白花蛇舌草提取物通過AMPK/ATG5信號通路對急性胰腺炎大鼠肺損傷的保護作用機制研究

哈宗蘭 馬麗娜 馬瓊 甘桂芬

（1.青海大學附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學科，西寧 810000；2.青海大學附屬醫(yī)院放射科，西寧 810000）

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）為胰酶異常活化引起的胰腺損傷及“炎癥瀑布效應”，可累及肺、腎、腸等多器官引起功能損傷，導致患者死亡，其中肺是最易受AP影響的器官，AP中肺損傷發(fā)生率高達70%，是導致AP死亡的重要原因［1-2］。近年研究發(fā)現溶酶體缺陷引起的自噬效率降低，是AP“炎癥瀑布效應”產生及肺損傷的根本因素，提高自噬效率，也可抑制IL-1β成熟及分泌，達到治療肺部炎癥損傷的目的［3-4］。

5'-單磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）及自噬相關蛋白5（ATG5）是與炎癥-自噬相關的重要調節(jié)因子。AMPK活化可通過調控炎癥反應總開關，如核轉錄因子-κB（NF-κB）活化參與炎癥反應［5］；另一方面可直接或間接促進ATG5活化形成自噬泛素類復合物啟動自噬［6］。自噬前期泛素化重要調節(jié)因子ATG5可影響炎癥性疾病，如哮喘、膿毒癥、動脈粥樣硬化等炎癥性疾病預測、轉歸及預后等過程，成為研究熱點和焦點［7］。AMPK/ATG5通路在AP后肺組織損傷過程中的調控作用未見報道。

茜草科植物白花蛇舌草（Hedyotis diffusa）具有清熱解毒、消腫止痛作用，為治療AP的中藥常用組方之一［8］。現代藥理學發(fā)現白花蛇舌草的有效成分，如萜類、黃酮類、蒽醌類、甾醇類、有機酸類、多糖類及烷烴類等有廣泛的抗菌、抗炎及抗腫瘤作用，臨床可用于呼吸道感染、扁桃體炎、肺炎、膽囊炎、闌尾炎等疾病治療［9］。已有研究發(fā)現，含有白花蛇舌草的中藥組方可通過抑制自噬發(fā)揮抗癌作用［10］。但白花蛇舌草提取物是否也能通過調控自噬改善AP肺組織炎癥損傷還未見報道。本研究建立大鼠AP肺損傷模型，從炎癥-自噬相關通路AMPK/ATG5對此進行驗證，以期尋找緩解AP肺損傷的特異性藥物，為白花蛇舌草的開發(fā)應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級SD大鼠90只，體質量210～220 g，雌雄不限，購自中山大學（實驗動物中心東校區(qū)），生產許可證號：SCXK（粵）2021-0029。本研究經青海大學附屬醫(yī)院倫理委員會批準（IACUC-202101-07-013），符合3R原則。白花蛇舌草提取物（貨號：S27202，上海源葉生物科技有限公司，規(guī)格：100 g，純度：95%）；5%牛磺膽酸鈉（貨號：S16690，上海吉至生化科技有限公司）；AMPK激活劑（AICAR）（貨號：M00042-KDZ，北京百奧萊博科技有限公司）；自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）（貨號：M9281，上海北諾生物科技有限公司）；淀粉酶（AMY）、IL-1β、IL-6、IL-18 ELISA試劑盒（貨號：CR102284、CR102864、CR102851、CR102866，無錫云萃生物科技有限公司）；AMPK、p-AMPK、ATG5、溶酶體相關膜蛋白2（LAMP2）、自噬標志物LC3-Ⅱ/Ⅰ、自噬底物p62、泛素特異性蛋白酶10（UPS10）、pro-IL-1β、胰蛋白酶原活化肽（TAP）抗體、HRP羊抗兔二抗均購自美國Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 模型建立及分組 SD大鼠隨機分為假手術組、模型組、提取物組、3-MA組、AICAR組、提取物+AICAR組，每組15只。除假手術組外，其余各組大鼠均參照文獻［11］麻醉、暴露胰腺、穿刺膽胰管、按1 ml/kg勻速（0.2 ml/min）輸入5%牛磺膽酸鈉復制AP模型。假手術組僅暴露膽胰管，不穿刺注藥。大鼠均于清醒后開始給藥。提取物組腹腔注射白花蛇舌草提取物溶液1 ml/kg（濃度1 g/ml），1次/d［12］；3-MA組手術造模前2 d腹腔注射3-MA溶液（100 mmol/L，2 μl/只）1次，手術造模后再給藥1次［13］；AICAR組造模前1 d腹腔注射AICAR（500 mg/kg），造模后再給藥1次［14］；提取物+AICAR組腹腔注射白花蛇舌草提取物同時腹腔注射AICAR；假手術組及模型組腹腔注射10 ml/kg生理鹽水。各組連續(xù)給藥14 d后觀察大鼠癥狀，并進行后續(xù)試驗。

