大蒜多糖通過核因子-κB通路改善代謝相關脂肪性肝病小鼠肝臟損傷

劉 杰，玉王寧，王成海，李 沙，程立媛，張 偉

（1.河北農業大學食品科技學院，河北 保定 071001；2.河北工程大學生命科學與食品工程學院，河北 邯鄲 056038；3.河北工程大學醫學院，河北 邯鄲 056038；4.河北工程大學附屬醫院，河北省血液凈化應用基礎研究重點實驗室，河北 邯鄲 056002；5.河北工程大學分析測試實驗中心，河北 邯鄲 056038；6.河北農業大學生命科學學院，河北 保定 071001）

代謝相關脂肪性肝病（metabolic-associated fatty liver disease，MAFLD），曾用名為非酒精性脂肪性肝病，是代謝綜合征的一種肝臟表現，涉及從單純脂肪變性到肝纖維化、肝硬化甚至肝細胞癌的復雜進展[1-2]。MAFLD全球患病率接近30%，嚴重危害人類健康并對社會造成巨大經濟負擔，至今在美國和歐盟尚無藥物獲批用于治療該病。目前，關于MAFLD的致病機理有“二次打擊”“多次打擊”等多種理論，其中，曾經得到廣泛認可的“二次打擊”學說認為，第一次打擊的肥胖、胰島素抵抗等因素引發了肝細胞中脂質異常沉積，第二次打擊的氧化應激、炎癥、線粒體障礙、脂肪因子調節紊亂等，引起肝臟損傷及炎癥，甚至肝纖維化等疾病發生。但是，隨著新的研究領域的拓展和新的研究結論的提出，“二次打擊”的觀點在用于病理解釋時出現了局限性。近年來，“多次打擊”理論正在被更多的人接受，該理論認為腸道微生物發揮著重要的作用，強調通過“腸肝軸”起關鍵作用，進而導致脂肪毒性、氧化應激、線粒體功能障礙和肝細胞炎癥等。

大蒜（Allium sativum）是一種在中國使用歷史悠久的調味品和中藥，已被正式批準為藥食同源的食品原料，可用于治療結核病、咳嗽、感冒、高血壓、輕微血管疾病、糖尿病、肥胖、腎和肝損傷以及癌癥[3]。大蒜多糖是大蒜干物質的主要成分[4]，具有多種生理功能，包括抗腫瘤、提高免疫力、抗氧化和抗凝血作用、保護肝臟和平衡腸道微生物群[5-6]。大蒜多糖的骨架結構被鑒定為α-D-Glcp-1→(2-β-D-果糖-1)n→（n＝9～10），側鏈上可能附著有微量巖藻糖[7]，結構與菊粉型果聚糖相似[8]，它是一種潛在的益生元，可能具有增加益生菌多樣性、改善腸黏膜和提高腸道免疫力的作用[9]。已有研究表明，大蒜多糖可以通過改善黏膜屏障、阻斷促炎細胞因子和調節腸道微生物群緩解右旋糖酐硫酸酯鈉誘導的結腸炎[7]，然而，針對MAFLD探討大蒜多糖肝保護作用的研究鮮有報道。本實驗采用蛋氨酸膽堿缺乏（methionine-choline deficiency，MCD）飲食誘導小鼠構建MAFLD模型，探索大蒜多糖對MAFLD小鼠肝臟的保護作用機理，為以大蒜多糖為原料，具有保肝護肝功效特色食品的開發利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

雄性C57BL/6小鼠（6 周齡）購自斯貝福（北京）生物技術有限公司。

大蒜多糖 晨光生物科技集團有限公司；蛋氨酸膽堿充足（methionine-choline sufficient，MCS）飼料和MCD飼料 北京華富康生物科技有限公司；EasyPure?RNA純化試劑盒、EasyScript?逆轉錄酶和TransStart Top Green定量PCR試劑盒 北京全式金生物技術有限公司；其他試劑均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

T6新世紀紫外-可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責任公司；HH-4數顯恒溫水浴鍋 常州國華電氣有限公司；KZ-II組織破碎儀 武漢塞維爾生物科技有限公司；酶標儀、real-time聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀 美國Bio-Rad公司；病理切片掃描儀 德國Leica公司；凝膠成像系統美國冷泉港公司；VERTEX 70v傅里葉變換紅外光譜儀德國Bruker公司。

