2022年達州市家畜O型口蹄疫免疫抗體監測與分析

張 蕾,歐云文,劉俐君,趙小波,唐慧倫,楊 青,李 成,高 嵩,李清竹

(1.達州市動物疫病預防控制中心,四川達州 635000;2.開江縣動物疫病預防控制中心,四川達州 636250;3.中國農業科學院蘭州獸醫研究所 家畜疫病病原生物學國家重點實驗室,甘肅蘭州 730046)

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病,被世界動物衛生組織(World organization for animal health,WOAH)列為必須報告的法定動物疫病之一,是我國一類動物疫病[1-4]。該疫病無明顯季節性,豬、牛、羊均為易感動物,主要臨床癥狀為鼻腔、口腔、嘴唇、蹄部和乳房皮膚出現水泡,繼而發生潰爛[5-6]。FMDV為無囊膜小RNA病毒,有A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3共7個血清型,不同血清型間無交叉保護[1]。目前,非洲地區呈多種血清型混合流行,亞洲、歐洲地區主要流行O型,O型和A型為我國FMD主要流行亞型,其中O型FMD對我國養殖業威脅最大[4,7-12]。據統計,2022年全球共發生FMD疫情664起,造成9萬余頭牛、羊感染,其中O型464起,包括歐洲1起、非洲51起、亞洲412起,蒙古、俄羅斯、哈薩克斯坦、印度尼西亞等周邊國家均有報告,我國廣西梧州市某屠宰場亦發生1起O型FMD疫情。鑒于周邊國家(地區)持續暴發FMD疫情,境外輸入和國內擴散風險極大,我國FMD防控形勢依舊復雜嚴峻。

達州地處川渝陜結合部,是我國生豬產能調控大市。FMD尚無針對性的治療藥物,主要防控策略為強制性免疫和撲殺陽性動物。2022年達州市O型FMD疫苗共免疫豬599.27萬頭,牛117.6萬頭,羊158.06萬只。為評估達州市家畜O型FMD免疫效果,及時發現薄弱環節,調整防控策略,消除疫情隱患。本文隨機采集了轄區內180個場點(規模場、散養戶和屠宰場)的2 879份家畜血清,采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)進行免疫抗體檢測,并對檢測結果進行分析,為達州市O型FMD的科學防控提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣本 2022年采自達州市7個縣(市、區)和2個市級直管開發區180個場/點(包括規模場、散養戶和屠宰場)的2 879份家畜血清,其中豬血清1 848份,牛血清501份,羊血清530份,每個場根據存欄情況分別采集血清樣品10～20份,每個散養戶采集血清樣品1～5份。按照無菌要求,靜脈采血2～3 mL,2 500 r/min離心分離血清,置-20℃冷凍保存待檢。

1.1.2 主要試劑 口蹄疫病毒O型競爭ELISA抗體檢測試劑盒,蘭州獸研生物科技有限公司產品,置4℃冷藏保存備用。

1.1.3 主要儀器設備 全自動洗板機(405 LSRS),美國BioTek公司產品;酶標儀(Multiskan FC),美國Thermo Fisher公司產品;離心機(5430R)和各種量程移液器,德國Eppendorf 公司產品;生化培養箱(SPX-100B-Z),上海博迅實業有限公司醫療設備廠產品。

1.2 方法

1.2.1 抗體檢測 待檢血清樣品和檢測試劑盒室溫平衡30 min后,按照口蹄疫病毒O型競爭ELISA抗體檢測試劑盒操作說明書檢測待檢血清樣品。

1.2.2 結果判定 按照口蹄疫病毒O型競爭ELISA抗體檢測試劑盒結果判定說明判定結果。若某場(點)樣品陽性率≥70%,則判定該場(點)為FMD免疫抗體陽性場(點)。

2 結果

2.1 不同種類家畜O型FMD免疫抗體檢測結果

2022年全市家畜O型FMD免疫抗體共監測場(點)180個,陽性場(點)160個,場(點)陽性率為88.89%,其中豬、牛、羊分別監測場(點)116個、33個和31個,場(點)陽性率分別為90.52%、93.94%和77.42%;共監測血清樣品2 879份,陽性樣品2 556份,樣品陽性率為88.78%,其中豬、牛、羊分別監測樣品1 848份、501份和530份,樣品陽性率分別為89.77%、93.41%和80.94%(表1),均達到農業農村部規定標準(即群體免疫抗體陽性率≥70%)。通過獨立樣本t檢驗,牛的場(點)陽性率和樣品陽性率均顯著高于羊(P<0.05)。

表1 不同種類家畜O型FMD免疫抗體檢測結果

2.2 不同場/點O型FMD免疫抗體檢測結果

規模場(存欄量≥500頭)、適度規模場(存欄量<500頭)、散養戶和屠宰場的場(點)陽性率分別為100%、89.32%、84.09%和83.33%,樣品陽性率分別為96.19%、88.17%、82.61%和86.25%,均達到農業農村部規定標準(表2)。通過獨立樣本t檢驗,規模場(存欄量≥500頭)的場(點)陽性率和樣品陽性率均極顯著高于散養戶(P<0.001)。

表2 不同場點O型FMD免疫抗體檢測結果

2.3 不同區域O型FMD免疫抗體檢測結果

全市7個縣(市、區)和2個市級直管開發區家畜O型FMD免疫抗體場(點)陽性率、樣品陽性率均達到農業農村部規定標準,其中通川區最高,場(點)陽性率和樣品陽性率分別為100%和96.36%。渠縣最低,場(點)陽性率和樣品陽性率分別為73.08%和75.17%,通川區、達川區、萬源市、宣漢縣的場(點)陽性率和樣品陽性率均高于90%(表3)。