1.2.2 血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平檢測 末次給藥結束后12 h取成活大鼠，麻醉后取腹主動脈血，ELISA檢測血清AMY及IL-1β、IL-6、IL-18水平。

1.2.3 腹水量及肺濕/干重比（W/D）檢測 各組隨機取6只大鼠，抽取腹水，量筒測量體積；處死大鼠，取左右兩肺及胰腺組織，左肺及胰腺組織于4%多聚甲醛固定24 h后制成石蠟切片（5 μm）備用；右肺組織精密稱重后作為濕重（W），60 ℃烘干至恒重后精密稱取重量作為干重（D），計算W/D。

1.2.4 HE染色觀察胰腺及肺組織病理損傷 取肺及胰腺組織石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察拍照，隨機取5個視野，采用Schmidt及Holfbauer評分法對胰腺及肺病理損傷進行評分，均以0～4分為評分等級，0分為無病變，4分為整個視野內出現病變［11］。

1.2.5 透射電鏡觀察胰腺及肺自噬狀況 各組剩余大鼠處死后，取新鮮胰腺及肺組織，剪取1 cm×1 cm組織塊，電鏡處理并觀察自噬小體及自噬泡形成狀況。

1.2.6 Western blot檢測蛋白表達 取新鮮胰腺及肺組織，分別剪碎、研磨、勻漿，提取蛋白，BCA法測定濃度，取60 μg行電泳及電轉膜反應，4 ℃下滴加1∶900稀釋的一抗（AMPK、p-AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62、UPS10、pro-IL-1β、LAMP2、TAP）、1∶1 300稀釋的內參抗體β-actin孵育24 h，室溫滴加HRP羊抗兔二抗（1∶1 500）孵育40 min，增強化學發(fā)光法顯影曝光，Quantity One軟件檢測條帶相對灰度值。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS24.0軟件統(tǒng)計數據，±s表示數據，獨立樣本分析行t檢驗，組間比較行單因素方差分析，組間多重比較行SNK-q檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 白花蛇舌草提取物對大鼠一般行為變化的影響 假手術組大鼠無死亡，進食及活動正常。模型組有1只大鼠因肺部及胰臟糜爛壞死而死亡，成活大鼠攝食及飲水減少，毛發(fā)松亂，呼吸急促，大便少。提取物組及3-MA組大鼠攝食及飲水有所增多，呼吸逐漸平緩。AICAR組有2只大鼠死亡，解剖發(fā)現肺及胰腺粘連及壞死嚴重，攝食、飲水及呼吸狀況較模型組嚴重。提取物+AICAR組無死亡，攝食及飲水較模型組相近。

2.2 白花蛇舌草提取物對大鼠血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平的影響 與假手術組相比，模型組大鼠血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平升高（P＜0.05）。與模型組相比，提取物組、3-MA組大鼠血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平降低（P＜0.05），且提取物組改善效果優(yōu)于3-MA組（P＜0.05）。AICAR組大鼠血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平較模型組進一步升高（P＜0.05）。提取物+AICAR組血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平高于提取物組（P＜0.05，表1）。

表1 大鼠血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平比較（±s）Tab.1 Comparison of serum AMY， IL-1β， IL-6 and IL-18 levels in rats （±s）

表1 大鼠血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平比較（±s）Tab.1 Comparison of serum AMY， IL-1β， IL-6 and IL-18 levels in rats （±s）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with extract group， 3）P＜0.05.

