的表達(dá)水平以及PI3K/AKT 信號(hào)通路標(biāo)志蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT 的表達(dá)水平，計(jì)算p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 8.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；以P﹤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Western blot 檢測(cè)細(xì)胞CD73 表達(dá)情況

慢病毒CD73shRNA 分別轉(zhuǎn)染人肺腺癌H1975 細(xì)胞后，熒光顯微鏡下觀(guān)察到穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光即表示轉(zhuǎn)染成功，通過(guò)嘌呤霉素篩選轉(zhuǎn)染成功細(xì)胞并殺死未轉(zhuǎn)染細(xì)胞，穩(wěn)定傳代進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)（圖1）。采用Western blot 檢測(cè)空白對(duì)照組、H1975-NC 組、H1975-shCD73-1 組、H1975-shCD73-2 組、H1975-shCD73-3 組的CD73 表達(dá)情況，結(jié)果顯示，5 組細(xì)胞的CD73 表達(dá)情況比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01），其中H1975-shCD73-2 組細(xì)胞CD73敲低效果最明顯，選取該組（即H1975-sh 組）細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。（圖1、圖2、表1）

圖1 熒光顯微鏡顯示慢病毒CD73 shRNA轉(zhuǎn)染人肺腺癌H1975細(xì)胞

圖2 Western blot檢測(cè)各組人肺腺癌H1975細(xì)胞CD73表達(dá)情況

表1 各組人肺腺癌H1975 細(xì)胞CD73 蛋白表達(dá)水平的比較（±s）

表1 各組人肺腺癌H1975 細(xì)胞CD73 蛋白表達(dá)水平的比較（±s）

組別空白對(duì)照組H1975-NC組H1975-shCD73-1組H1975-shCD73-2組H1975-shCD73-3組F值P值CD73蛋白表達(dá)水平0.942±0.053 0.887±0.047 0.446±0.063 0.312±0.049 0.513±0.145 36.23<0.01

2.2 敲低CD73 的表達(dá)對(duì)人肺腺癌H1975 細(xì)胞增殖能力的影響

采用CCK8 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H1975-NC 組、H1975-sh組細(xì)胞的增殖能力，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染4 h，H1975-NC組細(xì)胞與H1975-sh 組細(xì)胞OD 值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）；轉(zhuǎn)染24、48、72 h，H1975-sh 組細(xì)胞OD 值均明顯低于H1975-NC 組細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）。（表2）

表2 轉(zhuǎn)染不同時(shí)間H1975-NC組、H1975-sh組細(xì)胞OD值的比較

2.3 敲低CD73 的表達(dá)對(duì)人肺腺癌H1975 細(xì)胞遷移能力的影響

采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H1975-NC、H1975-sh組細(xì)胞遷移能力，結(jié)果顯示，培養(yǎng)24、48 h，H1975-sh組細(xì)胞的劃痕面積愈合率分別低于H1975-NC 組細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。（表3、圖3）

圖3 轉(zhuǎn)染不同時(shí)間H1975-NC組、H1975-sh組細(xì)胞遷移情況

表3 轉(zhuǎn)染不同時(shí)間H1975-NC 組、H1975-sh 組細(xì)胞劃痕面積愈合率的比較

2.4 敲低CD73 的表達(dá)對(duì)人肺腺癌H1975 細(xì)胞侵襲能力的影響

采用Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H1975-NC 組、H1975-sh 組細(xì)胞侵襲能力，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染16 h后，H1975-sh 組細(xì)胞侵襲數(shù)目為（146±15），少于H1975-NC 組細(xì)胞的（254±22），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.176，P﹤0.05）。（圖4）

圖4 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H1975-sh組、H1975-NC組細(xì)胞侵襲情況

2.5 敲低CD73 的表達(dá)對(duì)EMT 通路標(biāo)志蛋白E-cadherin、vimentin 表達(dá)的影響

Western blot 檢測(cè)各組人肺腺癌H1975 細(xì)胞EMT 通路標(biāo)志蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，空白對(duì)照組、H1975-NC 組、H1975-sh 組細(xì)胞E-cadherin、vimentin 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）；其中H1975-sh 組細(xì)胞E-cadherin 蛋白的相對(duì)表達(dá)量高于空白對(duì)照組和H1975-NC 組細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=20.95、10.62，P﹤0.05）；H1975-sh 組細(xì)胞vimentin 蛋白的相對(duì)表達(dá)量低于空白對(duì)照組和H1975-NC 組細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=31.30、7.77，P﹤0.05）。（表4）

表4 各組人肺腺癌H1975 細(xì)胞EMT 通路標(biāo)志蛋白E-cadherin、vimentin 相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

表4 各組人肺腺癌H1975 細(xì)胞EMT 通路標(biāo)志蛋白E-cadherin、vimentin 相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

組別空白對(duì)照組H1975-NC組H1975-sh組F值P值E-cadherin蛋白0.216±0.033*0.394±0.110*1.214±0.076 134.50<0.01 vimentin蛋白1.000±0.034*0.732±0.138*0.091±0.037 91.03<0.01