2.4 不同季節O型FMD免疫抗體檢測結果

全年四個季節家畜O型FMD免疫抗體場(點)陽性率、樣品陽性率均超過農業農村部規定標準,其中夏季場(點)陽性率最高(92.31%),春季最低(86.27%),通過獨立樣本t檢驗,差異顯著(P<0.05);冬季樣品陽性率最高(90.76%),春季最低(86.27%)(表4),通過獨立樣本t檢驗,差異顯著(P<0.05)。

表4 不同季節O型FMD免疫抗體檢測結果

2.5 不同生長階段O型FMD免疫抗體檢測結果

3種不同生長階段的家畜O型FMD免疫抗體場(點)陽性率、樣品陽性率均超過農業農村部規定標準,其中種畜場(點)陽性率和樣品陽性率最高,分別為96.72 %和92.62 %;保育畜場(點)陽性率和樣品陽性率最低,分別為72.22 %和84.41 %(圖1)。通過獨立樣本t檢驗,差異顯著(P<0.05)。

*P<0.05

3 討論

疫苗免疫與抗體監測是動物疫病防控與凈化的重要技術手段[1,13]。ELISA技術作為重要的血清學診斷方法,可用于大量臨床樣品的檢測。在動物疫病監測過程中常通過商品化ELISA抗體檢測試劑盒分析評估疫苗免疫效果,為及時調整免疫程序等防控策略提供數據支撐[14]。FMD為我國強制性免疫的動物疫病之一,其中O型FMD為我國及周邊區域流行血清型。因此,監測與分析易感家養動物(豬、牛、羊)群體O型FMD免疫抗體水平,評估疫苗免疫效果,在FMD防控與凈化過程中發揮著不可或缺的作用。

本研究結果顯示,O型FMD免疫抗體場(點)陽性率為88.89%,樣品陽性率為88.78%,均超過了國家規定的標準,表明2022年達州市已建立較好的家畜O型FMD免疫保護屏障。在不同種類家畜方面,場(點)陽性率和樣品陽性率從高至低依次為牛、豬、羊,其中牛的場(點)陽性率和樣品陽性率均顯著高于羊。在不同類型場點方面,屠宰環節的場(點)陽性率顯著低于養殖環節。規模場(存欄量≥500頭)陽性率、樣品陽性率均高于適度規模場(存欄量﹤500頭)與散養戶。

養殖場應該結合本地防疫政策、疫病流行規律和養殖規模等科學制定合理的免疫程序,鄉鎮畜牧獸醫站需配備完善的冷鏈設施設備,避免因運輸和貯存條件不適,影響疫苗質量。動物疫病預防控制機構要加大FMD監測力度,提高監測頻次,擴大監測范圍,尤其是要對散養戶和羊進行重點監測,全面掌握免疫情況和流行趨勢,對不合格場點要及時補免,消除免疫空白,提高動物群體抗感染能力。不同區域分析發現,無論是免疫抗體場(點)陽性率還是樣品陽性率,通川區均最高,是因為該區域為市級黨政機關所在地,養殖審批、防疫落實、日常監管等方面均較其他區域更加嚴格,行業主管部門要求更高,人員和經費保障更有力。通川區、萬源市、宣漢縣和達川區的該兩項指標均優于開江縣、高新區、東部經開區、大竹縣和渠縣,應與各地區對家畜疫苗免疫重視程度,防控措施落實力度,防疫員免疫技術水平,采樣時機,牲畜自身健康狀況以及地理環境等因素有關。各地政府要高度重視動物防疫工作,認真貫徹落實國家FMD防控要求,做實各項防控措施,落實經費保障,加大宣傳力度,尤其是散養戶的動物防疫方面的宣傳教育,強化考核與監督。同時加強基層獸醫隊伍建設,聘用一批責任心強、業務水平高而且熱愛畜牧獸醫工作的防疫員,定期開展培訓,加強工作指導,實行績效管理,提高工作效能。不同季節分析發現,春季(3-5月)、秋季(9-11月)的免疫抗體場(點)陽性率和樣品陽性率均較低,夏季(6-8月)和冬季(12-次年2月)均較高,這與各地春、秋季重大動物疫病強制免疫工作進度密切有關。達州市每年3月和9月份啟動春秋防工作,基層部門陸續開展強免疫苗免疫,在5月和11月份左右基本完成免疫工作,而部分動物群體才產生免疫抗體或抗體水平尚未達到峰值。因此,血清樣品免疫抗體陽性率則可能較低。與之相比,每年6月和10月份(即春、秋防結束后)各地均會根據免疫抗體監測情況開展一次補免工作,即在春、秋防較高免疫抗體水平基礎上進行加強免疫,進而產生更高的免疫抗體水平,甚至達到抗體峰值。不同生長階段分析發現,種畜場(點)免疫抗體陽性率和樣品陽性率均最高,保育畜場(點)均最低,這與種畜飼養周期長、疫苗免疫頻次多,保育畜出生時間短、疫苗接種時間短且次數少,母源抗體的干擾等因素有關[22]。

綜上所述,雖然2022年達州市O型FMD免疫抗體整體水平達到國家標準,建立了有效的免疫保護屏障,但仍然有部分地區和場點免疫效果較差,仍存在發生疫情的潛在風險。因此,持續強化O型FMD免疫抗體監測,及時補免,確保不發生家畜FMD疫情。