Groups Sham operation Model Extract 3-MA AICAR Extract+AICAR n IL-6/（pg·ml-1）IL-18/（pg·ml-1）12.15±1.20 128.90±8.801）33.29±3.212）54.00±6.012）3）198.82±10.722）3）98.97±9.802）3）15 14 15 15 13 15 AMY/（U·L-1）1 201.18±120.00 6 659.78±220.111）2 007.05±135.942）3 968.32±150.212）3）9 863.27±326.202）3）4 966.49±137.352）3）IL-1β/（pg·ml-1）24.28±2.32 126.74±9.121）56.99±5.602）70.55±7.232）3）216.22±20.242）3）90.07±9.332）3）30.05±3.01 120.64±10.021）40.09±4.012）50.15±5.032）3）250.62±20.042）3）80.67±8.032）3）

2.3 白花蛇舌草提取物對大鼠腹水量及肺W/D水平的影響 與假手術組相比，模型組大鼠腹水量及肺W/D水平升高（P＜0.05）。與模型組相比，提取物組、3-MA組大鼠腹水量及肺W/D水平降低（P＜0.05），且提取物組改善效果優(yōu)于3-MA組（P＜0.05）。AICAR組大鼠腹水量及肺W/D水平較模型組進一步升高（P＜0.05）。提取物+AICAR組腹水量及肺W/D水平高于提取物組（P＜0.05，表2）。

表2 大鼠腹水量及肺W/D水平比較（±s，n=6）Tab.2 Comparison of ascites volume and lung W/D level in rats （±s，n=6）

表2 大鼠腹水量及肺W/D水平比較（±s，n=6）Tab.2 Comparison of ascites volume and lung W/D level in rats （±s，n=6）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with extract group， 3）P＜0.05.

Lung W/D 4.28±0.82 7.74±1.121）4.79±0.602）6.05±0.932）3）9.92±1.242）3）6.37±0.732）3）Groups Sham operation Model Extract 3-MA AICAR Extract+AICAR Ascites volume/ml 0.48±0.06 10.48±1.111）2.05±0.642）5.32±1.012）3）16.23±2.202）3）8.49±1.252）3）

2.4 白花蛇舌草提取物對大鼠胰腺及肺組織病理損傷的影響 HE染色可見假手術組胰腺及肺組織結構正常，無水腫及炎癥浸潤現象；模型組大鼠可見胰腺腺泡水腫、小葉間隙增寬、片狀壞死及炎癥浸潤明顯，肺間質水腫、肺泡壁增厚及炎癥浸潤明顯，胰腺及肺組織病理評分高于假手術組（P＜0.05）。提取物組及3-MA組大鼠胰腺及肺組織上述病理損傷較模型組減輕，胰腺及肺組織病理評分低于模型組（P＜0.05），且提取物組改善效果優(yōu)于3-MA組（P＜0.05）。AICAR組大鼠胰腺及肺組織病理評分較模型組進一步升高（P＜0.05）。提取物+AICAR組胰腺及肺組織病理評分較提取物組升高（P＜0.05，圖1、表3）。

圖1 大鼠胰腺及肺組織HE染色（×400）Fig.1 HE staining of rat pancreas and lung tissues （×400）

表3 大鼠胰腺及肺組織病理學評分比較（±s，n=6）Tab.3 Comparison of histopathological scores of rat pancreas and lungs （±s，n=6）

表3 大鼠胰腺及肺組織病理學評分比較（±s，n=6）Tab.3 Comparison of histopathological scores of rat pancreas and lungs （±s，n=6）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with extract group， 3）P＜0.05.

Schmidt score of pancreas/point 0.17±0.05 3.50±0.281）1.17±0.322）1.67±0.282）3）4.17±0.322）3）2.83±0.262）3）Groups Sham operation Model Extract 3-MA AICAR Extract+AICAR Lung Holfbauer score/point 0.28±0.02 3.44±0.321）0.99±0.092）1.55±0.132）3）3.92±0.642）3）2.67±0.432）3）

