離子色譜法測定甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉含量

鄧 杰，周長明，丁 銳，張雪艷

（北京市藥品檢驗研究院·國家藥品監督管理局創新藥物安全研究與評價重點實驗室·中藥成分分析與生物評價北京市重點實驗室，北京 102206）

甘油果糖氯化鈉注射液在臨床主要用于治療腦血管病、腦外傷、腦腫瘤、顱內炎癥及其他原因引起的急慢性顱內壓增高和腦水腫等［1］。其處方為甘油、果糖和氯化鈉3種主成分，無其他輔料，溶劑為注射用水，部分企業的甘油果糖氯化鈉注射液處方中含有適量鹽酸，用于調節pH。目前，甘油果糖氯化鈉注射液的質量標準有2020年版《中國藥典（二部）》［2］和國家藥品標準YBH13712021［3］。離子色譜法是一種用于分析陽離子、陰離子等離子性物質的檢測方法［4-6］，具有良好的選擇性和較高的靈敏度，逐漸成為測定各種陽離子或陰離子的必要方法［7-10］。離子色譜- 抑制電導法的背景電導能通過其抑制器明顯減少，且能有效增加分析物信號。本研究中建立了測定甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉含量的離子色譜法，旨在提高甘油果糖氯化鈉注射液的質量標準。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Dionex ICS-6000型離子色譜儀，Dionex CSRS 300型抑制器（規格為4 mm），均購自Thermo Fisher科技公司；頗爾PALL Cascada 型超純水系統（美谷富迪生物儀器＜上海＞有限公司）；XA205DU 型分析天平（梅特勒托利多儀器＜上海＞有限公司，精度為0.01 mg）。

1.2 試藥

氯化鈉標準品（批號為GBW06103e，含量為99.992%），氯化鉀標準品（批號為GBW06109b，含量為99.97%），均購自中國計量科學研究院；氯化銨標準品（國防科技工業應用化學一級計量站，批號為GBW＜E ＞060322，含量為99.98%）；氯化鎂容量分析用溶液標準品（北京海岸鴻蒙標準物質技術有限責任公司，批號為GBW ＜E ＞0084284，濃度為0.100 0 mol/L）；氯化鈣（美國Sigma-Aldrich 公司，批號為499609，含量為99.99%）；甲烷磺酸（分析純，上海麥克林生化科技有限公司）；水為超純水；甘油果糖氯化鈉注射液（廠家A，批號分別為A220117302，A220118301，A220314305；廠家B，批號分別為20022631，20022831，20030131；廠家C，批號為T21121303）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Dionex IonPacTMCS12A 分析柱（250 mm ×4 mm，8 μm），Dionex IonPacTMCG12A 保護柱（50 mm ×4 mm，8 μm）；淋洗液：25 mmol/L 甲烷磺酸溶液；流速：1.0 mL/min；檢測器：電導檢測器；抑制器電流：79 mA；柱溫：35 ℃；進樣量：25 μL。系統適用性試驗溶液在此色譜條件下的色譜圖見圖1，各陽離子間分離度均大于1.5，理論板數均大于2 000。

圖1 系統適用性試驗離子色譜圖1.Na + 2.NH4+ 3.K + 4.Mg2+ 5.Ca2+Fig.1 Ion chromatogram of the system suitability test

2.2 溶液制備

取氯化鈉、氯化鉀、氯化銨標準品和氯化鈣各適量，精密稱定，精密量取氯化鎂容量分析用溶液標準品（濃度為0.100 0 mol/L）適量，用水制成質量濃度約為10 μg/mL 的混合溶液，作為系統適用性試驗溶液。取氯化鈉標準品18.65 mg，精密稱定，置50 mL 聚乙烯容量瓶中，用水溶解并定容，搖勻，精密量取5.0 mL，置20 mL 聚乙烯容量瓶中，加水定容，搖勻，作為對照品貯備液（質量濃度為93.24 μg/ mL）；精密量取對照品貯備液1.0，1.0，1.0，1.0，2.0，4.0 mL，分別置100，25，10，5，5，5 mL聚乙烯容量瓶中，用水定容，搖勻，即得質量濃度分別為0.93，3.73，9.32，18.65，37.30，74.59 μg/mL的系列對照品溶液。精密量取甘油果糖氯化鈉注射液2.5 mL，置50 mL 聚乙烯容量瓶中，加水定容，搖勻，作為供試品貯備液；精密量取供試品貯備液1.0 mL，置25 mL 聚乙烯容量瓶中，用水定容，搖勻，作為供試品溶液。以水作為空白溶劑。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：取2.2 項下對照品溶液（質量濃度為18.65 μg/mL）、供試品溶液和空白溶劑各適量，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果對照品溶液和供試品溶液色譜圖中，相同保留時間處均有鈉離子（Na+）峰出現，且空白溶劑不干擾Na+的測定。詳見圖2。

