高效液相色譜法測定地氯雷他定口溶膜的溶出度和溶出曲線

李國相，車顏婷，高迪，苗曉莉，張成宇，林彬，張威風，2，3，何淑旺，3*（.北京達因高科兒童藥物研究院有限公司，北京 0076；2.山東大學，濟南 25000；3.山東達因海洋生物制藥股份有限公司，山東 威海 264300）

地氯雷他定是先靈葆雅公司于1988年開發上市的三環長效型第3代組胺拮抗劑。本品為氯雷他定的活性代謝物，可通過選擇性地拮抗外周H1受體，快速緩解季節性過敏性鼻炎的相關癥狀，如打噴嚏、流涕和鼻癢、鼻黏膜充血、鼻塞；還用于緩解慢性特發性蕁麻疹的相關癥狀如瘙癢，并可減少蕁麻疹的數量及大小[1-3]。

地氯雷他定口溶膜為改良型新藥，還未上市，各國藥典中均未收載該品種。《美國藥典》（USPNF）[4-5]、國家食品藥品監督管理局標準[6]、國家藥典委公示稿[7]及相關文獻[8-13]中均是關于地氯雷他定片和地氯雷他定口崩片的溶出度和溶出曲線測定，分別采用紫外分光光度法和HPLC法檢驗劑片或口崩片的溶出度和溶出曲線。紫外分光光度法專屬性差、操作煩瑣、耗時長，USP中地氯雷他定口崩片采用HPLC法測定溶出度，但流動相中磷酸二氫鉀濃度較高，對色譜柱壽命影響較大。陳承貴等[11-12]采用HPLC法測定溶出度，但流動相用三乙胺調pH值，操作難且三乙胺有強烈氨臭，刺激性強，對色譜柱壽命影響也較大。嚴一銘[13]采用HPLC法測定溶出曲線，該方法與地氯雷他定片公示稿的有關物質測定方法一致，流動相鹽濃度較低、無害環保且便于制備，但地氯雷他定保留時間在21 min左右，耗時長。本研究擬優化色譜條件，使地氯雷他定保留時間縮短至2.5 min左右，提高檢測效率，進而滿足樣品大批量快速測定的質量控制需求。

1 儀器與試藥

1260液相色譜儀（美國安捷倫公司），860DL藥物溶出儀（LOGAN），分析天平（梅特勒托利多，精度：0.01 mg），地氯雷他定對照品（含量：99.9%，批號：100919-202105，中國食品藥品檢定研究院），地氯雷他定口溶膜（規格：5 mg，批號：230301、230302、230303，均為自制），乙腈和三氟乙酸為色譜純，十二烷基硫酸鈉、鹽酸、醋酸鈉、冰醋酸、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、氯化鈉為化學純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：采用Agilent C8（4.6 mm×150 mm，3.5 μm）柱，流動相：乙腈-0.003 mol·L－1的十二烷基硫酸鈉水溶液（稱取十二烷基硫酸鈉0.865 g，加1000 mL水溶解，加三氟乙酸 1 mL）（47∶53）；檢測波長280 nm；流速1.5 mL·min－1；進樣量10 μL；柱溫35℃。

2.2 溶出試驗方法

取本品6片，照溶出度測定法（2020年版《中國藥典》四部通則0931第二法），以0.1 mol·L－1鹽酸溶液900 mL為溶出介質，轉速為50 r·min－1，依法操作，經30 min后取樣。另取地氯雷他定對照品適量，精密稱定，用0.1 mol·L－1鹽酸溶液溶解并定量稀釋成每1 mL約含5 μg的溶液。同法測定，計算每片溶出量。

2.3 溶出介質

根據《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》[14]并參考日本“藥品品質再評價”工程[15-16]，采用不同pH的4種溶出介質，分別為0.1 mol·L－1鹽酸溶液（取9 mL鹽酸，加水稀釋至1000 mL，混勻）、pH 4.0醋酸鹽緩沖液（取醋酸鈉1.22 g，冰醋酸2.46 g，用水溶解并稀釋至1000 mL，冰醋酸調節pH值為4.0）、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液（取11.7 g的氯化鈉，用水溶解并稀釋至1000 mL）和pH 6.8磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀6.805 g，氫氧化鈉0.896 g，加水稀釋至1000 mL，混勻，氫氧化鈉調節pH值為6.8）。