1.3 方法

1.3.1 大蒜多糖紅外光譜分析

采用溴化鉀壓片法，稱取大蒜多糖樣品10 mg，按照質量比1∶200的比例加入溴化鉀，充分研磨，然后放入壓片機壓片。采用傅里葉變換紅外光譜儀在4000～400 cm-1波長范圍內進行掃描，步長為4 cm-1。

1.3.2 小鼠模型的建立

50 只C57BL/6小鼠在溫度（（22±2）℃）、濕度（55%～65%）和12 h/12 h光/暗循環的標準條件下飼養，并且允許小鼠在抵達后適應1 周，隨意飲用水和飼料。然后被隨機分為5 組，分別為正常組（MCS）、模型組（MCD），大蒜多糖低（LGP，250 mg/kgmb）、中（M G P，1000 m g/k gmb）、高（H G P，3000 mg/kgmb）劑量組，每組10 只。開始實驗時紀錄各組小鼠體質量，并采用斷指（趾）標記法對小鼠進行標號，實驗期間記錄小鼠體質量變化及飲食、精神狀態等情況。MCS組食用MCS飼料，灌胃生理鹽水；MCD、LGP、MGP、HGP組食用MCD飼料，分別灌胃生理鹽水，低、中、高濃度大蒜多糖，連續實驗28 d。

1.3.3 樣本采集

第29天，各組小鼠嚴格禁食不禁水12 h，期間禁止灌胃大蒜多糖。然后在戊巴比妥鈉麻醉下處死小鼠，記錄體質量和肝臟質量，處死前從腔靜脈采集血樣，然后離心血清樣本并保存在-80 ℃。一部分浸泡在生理鹽水中的肝臟組織樣本用4%的多聚甲醛溶液固定，然后嵌入石蠟塊中，用于染色鏡檢。第二部分肝臟組織用于在冰水中制備肝勻漿（肝∶生理鹽水＝1∶9，g/mL），以供后續生理生化指標分析。剩余的肝臟組織在液氮中快速冷凍用于后續mRNA檢測。

1.3.4 肝組織病理形態染色鏡檢

經過石蠟封存的肝臟組織分別采用蘇木精-伊紅（haematoxylin-eosin，H&E）染色和油紅O染色兩種方法處理，用光學顯微鏡觀察組織學變化，以評估肝脂肪變性和炎癥。

1.3.5 生化指標測定

甘油三酯（triglycerides，TG）、天冬氨酸轉氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸轉氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和丙二醛（malonic dialdehyde，MDA）的水平采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測量。

1.3.6 逆轉錄定量聚合酶鏈式反應

使用EasyPure?RNA純化試劑盒提取-80 ℃保存的肝臟組織總RNA，并作為模板利用EasyScript?逆轉錄酶將其逆轉錄為cDNA。最后，通過使用TransStart Top GreenPCR試劑盒分析各種關鍵功能基因Hmox1、Cat、Gpx1、Tnf、Ccl2、Cxcl2、Cxcl10、IL-1a、IL-1b、Fasn、Cd36、Apob、Acaca、Fabp1、Mttp、Ppara、Ppard、Pparg、Cpt1a、Acox和Gapdh的mRNA表達。引物序列如表1所示。在以下條件下進行40 個循環的逆轉錄實時熒光定量PCR（reverse transcription quantitative real-time PCR，RT-qPCR）：94 ℃預變性30 s，94 ℃變性5 s，60 ℃退火并延伸30 s。目標基因的表達以Gapdh的表達作為內參標準，并使用2-ΔΔCt法進行mRNA水平的相對定量。