A. 對照品溶液 B. 供試品溶液 C. 空白溶劑圖2 專屬性試驗離子色譜圖1.Na+A.Reference solution B.Test solution C.Blank solventFig.2 Ion chromatograms of the specificity test

線性關系考察：精密吸取2.2 項下系列對照品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，以氯化鈉的質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=0.102 4X+0.056 1（r=0.999 6，n=6）。結果表明，氯化鈉的質量濃度在0.93～74.59 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

定量限與檢測限確定：精密吸取對照品貯備液（質量濃度為93.24 μg/mL）適量，置10 mL 聚乙烯容量瓶中，加水逐級稀釋成系列質量濃度，按2.1 項下色譜條件進樣測定，分別以信噪比（S/N）為10 倍和3 倍時的質量濃度為定量限和檢測限。結果氯化鈉的定量限為0.03 μg/mL，檢測限為0.01 μg/mL。

重復性試驗：取樣品（批號為A220117302）適量，按2.2 項下方法平行制備供試品溶液6 份，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果氯化鈉的平均含量為102.97%，RSD為0.69%（n= 6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：精密量取樣品（批號為A220117302）適量，按2.2項下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0，2，4，8，12，24 h時按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果Na+峰面積的RSD為0.83%（n=6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：精密量取已知含量的樣品（批號為A220117302）2.5 mL，置50 mL 聚乙烯容量瓶中，加水定容，搖勻，精密量取1.0 mL，置25 mL 聚乙烯容量瓶中，平行9份，分別精密加入對照品貯備液（質量濃度為93.24 μg/mL）4.0，5.0，6.0 mL，各3 份，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

2.4 樣品含量測定

精密量取樣品（批號分別為A220117302，A220118301，A220314305，20022631，20022831，20030131，T21121303）適量，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，采用標準曲線法計算樣品中氯化鈉的含量，并與法定檢驗方法測定結果比較［2-3］。結果見表2。

表2 樣品中氯化鈉含量測定結果（%）Tab.2 Results of the content determination of sodium chloride in samples（%）

3 討論

3.1 檢測方法選擇

2020年版《中國藥典（二部）》標準中，氯化鈉、果糖、甘油的含量測定采用高效液相色譜-紫外光譜（HPLC-UV）法，以磺酸型聚苯乙烯與二乙烯苯共聚體H型陽離子交換樹脂為色譜柱，以0.04 mol/L 磷酸溶液為流動相，檢測波長為200 nm；國家藥品標準YBH13712021中，氯化鈉、果糖、甘油的含量測定采用高效液相色譜-示差折光檢測（HPLC- RID）法。這2 種方法存在以下缺點，色譜柱價格較貴，使用壽命短，適用面窄［11］；UV 檢測器中，氯化鈉在200 nm 波長處吸收弱［1］，專屬性不高，重復性較差，不利于產品的質量控制；RID 主要用于測定果糖含量［12-13］，對氯化鈉測定專屬性一般，且這類檢測器普及程度較低，受環境溫度、流動相組成等影響較大，穩定性較差［14-15］。除HPLC 法外，甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉的檢測還可采用滴定法［1］。滴定溶液常采用硝酸銀溶液，其原理是利用銀離子與氯離子發生沉淀反應，以滴定樣品中的氯化鈉含量。滴定法因指示劑量多少、指示劑變色終點和肉眼判斷終點的差異會引起誤差。另外，部分生產企業甘油果糖氯化鈉注射液的處方工藝中用鹽酸作為pH 調節劑。因此，滴定法不能準確測定甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉的含量。

離子色譜法具有快速方便、靈敏度高、結果準確等優點，不僅可用于多種注射液的含量測定［7，16-18］，還可用于藥品、食品、能源、水質等領域測定Na+或氯化鈉含量［19-24］。該方法對氯化鈉的分離效果良好，但在試驗過程中要使用聚乙烯材料容器，有效降低了Na+的引入，故最終采用離子色譜法。

3.2 色譜柱選擇

甘油果糖氯化鈉注射液現行質量標準中，2020年版《中國藥典（二部）》推薦使用H 型陽離子柱；國家藥品標準YBH13712021 中，推薦使用強陽離子鈣型交換柱。但上述2個色譜柱的價格昂貴，使用壽命短，且適用面窄。柳楊等［11］推薦使用的氨基柱雖價格便宜易得，但使用壽命極短，且流動相中水相比例越高，越易發生水解。離子色譜分析柱的效率和容量高，穩定性好，使用壽命長，故選擇此色譜柱。

3.3 方法評價

2020年版《中國藥典（二部）》和國家藥品標準YBH13712021 中規定，甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉含量應為標示量的93.0%～107.0%。本研究中建立的離子色譜法測定的含量均在標準范圍內，與法定檢驗方案測定結果比較，多數結果的標準偏差在2%以內。同一廠家、不同批次間，離子色譜法測定結果較法定檢驗方法測定結果波動小。本研究中建立的方法操作簡便、重復性好、準確度高，可用于甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉的含量測定。