注：*與H1975-sh組細(xì)胞比較，P<0.05

2.6 敲低CD73 的表達(dá)對(duì)PI3K/AKT 通路蛋白表達(dá)情況的影響

采用Western blot 檢測(cè)H1975-NC 組、H1975-sh組人肺腺癌H1975 細(xì)胞PI3K/AKT 信號(hào)通路蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，H1975-sh組細(xì)胞p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 均低于H1975-NC 組細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。（表5）

表5 H1975-NC 組、H1975-sh 組人肺腺癌H1975 細(xì)胞p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 的比較（±s）

表5 H1975-NC 組、H1975-sh 組人肺腺癌H1975 細(xì)胞p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 的比較（±s）

組別H1975-NC組H1975-sh組t值P值p-PI3K/PI3K 1.298±0.322 0.416±0.211 2.33 0.017 p-AKT/AKT 2.485±0.805 0.694±0.364 7.33 0.042

3 討論

肺癌嚴(yán)重危害人類(lèi)健康，是全球腫瘤相關(guān)死亡的主要原因之一，其發(fā)病率和病死率均呈上升趨勢(shì)[12]。由于吸煙、職業(yè)危害、人口老齡化及環(huán)境等因素的影響，肺癌發(fā)病率居高不下。盡管現(xiàn)有治療手段較前已經(jīng)取得了非常大的進(jìn)展，但肺癌仍是中國(guó)發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤，確診時(shí)已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的晚期肺癌患者的5 年生存率僅為6%[13-15]。新靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)和免疫治療的出現(xiàn)將肺癌患者的5 年生存率提升至15%～50%[15]，明顯延長(zhǎng)了晚期肺癌患者的生存時(shí)間。盡管如此，也只有部分患者能從中獲益。因此，探索新的潛在治療靶點(diǎn)和進(jìn)一步明確肺癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制尤為重要。

CD73 可將腺苷一磷酸（adenosine monophosphate，AMP）水解為腺苷后與其受體結(jié)合，通過(guò)降低T 細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞等免疫細(xì)胞的免疫活性來(lái)減少免疫因子，增強(qiáng)主要免疫抑制因子的活性，從而引起免疫抑制，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[10]。此外，CD73 還可充當(dāng)黏附分子，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的相互作用，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移[16]。CD73 在多種腫瘤中高表達(dá)，說(shuō)明其對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展發(fā)揮重要作用，但具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步探索。

EMT 是各種生理、病理過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)，與胚胎和器官的生長(zhǎng)發(fā)育、組織再生和纖維化、腫瘤進(jìn)展和腫瘤干細(xì)胞特性密切相關(guān)[17]。EMT 過(guò)程中，上皮相關(guān)基因E-cadherin的表達(dá)受到抑制，而間質(zhì)相關(guān)基因vimentin的表達(dá)增強(qiáng)[18]，且受到諸多如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、骨形成蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）、WNT/β-catenin、Notch、Hedgehog 和受體酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase，RTK）等信號(hào)通路的共同調(diào)節(jié)[18-19]。有研究表明，PI3K/AKT 信號(hào)通路可促進(jìn)EMT 的發(fā)生并導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展[20-23]，但CD73 是否能促進(jìn)肺腺癌EMT 的發(fā)生及其具體機(jī)制目前尚不完全清楚。

本研究探討CD73 在肺腺癌細(xì)胞中的生物學(xué)作用及其機(jī)制，利用慢病毒CD73shRNA 轉(zhuǎn)染人肺腺癌H1975 細(xì)胞構(gòu)建CD73敲低細(xì)胞株，選取CD73敲低效果最明顯的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，敲低CD73的表達(dá)后，人肺腺癌H1975 細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力均受到抑制，說(shuō)明CD73可以促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。為進(jìn)一步探討CD73 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制，本研究采用Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞上EMT 通路上皮標(biāo)志蛋白E-cadherin、間質(zhì)標(biāo)志蛋白vimentin 以及PI3K/AKT 信號(hào)通路標(biāo)志蛋白的表達(dá)差異，結(jié)果顯示，H1975-sh 組細(xì)胞E-cadherin 蛋白的相對(duì)表達(dá)量高于空白對(duì)照組和H1975-NC 組細(xì)胞，vimentin 蛋白的表達(dá)量低于空白對(duì)照組和H1975-NC 組細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05），表明敲低CD73的表達(dá)促進(jìn)了E-cadherin 蛋白的表達(dá)，抑制了vimentin 蛋白的表達(dá)，從而表明敲低CD73的表達(dá)抑制了肺腺癌細(xì)胞EMT 的發(fā)生；此外，PI3K/AKT 磷酸化程度反映該信號(hào)通路的激活程度，本研究結(jié)果顯示，H1975-sh組細(xì)胞p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 均低于H1975-NC 組細(xì)胞，表明CD73 可能通過(guò)PI3K/AKT 信號(hào)通路促進(jìn)肺腺癌EMT 的發(fā)生，進(jìn)而導(dǎo)致肺腺癌進(jìn)展。

綜上所述，CD73 能促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，其機(jī)制可能與PI3K/AKT 信號(hào)通路和EMT 過(guò)程有關(guān)。