表1 用于RT-qPCR分析的引物序列Table 1 Primer sequences used for RT-qPCR

1.4 數據統計與分析

2 結果與分析

2.1 大蒜多糖的紅外吸收色譜分析

分子結構鑒定是紅外吸收光譜技術的基本應用之一，它主要利用了復雜分子的化學基團在分子被激發后所產生的特征振動。常見的化學基團在4000～670 cm-1范圍內有特征基團頻率，大概范圍是：1）X—H伸縮振動區，4000～2500 cm-1，X可以是O、N、C和S原子；2）三鍵和累計雙鍵區，2500～2000 cm-1；3）雙鍵伸縮振動區，2000～1500 cm-1，主要包括C＝C、C＝O、C＝N等；4）X—Y伸縮振動及X—H變形振動區，1500～400 cm-1[10]。大蒜多糖的紅外吸收光譜如圖1所示，特征吸收峰有：3375.0 cm-1處為—OH伸縮振動峰，2935.3 cm-1處為—CH2伸縮振動峰，1647.0 cm-1處為—CHO中的C＝O伸縮振動峰，1456.1 cm-1處為—CH2變形振動峰，1132.1 cm-1和1026.0 cm-1處為吡喃糖環的C—O—C伸縮振動峰，933.4 cm-1處為呋喃果糖環的對稱伸縮振動峰，817.7 cm-1處為呋喃果糖亞甲基（C—H）剪切振動峰[11-13]。根據上述紅外光譜數據推測本研究所用的大蒜多糖為類菊粉結構的果聚糖。

圖1 大蒜多糖紅外吸收光譜圖Fig.1 Infrared absorption spectrum of garlic polysaccharides

2.2 大蒜多糖對小鼠肝臟病理形態的影響

各組肝臟組織切片經H&E染色和油紅O染色后（圖2），在100 倍顯微鏡下觀察可見MCS組小鼠肝臟組織形態結構正常，無脂肪變性，血管周圍無炎癥細胞浸潤，無氣球樣變和纖維化改變。而MCD組小鼠肝組織中的肝小葉結構紊亂，肝束排列欠佳，出現大量脂肪變性，在鏡檢視野內可見大量混合型脂滴空泡充滿胞質；透過變性脂肪，可見顯著的胞漿腫脹、細胞核大濃染、肝細胞壞死的氣球樣變，以及出現肝纖維化；肝小葉及匯管區周圍出現炎癥細胞浸潤的炎性灶。LGP組小鼠肝組織中的肝小葉結構紊亂，肝束排列欠佳，可見脂肪變性和胞質內大量脂滴空泡，相對于MCD組有所減少；胞漿腫脹、細胞核大且濃染、肝細胞壞死的氣球樣變，以及出現肝纖維化略有改善，但炎性灶依然較多。MGP組小鼠肝細胞中的肝小葉結構和肝束排列基本恢復正常，仍可見脂肪變性和胞質內脂滴空泡，相對于LGP組顯著減少；胞漿腫脹、細胞核大且濃染、肝細胞壞死的氣球樣變，以及出現肝纖維化進一步減輕，炎性灶幾乎不可見。HGP組小鼠肝細胞中的肝小葉結構和肝束排列基本回復正常，可見少量脂肪變性和胞質內脂滴空泡，相對于MGP組顯著減少，胞漿腫脹、細胞核大且濃染、肝細胞壞死的氣球樣變、肝纖維化、炎性灶等無明顯存在。

圖2 小鼠肝組織H&E和油紅O染色Fig.2 H&E and oil red O staining of liver sections

2.3 大蒜多糖對小鼠生化指標的影響

各組小鼠生化指標受大蒜多糖的影響見圖3。相對于MCS組，MCD組的肝組織TG含量顯著升高，而血清TG含量顯著下降（P＜0.05）；LGP、MGP、HGP組的肝組織TG逐漸降低，MGP和HGP組相對于MCD組顯著降低（P＜0.05），未降低到MCS組水平；LGP、MGP、HGP組的血清TG逐漸升高，MGP和HGP組相對于MCD組顯著升高（P＜0.05），均達到MCS組水平。相對于MCS組，MCD組血清ALT和AST含量均顯著升高（P＜0.05），而大蒜多糖的作用又使得LGP、MGP、HGP組血清ALT和AST均顯著下降（P＜0.05），但均未下降到MCS組水平。肝組織MDA的含量在MCD組中相對于MCS組顯著升高（P＜0.05），在大蒜多糖干預后，MGP、HGP組顯著降低（P＜0.05），趨近于MCS組水平；肝組織SOD的含量在MCD組中相對于MCS組顯著降低（P＜0.05），在大蒜多糖干預后，LGP、MGP、HGP各組顯著升高（P＜0.05），均達到MCS組水平。

圖3 大蒜多糖對小鼠生化指標的影響Fig.3 Effect of garlic polysaccharides on biochemical indexes in mice