2.5 白花蛇舌草提取物對大鼠胰腺自噬-胰蛋白酶活化-炎癥水平的影響 電鏡觀察可見假手術組胰腺組織中未見明顯自噬結構。模型組可見大量雙層膜結構的自噬體及空泡化自噬結構，自噬結構中包含大量未消化內容物及胰蛋白酶原。提取物組及3-MA組可見自噬體及自噬空泡結構減少。AICAR組自噬體及自噬空泡結構進一步增多。提取物+AICAR組自噬體及自噬空泡結構較提取物組增多。與假手術組相比，模型組大鼠胰腺組織自噬底物p62、TAP、pro-IL-1β表達升高（P＜0.05），溶酶體標志蛋白LAMP2表達降低（P＜0.05）。與模型組相比，提取物組及3-MA組大鼠p62、TAP、pro-IL-1β表達降低（P＜0.05），LAMP2表達升高（P＜0.05），且提取物組改善效果優(yōu)于3-MA組（P＜0.05）。AICAR組大鼠胰腺組織p62、TAP、pro-IL-1β表達較模型組進一步升高（P＜0.05），LAMP2表達較模型組進一步降低（P＜0.05）。與提取物組相比，提取物+AICAR組大鼠胰腺組織p62、TAP、pro-IL-1β表達升高（P＜0.05），LAMP2表達降低（P＜0.05，圖2、圖3、表4）。

圖2 大鼠胰腺組織自噬結構電鏡圖（×20 000）Fig.2 Electron microscopic observation of autophagy structure in rat pancreas （×20 000）

圖3 大鼠胰腺組織p62、TAP、pro-IL-1β、LAMP2蛋白表達免疫印跡圖Fig.3 Immunoblot of p62， TAP， pro-IL-1β， LAMP2 protein expressions in rat pancreas

表4 大鼠胰腺組織p62、TAP、pro-IL-1β、LAMP2蛋白表達比較（±s）Tab.4 Comparison of p62， TAP， pro-IL-1β， LAMP2 protein expressions in rat pancreas （±s）

表4 大鼠胰腺組織p62、TAP、pro-IL-1β、LAMP2蛋白表達比較（±s）Tab.4 Comparison of p62， TAP， pro-IL-1β， LAMP2 protein expressions in rat pancreas （±s）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with extract group， 3）P＜0.05.

Groups n p62/β-actin TAP/β-actin pro-IL-1β/β-actin LAMP2/β-actin Sham operation Model Extract 3-MA AICAR Extract+AICAR 9 8 9 9 7 9 1.16±0.09 0.33±0.031）1.00±0.092）0.79±0.072）3）0.19±0.012）3）0.67±0.072）3）1.13±0.07 2.10±0.191）1.36±0.122）1.79±0.162）3）2.79±0.232）3）1.80±0.182）3）1.00±0.11 2.29±0.201）1.44±0.132）1.89±0.192）3）2.95±0.212）3）1.89±0.182）3）1.09±0.08 2.43±0.211）1.49±0.112）1.91±0.202）3）2.99±0.222）3）1.90±0.182）3）

2.6 白花蛇舌草提取物對大鼠肺組織AMPK/ATG5通路及自噬-炎癥水平的影響 電鏡觀察可見假手術組大鼠肺組織板層小體豐富，有少量自噬體及溶酶體形成。模型組可見自噬小體及自噬空泡形成明顯，板層小體內容物減少。提取物組及3-MA組大鼠肺組織板層小體內容物逐漸豐富，自噬小體及自噬空泡明顯減少。AICAR組自噬體及自噬空泡進一步增多。提取物+AICAR組自噬體及自噬空泡較提取物組增多。與假手術組相比，模型組大鼠肺組織p-AMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β表達升高（P＜0.05），LAMP2表達降低（P＜0.05）。與模型組相比，提取物組及3-MA組大鼠p-AMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β表達降低（P＜0.05），LAMP2表達升高（P＜0.05），且提取物組改善效果優(yōu)于3-MA組（P＜0.05）。AICAR組大鼠肺組織p-AMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β表達較模型組進一步升高（P＜0.05），LAMP2表達較模型組進一步降低（P＜0.05）。與提取物組相比，提取物+AICAR組大鼠肺組織p-AMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β

表達升高（P＜0.05），LAMP2表達降低（P＜0.05，見表5、圖4、圖5）。

圖4 肺組織自噬結構觀察圖（×10 000）Fig.4 Observation of autophagy structure in lung tissue（×10 000）