2.4 方法學考察

2.4.1 專屬性 按處方比例配制空白輔料，用溶出介質溶解、稀釋，濾過，取續濾液，測定。結果4種溶出介質中，空白輔料均不干擾本品溶出度的測定。色譜圖見圖1。

圖1 0.1 mol·L－1鹽酸溶液（A）、pH 4.0醋酸鹽緩沖液（B）、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液（C）及pH 6.8磷酸鹽緩沖液（D）專屬性色譜圖Fig 1 Chromatogram of specificity test in 0.1 mol·L－1 hydrochloric acid（A），acetate buffer pH 4.0（B），0.2 mol·L－1 sodium chloride aqueous solution（C），and phosphate buffer pH 6.8（D）

2.4.2 線性關系考察 精密稱取地氯雷他定對照品14 mg，置100 mL量瓶中，加溶出介質溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液適量，用溶出介質稀釋制成每1 mL中含地氯雷他定分別為0.6、1.7、2.8、4.5、5.6、6.7 μg的溶液。分別進樣10 μL，以地氯雷他定質量濃度（μg·mL－1）為橫坐標（x），峰面積為縱坐標（y），繪制標準曲線，求得回歸方程，結果見表1。地氯雷他定在0.6～6.7 μg·mL－1與峰面積呈良好的線性關系。

表1 地氯雷他定在不同溶出介質中的線性試驗結果Tab 1 Linearity of desloratadine in different dissolution media

2.4.3 精密度考察 取對照品溶液（5.6 μg·mL－1）連續進樣5次，結果在0.1 mol·L－1鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液中，地氯雷他定峰面積的RSD分別為0.15%、0.56%、0.070%、0.050%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 重復性考察 取樣品6份（批號：230301），按“2.2”項下方法分別配制溶液，在同一色譜條件下進樣，結果在0.1 mol·L－1鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液中，地氯雷他定峰面積的RSD分別為0.55%、0.71%、0.37%、0.67%，表明該方法具有良好的重復性。

2.4.5 回收試驗 精密稱取已知量的輔料細粉適量，置100 mL量瓶中，加溶出介質溶解并稀釋至刻度；精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，共量取12份，3份一組，各組分別精密加入地氯雷他定對照品溶液（0.14 mg·mL－1）0.2、2.0、2.4 mL，加溶出介質溶解并稀釋至刻度，進樣測定，并采用外標法計算回收率，結果顯示在0.1 mol·L－1鹽酸溶液中平均回收率為100.4%，RSD為0.14%；在pH 4.0醋酸鹽緩沖液中平均回收率為100.5%，RSD為0.72%；在0.2 mol·L－1氯化鈉溶液中平均回收率為100.0%，RSD為0.61%；在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中平均回收率為100.3%，RSD為0.57%。

2.4.6 穩定性考察 取供試品溶液，在同一色譜條件下，分別于0、2、4、6、8、10、12、24 h測定8次，結果在0.1 mol·L－1鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液中，地氯雷他定峰面積的RSD分別為0.71%、1.2%、0.22%、1.2%。

2.4.7 濾膜吸附 取不同濃度供試品溶液，在同一色譜條件下，分別棄去0、1、2、3、4、6、8、10 mL，考察峰面積的RSD，結果見表2。結果顯示：50%濃度、100%濃度時本品均無濾膜吸附；10%濃度在0.1 mol·L－1鹽酸溶液中無濾膜吸附；在0.2 mol·L－1氯化鈉溶液中棄去1 mL后，本品無濾膜吸附；在pH 4.0醋酸鹽緩沖液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中棄去2 mL后，本品無濾膜吸附。