2.4 大蒜多糖對肝臟氧化應激相關基因mRNA表達的影響

大蒜多糖對肝臟氧化應激相關基因（包括Hmox1、Cat和Gpx1）mRNA相對表達量的影響如圖4所示。相對于MCS組，MCD組Hmox1基因表達量顯著升高，而Cat和Gpx1基因的表達量則顯著降低（P＜0.05）。與MCD組相比，大蒜多糖的干預緩解了Hmox1和Cat基因的表達量受MCD飲食誘導的影響；隨著大蒜多糖飼喂量的增加，Hmox1基因表達量在LGP組中變化不顯著（P＞0.05），在MGP、HGP組中逐漸降低；Cat基因表達量只在MGP和HGP組中有所提高。與MCD組相比，大蒜多糖的干預對Gpx1基因的表達量無顯著影響（P＞0.05）。

圖4 大蒜多糖對肝臟氧化應激相關基因mRNA相對表達量的影響Fig.4 Effect of garlic polysaccharides on relative expression of hepatic oxidative stress-related genes

2.5 大蒜多糖對肝臟炎癥反應相關基因mRNA表達的影響

大蒜多糖對肝臟炎癥反應相關基因（包括Tnf、Ccl2、Cxcl2、Cxcl10、IL-1a和IL-1b）mRNA相對表達量的影響如圖5所示。除了IL-1a和IL-1b外，Tnf、Ccl2、Cxcl2和Cxcl10基因的表達量在MCD飲食誘導和不同飼喂量大蒜多糖干預的情況下，表現出了相似的變化規律，即都在MCD飲食誘導下表達量顯著增加，在大蒜多糖干預后表達量顯著降低（P＜0.05），且飼喂量越大降低越顯著，除了LGP組的Ccl2基因出現了表達量的反向波動。這些結果預示著大蒜多糖在消除炎癥反應中可能發揮著重要作用，其作用效果和飼喂量存在一定的劑量效應關系。

圖5 大蒜多糖對肝臟炎癥反應相關基因mRNA相對表達量的影響Fig.5 Effect of garlic polysaccharides on relative expression of hepatic inflammation-related genes

2.6 大蒜多糖對肝臟脂質沉積相關基因mRNA表達的影響

大蒜多糖對肝臟脂質沉積相關基因（包括Fasn、Acaca、Cpt1a、Acox、Cd36、Fabp1、Apob和Mttp）mRNA相對表達量的影響如圖6所示。Fasn基因和Mttp基因的表達量在MCD飲食誘導后顯著降低（P＜0.05），且不受飼喂大蒜多糖的影響。Acaca基因和Apob基因的表達量在MCD飲食誘導后沒有發生顯著變化（P＞0.05）。Cpt1a基因表達量在MCD飲食誘導后顯著降低（P＜0.05），飼喂大蒜多糖使Cpt1a基因的表達量在LGP和HGP組無顯著變化（P＞0.05），在MGP組顯著升高（P＜0.05）。Acox基因表達量在MCD飲食誘導后顯著降低（P＜0.05），飼喂大蒜多糖使Acox基因的表達量在LGP組有所升高，在MGP和HGP組顯著升高（P＜0.05）。Cd36基因表達量在MCD飲食誘導后顯著升高（P＜0.05），且不受飼喂大蒜多糖的影響。Fabp1基因表達量受MCD飲食誘導顯著降低（P＜0.05），各組大蒜多糖干預并沒有對該基因的表達產生顯著影響（P＞0.05）。

圖6 大蒜多糖對肝臟脂質沉積相關基因mRNA相對表達量的影響Fig.6 Effect of garlic polysaccharides on relative expression of hepatic lipid accumulation-related genes

3 討論

MAFLD作為多系統代謝功能紊亂的肝臟表現，其發病機制、臨床表現及病理改變均存在一定異質性[2]。脂肪在肝臟細胞中的非正常沉積是MAFLD形成的初始條件，主要是肝臟脂質代謝紊亂所致，如果脂肪酸的攝取、脂肪酸內部合成、脂肪分解、脂肪酸β-氧化等過程無法維持動態平衡，則會造成紊亂產生脂質沉積[14]，隨著病變加重，肝細胞功能逐漸喪失，炎癥反應起關鍵作用，貫穿MAFLD的整個過程[15-16]。本研究用MCD飲食誘導的小鼠構建MAFLD模型，通過比較大蒜多糖干預與否情況下的小鼠肝組織病理形態、血清和肝組織生化指標、病理相關功能基因轉錄水平等，結果表明大蒜多糖對于MCD飲食誘導的MAFLD有著比較明顯的緩解作用，其中，MGP組效果比較顯著，添加量適中。