圖5 大鼠肺組織p-AMPK、AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β、LAMP2蛋白表達免疫印跡圖Fig.5 Immunoblot of p-AMPK， AMPK， ATG5， LC3-Ⅱ/Ⅰ， UPS10， pro-IL-1β， LAMP2 protein expressions in rat lung tissues

表5 大鼠肺組織p-AMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β、LAMP2蛋白表達比較（±s）Tab.5 Comparison of p-AMPK/AMPK， ATG5， LC3-Ⅱ/Ⅰ， UPS10， pro-IL-1β， LAMP2 protein expressions in rat lung tissues（ ±s）

表5 大鼠肺組織p-AMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β、LAMP2蛋白表達比較（±s）Tab.5 Comparison of p-AMPK/AMPK， ATG5， LC3-Ⅱ/Ⅰ， UPS10， pro-IL-1β， LAMP2 protein expressions in rat lung tissues（ ±s）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with extract group， 3）P＜0.05.

Groups Sham operation Model Extract 3-MA AICAR Extract+AICAR n 9 8 9 9 7 9 p-AMPK/AMPK ATG5/β-actin LC3-Ⅱ/Ⅰ/LC3-ⅠUPS10/β-actin pro-IL-1β/β-actin LAMP2/β-actin 1.19±0.09 0.30±0.031）0.99±0.092）0.60±0.062）3）0.10±0.012）3）0.59±0.052）3）1.04±0.10 2.29±0.221）1.22±0.122）1.70±0.212）3）2.73±0.232）3）1.84±0.222）3）1.03±0.12 2.38±0.241）1.26±0.142）1.65±0.162）3）2.94±0.202）3）1.97±0.172）3）0.23±0.05 1.22±0.121）0.41±0.062）0.68±0.112）3）1.45±0.092）3）0.94±0.122）3）1.14±0.08 2.36±0.191）1.40±0.132）1.84±0.182）3）2.90±0.232）3）1.90±0.192）3）1.07±0.07 2.47±0.201）1.50±0.122）1.87±0.182）3）2.83±0.202）3）1.98±0.182）3）

3 討論

AP并發(fā)肺損傷仍是困擾醫(yī)學界的重要問題，對AP及肺并發(fā)癥發(fā)病機制的探究也迫在眉睫。研究認為AP患者胰蛋白酶原異常活化是導致胰腺細胞自我消化、腺泡破裂及炎癥介質釋放的關鍵因素，而肺最易受炎癥攻擊及機體微循環(huán)改變的影響發(fā)生功能性改變［15］，解釋了AP患者最易因肺部急性損傷而死亡的重要原因。本研究建立大鼠AP模型發(fā)現，大鼠出現胰腺腺泡水腫、片狀壞死及炎癥浸潤等胰腺病理損傷，血清AMY、炎癥因子IL-1β及IL-6、腹水量升高等AP癥狀出現同時，也出現肺水腫（肺W/D升高）、肺間質炎癥浸潤及肺泡壁增厚等肺組織結構損傷現象，提示大鼠出現AP及肺組織炎癥損傷現象，表明造模成功。研究認為抑制炎癥反應可明顯緩解AP后肺功能損傷，并促進患者存活［16］。大量研究發(fā)現中醫(yī)用清熱解毒、消癰散瘀方法可顯著改善AP及肺組織損傷［17］。白花蛇舌草有清熱解毒及消腫作用，是清熱解毒方劑中最常用的中藥之一，其提取物中的羥基蒽醌類、黃酮類、萜類等有效化合物有較好的抗炎、抗菌及抗腫瘤作用，可在短時間內控制大鼠因細菌感染或化學誘變引起的熱勢增長、炎癥病理狀態(tài)改變及免疫器官萎縮等作用［18］。本研究發(fā)現，給予AP肺損傷大鼠一定劑量白花蛇舌草提取物后，大鼠血清炎癥因子及AMY水平降低，胰腺及肺組織炎癥浸潤等病理損傷明顯緩解，提示白花蛇舌草可能是防治AP及肺組織炎癥損傷的潛在藥物。