表2 濾膜吸附試驗結果Tab 2 Filtration membrane adsorption

2.5 樣品含量測定

以4種不同溶出介質，按擬訂溶出試驗方法，轉速為50 r·min－1，分別于5、10、15、30、45、60 min（0.1 mol·L－1鹽酸溶液）或5、10、15、30、45、60、90、120 min（pH 4.0醋酸鹽緩沖液、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液），取溶液1.5 mL，取續濾液作為供試液品溶液。另取地氯雷他定對照品適量，精密稱定，用0.1 mol·L－1鹽酸溶液溶解并定量稀釋成每1 mL約含5 μg的溶液，計算每片溶出量并繪制溶出曲線。溶出量結果見表3及圖2。

表3 3批樣品在不同介質中的累計溶出度Tab 3 Cumulative dissolution of 3 batches of samples in different dissolution media

圖2 地氯雷他定口溶膜在0.1 mol·L－1鹽酸溶液（A）、pH 4.0醋酸鹽緩沖液（B）、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液（C）及 pH 6.8磷酸鹽緩沖液（D）的溶出曲線Fig 2 Dissolution of desloratadine oral soluble film in 0.1 mol·L－1 hydrochloric acid（A），acetate buffer pH 4.0（B），0.2 mol·L－1 sodium chloride aqueous solution（C），and phosphate buffer pH 6.8（D）

3 討論

3.1 三氟乙酸用量考察

三氟乙酸用量分別為0.05%、0.1%、0.15%時，考察主峰拖尾因子，結果用量為0.05%時，主峰前延；用量為0.1%和0.15%時，主峰峰形較好，拖尾因子分別為1.12和0.98，保留時間分別為12 min和10 min，考慮三氟乙酸對柱子的影響，故選擇用量為0.1%。

3.2 不同色譜柱考察

更換不同品牌、不同規格C8色譜柱，最后選擇Agilent（4.6 mm×150 mm，3.5 μm）色譜柱，保留時間為6 min，快速出峰。

3.3 考察流動相比例

先后考察了乙腈和0.003 mol·L－1十二烷基硫酸鈉水溶液的比例為44∶56、45∶55、46∶54、47∶53、48∶52、50∶50的影響，最終選用乙腈-0.003 mol·L－1十二烷基硫酸鈉溶液（47∶53）作為流動相等度洗脫，主峰拖尾因子1.1，保留時間為2.5 min，滿足要求。

3.4 溶出介質的篩選

根據日最大劑量5 mg推算，地氯雷他定可完全溶解在小于250 mL的pH 1.0～6.8范圍水溶性介質中，屬于高溶解性藥物，故采用常規的4種介質作為其溶出介質，即0.1 mol·L－1鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、水、pH 6.8磷酸鹽緩沖液，但由于水介質中沒有離子，無法使地氯雷他定從包覆輔料中置換出來，故選擇在水介質中加入氯化鈉，同時考察不同氯化鈉濃度對溶出曲線的影響。結果選擇0.2 mol·L－1氯化鈉溶液作為溶出介質。

3.5 溶出裝置的選擇

參照各國藥典[4-5]及標準[6-7]收載的地氯雷他定片或地氯雷他定口崩片溶出度項目規定，設置地氯雷他定口溶膜的溶出條件為槳法。考察采用銅絲作為沉降裝置固定藥膜和采用沉降籃固定藥膜兩種不同投樣方法對本品溶出結果的影響。結果采用沉降籃固定藥膜時5 min內溶出杯中已無漂浮的肉眼可見的口溶膜，而采用銅絲固定藥膜時5 min時溶出杯內仍有少量肉眼可見的口溶膜，兩種投樣方式累計溶出度無明顯差異，但沉降籃作為沉降方式投樣測得的溶出結果RSD相對更好，故選擇沉降籃作為沉降裝置。

4 結論

本試驗建立了一種HPLC法測定地氯雷他定口溶膜溶出度和溶出曲線的方法，專屬性、線性范圍、精密度、穩定性和回收試驗結果均滿足要求，且有耗時短、準確度高、重現性好等優點，提高檢驗工作效率的同時為大批量快速測定溶出曲線提供了可能。