經過MCD飲食誘導的小鼠肝臟組織表現出肝損傷、炎癥和纖維化，以及大泡性脂肪變性[17-19]，其中，肝損傷、炎癥和纖維化由蛋氨酸缺失導致，大泡性脂肪變性由膽堿缺失導致。蛋氨酸和膽堿都是肝磷脂酰膽堿（phosphatidylcholine，PC）的基本前體，這種飲食引起的肝脂肪性肝炎可能部分是由于PC合成受損導致的[20]。本實驗通過對模型組肝臟組織切片經H&E染色和油紅O染色后鏡檢觀察，發現非常明顯的肝小葉結構紊亂，肝束排列欠佳，出現大量脂肪變性和混合型脂滴空泡，可見顯著的胞漿腫脹、細胞核大且濃染、肝細胞壞死的氣球樣變，以及出現肝纖維化和炎性灶，表明實驗造模成功[21]。隨著實驗組大蒜多糖灌胃量的增多，小鼠肝組織病理形態分別得到不同程度的改善。在中劑量的大蒜多糖灌胃組中，已經幾乎觀察不到到炎性灶。在高劑量的大蒜多糖灌胃組中，小鼠肝組織的病理變化基本回復到正常狀態。與上述變化最直接的聯系，可能是肝組織脂質異常積累導致的氧自由基帶來的損傷。

已知以體內活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）水平升高為特征的氧化應激是肝損傷的一個確定原因，肝臟即是ROS產生的主要場所，也是ROS攻擊的主要靶器官[22]。如H2O2等一些ROS可以發揮信號分子的作用，調節炎癥反應過程，進而影響許多病理狀態下一些基因的表達[23-24]，ROS也可直接或通過某些轉錄因子（transcription factors，TFs）激活各種凋亡誘導物，進而導致脂質過氧化[25]。本研究的MCD組中，TG在肝組織異常沉積，MDA顯著增多，SOD卻顯著降低（P＜0.05）。MDA是細胞膜脂質在ROS的作用下發生過氧化反應的產物，該物質過量積累會導致細胞膜的結構和功能進一步受到損害，所以MDA的含量能夠直接反映細胞膜脂質過氧化水平。研究表明，在MAFLD病理狀態下，肝細胞、線粒體、微粒體膜的脂質過氧化產物MDA含量明顯增高，并且與肝組織酯化、纖維化、炎癥及壞死程度相關[26]。SOD可有效治療或緩解因ROS作用而導致的炎癥反應，當SOD缺乏時，機體的抗氧化能力降低，氧化還原穩態失衡，出現氧化應激。SOD基因上游的TATA盒和CCAAT盒構成轉錄因子結合位點（transcription factor binding sites，TFBSs），能與相應的TFs結合，調控SOD的表達[27]。這些TFs包括：特異性蛋白1（specificity protein 1，Sp1）發揮激活作用[28]；激活蛋白1（activator protein 1，AP-1或JUN）可作為阻遏物隔離必需的共激活因子以抑制SOD轉錄[29]；神經元型一氧化氮合酶（neural nitric oxide synthase，nNOS或NOS1）也能直接結合Sp1而抑制Sp1與Sod基因啟動子結合[30]；腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，Tnf）可激活JNK/AP1通路下調SOD啟動子活性[31]；CCAAT/增強子結合蛋白α、β（CCAAT/enhancer binding protein α,β，C/EBPα、C/EBPβ）通過結合SOD啟動子CCAAT盒直接增強SOD表達[32-33]。本研究在MCD模型中灌胃大蒜多糖后，隨著添加劑量的增加，肝組織TG逐步減少，MDA也逐漸回復到接近正常水平，SOD在各個劑量的大蒜多糖添加后均顯著回復到正常水平。表明大蒜多糖對于MAFLD模型中肝組織氧化應激的損害作用有可能是依賴于SOD的表達調控。