自噬小體與自噬溶酶體結合形成的正常自噬可促進腺泡細胞清除、降解衰老及受損細胞器，發(fā)揮保護胰腺細胞作用，另外胰腺腺泡細胞也依賴于溶酶體和胰蛋白酶原，形成自噬系統(tǒng)降解腺泡酶原顆粒，發(fā)揮正常生理功能［19］。但AP患者中關鍵的組織蛋白酶B加工成熟缺陷引起的溶酶體缺陷，如LAMP2表達減少，可導致“自噬體”不能與“溶酶體”結合，而在腺泡細胞內積聚形成大液泡即“自噬性液泡”，并引起腺泡細胞空泡化、腺泡酶原顆粒積聚及活化，最終引發(fā)“炎癥瀑布效應”活化［20］。另外，AP患者血清IL-6及IL-1β升高，也可促進LC3Ⅰ及自噬體在肺泡胞漿內積聚而激活自噬，且高效率的自噬可靶向隔離并降解pro-IL-1β，阻斷IL-1β成熟及分泌，緩解肺組織炎癥損傷［21］。本研究在AP大鼠胰腺及肺組織檢測到自噬效率降低（自噬標志物LC3-Ⅱ/Ⅰ及自噬底物p62升高、溶酶體相關蛋白LAMP2表達降低、自噬體及自噬空泡大量積聚），胰腺組織胰蛋白酶原活化（TAP升高），及胰腺和肺組織pro-IL-1β表達升高，而用自噬抑制劑3-MA抑制自噬體形成提高自噬效率后，大鼠AP癥狀及肺組織病理損傷均明顯減輕，提示提高自噬效率可能從根本上阻斷溶酶體缺陷引起的胰酶原活化、胰腺損傷及“炎癥瀑布效應”，緩解AP及其并發(fā)癥。

AMPK及ATG5是與炎癥-自噬相關調節(jié)因子。研究證實IL-6、IL-18及IL-1β等炎癥因子升高可激活AMPK調控炎癥反應總開關，如NF-κB入核活化負調控炎癥因子釋放［22］，但AMPK磷酸化活化也可直接磷酸化ULK1，啟動Ⅲ類磷脂酰肌3-激酶效應器（Ptd Ins3P）效應蛋白WIPI活化并招募ATG5形成泛素類復合物，啟動自噬并介導自噬泡形成［23］。另外ATG5缺失可阻止IL-13刺激氣管上皮細胞分泌黏液緩解哮喘等炎癥疾病發(fā)展［24］。本研究在AP大鼠模型肺及胰腺組織檢測到AMPK及ATG5表達升高，用AMPK激活劑進一步促進AMPK激活后，大鼠表現出更為嚴重的炎癥及自噬效率降低，提示AMPK及ATG5活化可能進一步促進自噬小體積累，使自噬效率進一步減弱，大鼠表現出更為嚴重的炎癥反應。張浩瑞等［10］發(fā)現白花蛇舌草除抗炎作用外，也可調控自噬，發(fā)揮抗癌作用。本研究發(fā)現白花蛇舌草提取物處理后大鼠胰腺及肺組織出現自噬效率提高及炎癥IL-1β、pro-IL-1β表達降低，肺組織AMPK及ATG5活性抑制，且LAMP2表達升高及自噬效率提高，明顯優(yōu)于自噬抑制劑3-MA組，提示白花蛇舌草提取物可通過抑制AMPK及ATG5活性阻斷自噬體形成，并提高自噬效率，發(fā)揮抗AP及肺損傷炎癥損傷作用。AMPK激活劑可部分減弱白花蛇舌草提取物抑制AMPK及ATG5活性、提高自噬效率、抗AP及肺炎癥損傷作用。

綜上，白花蛇舌草提取物可通過抑制AMPK及ATG5活性阻斷自噬體形成，并提高自噬效率，發(fā)揮抗AP大鼠肺組織炎癥損傷作用，可能為闡明白花蛇舌草提取物抵御炎癥-自噬及防治AP并發(fā)癥的可能機制提供參考，但AMPK激活劑不能完全減弱白花蛇舌草提取物修復溶酶體缺陷、提高自噬效率及抗炎的作用，提示白花蛇舌草提取物還可能通過其他途徑修復AP溶酶體缺陷引起的自噬效率降低，具體機制有待后續(xù)探究。