在ROS對肝組織氧化應激的損害同時，炎癥反應也隨即發生。本研究中，基因Hmox1、Tnf、Ccl2、Cxcl2、Cxcl10在MCD飲食誘導之后表達量顯著升高（P＜0.05），在大蒜多糖干預后表達量又得到顯著回復（P＜0.05）。其中，Hmox1的表達產物為血紅素加氧酶1（heme oxygenase 1，HMOX1或HO1），是血紅素分解代謝過程限速酶的氧應激誘導型；Tnf的表達產物為腫瘤壞死因子-α，是兼具誘導細胞凋亡、免疫調節、炎癥反應等作用的一種促炎細胞因子，在MAFLD發生發展中，腫瘤壞死因子-α主要由肝臟激活的Kupffer細胞產生，并發揮主要炎癥因子的作用[14-15,34]；Ccl2的表達產物為趨化因子（C-C）配體2（CCL2或MCP-1），主要由單核細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞分泌，可促進免疫細胞到組織損傷或感染引起的炎癥位點，參與炎癥反應[35-36]；Cxcl2的表達產物為趨化因子（C-X-C）配體2（CXCL2或MIP-2），能激活粒細胞，誘導自然殺傷細胞增殖與活化；Cxcl10的表達產物為趨化因子（C-X-C）配體10（CXCL10），主要介導Th型炎癥反應，在不同類型肝病中普遍表達降低，且在疾病的發生、發展、治療和預后過程中發生顯著變化[37]。上述基因不僅表達量變化一致，還同時受到核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）信號通路的調控。NF-κB蛋白家族可以選擇性地結合在B細胞κ-輕鏈增強子上，進而調控許多基因的表達。在細胞的炎癥反應、免疫應答等過程中NF-κB起到關鍵性作用。可見，在MAFLD的發生發展過程中，炎癥反應的出現及受大蒜多糖干預而恢復，可能是通過NF-κB信號通路進行調節的。

本研究對影響肝臟脂質代謝主要基因的轉錄水平進行了定量研究，包括脂肪酸合成酶基因（Fasn）和乙酰輔酶A羧化酶1基因（Acaca）可轉錄表達肝臟脂質合成的關鍵酶，肉堿脂酰轉移酶1α基因（Cpt1a）和酰基輔酶A氧化酶基因（Acox）分別可轉錄表達肝臟線粒體β-氧化關鍵酶和過氧化物酶體β-氧化關鍵酶，肝臟脂肪轉運蛋白基因（Cd36）和肝臟脂肪酸結合蛋白基因（Fabp1）可轉錄表達肝臟攝取游離脂肪酸功能的關鍵蛋白，載脂蛋白B基因（ApoB）和微粒體甘油三酯轉運蛋白基因（Mttp）可轉錄表達參與肝臟脂分泌代謝的關鍵蛋白。本研究結果顯示，MCD飲食誘導后，Fasn、Cpt1a、Acox、Fabp1和Mttp的表達量顯著降低（P＜0.05），Cd36的表達量大幅度提高（P＜0.05），但在大蒜多糖干預之后只有Cpt1a和Acox兩個基因的變化得到顯著回復（P＜0.05），表明在MCD飲食誘導后，肝組織攝入的脂肪量大幅增加且不受大蒜多糖影響，大蒜多糖對肝組織脂質沉積的改善可能是由于對肝臟脂肪酸β-氧化的促進作用。

總體來講，MCD飲食誘導后，小鼠肝細胞在缺失蛋氨酸和膽堿的情況下無法合成肝磷脂酰膽堿，胞內脂質不足的錯誤信號導致大量表達Cd36，進而大幅提高了脂質攝入量，從而出現了脂質在肝細胞的異常沉積。肝臟脂質沉積后代謝主要發生在肝細胞線粒體中，而在線粒體氧化磷酸化過程中，O2的不完全還原則會產生大量ROS，在對肝細胞產生氧化應激損害的同時，部分ROS發揮TFs作用與NF-κB抑制蛋白相結合，激活了NF-κB信號通路，調控下游Hmox1、Tnf、Ccl2、Cxcl2、Cxcl10等基因表達及啟動細胞凋亡進程，包括抑制肝細胞Cpt1a、Acox基因的表達及脂質β-氧化、抑制SOD表達等作用，大蒜多糖的干預逆轉了上述進程。

4 結論

綜上所述，大蒜多糖的干預減少或基本消除了MCD飲食導致的肝損傷，MGP組效果比較顯著且添加量適中。具體作用機制可能是通過NF-κB信號通路調控脂質代謝和炎性基因表達，激活了肝細胞脂質β-氧化，減少脂質沉積，提高了SOD表達量，減少了肝細胞脂質過氧化。這些結論為大蒜多糖在MALFD病情發展中發揮改善作用提供了一種潛在的機制解釋，并表明大蒜多糖作為一種替代功能成分在食品加工領域具有巨大的應用潛力。