氟雷拉納咀嚼片原料與輔料相容性研究

張欣欣,白玉婷,史夢艷,翟斌濤,張繼瑜,李 冰

(中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所 農村農業部獸用藥物創制重點實驗室甘肅省新獸藥工程重點實驗室,甘肅蘭州 730050)

氟雷拉納(fluralaner),4-[5-(3,5-二氯苯基)-4,5-二氫-5-(三氟甲基)-3-異唑基]-2-甲基-N-[2-氧代-2-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]乙基]苯甲酰胺[1],為異噁唑啉類化合物,可抑制無脊椎動物神經系統中的谷氨酸和γ-氨基丁酸門控氯離子通道發揮殺蟲作用,主要用于治療犬、貓體外寄生蟲(蜱、跳蚤等)[2-6]。藥物組成包括活性物質和輔料,可影響藥物的穩定性、溶解性和生物利用度,繼而阻礙藥物開發利用[7]。所以,在輔料組成設計中要考慮活性成分的配比禁忌等因素[8-10]。制劑處方工藝研發前,必須對原輔料的相容性進行考察。本研究通過影響因素試驗,用高效液相色譜對氟雷拉納與不同輔料的配伍進行相容性評價,為氟雷拉納咀嚼片處方設計提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 氟雷拉納原料藥,常州亞邦齊暉醫藥化工有限公司產品;豬肝粉3號、豬肝粉2號、豬肝粉1號,陜西新天域生物科技有限公司產品;硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、玉米淀粉、聚乙二醇3350(PEG3350)、蔗糖、大豆油、甘油、阿斯巴甜,陜西圣藥醫藥科技有限公司產品;苯甲酸鈉、山梨酸鉀、甘露醇、乳糖、羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲基纖維素鈉、微粉硅膠、對羥基苯甲酸丙酯鈉、丙二醇、硝酸鉀、氯化鈉,國藥集團化學試劑有限公司產品;明膠、泊洛沙姆188,上海麥克林生化科技有限公司產品;乙腈,國藥集團化學試劑有限公司產品;乙腈、磷酸(色譜級),賽默飛世爾科技有限公司產品。

1.1.2 主要儀器 ME-403型電子天平,梅特勒-托利多儀器有限公司產品;Agilent-LC 1290高效液相色譜儀,安捷倫科技有限公司產品;UPT-II-40L優普超純水制造系統,上海優普實業有限公司產品;KQ-600DE數控超聲清洗器,昆山市超聲儀器有限公司產品;WD-A藥品穩定性檢查儀,天津藥典標準儀器廠生產。

1.2 方法

1.2.1 輔料相容性樣品的制備 本試驗口服固體制劑,選輔料用量較大填充劑、黏合劑、矯味劑等,用氟雷拉納∶輔料=1∶5比例混合,用量較小潤滑劑、防腐劑等,用氟雷拉納∶輔料=20∶1比例混合(表1)。

表1 原輔料相容性處方設計

1.2.2 影響因素試驗 按照穩定性影響因素試驗方法,分別將裝有樣品的玻璃培養皿放在強光(4500±500)lx、高溫(60℃)、高濕(RH 92%±5%)及高濕(RH 75%±5%)的條件下放置10 d,以原料藥和輔料分別做平行對照試驗,用高效液相色譜法檢查其含量和有關物質放置前后有無變化,同時觀察樣品性狀變化。

1.2.3 色譜條件 色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠(Inertsil ODS-3,4.6 mm×250 mm,5 μm);以1 mL/L磷酸水-1 mL/L磷酸乙腈為流動相;流速1.2 mL/min;檢測波長210 nm;柱溫40℃;進樣量10 μL;梯度洗脫∶初始比例為VA∶VB=40∶60,持續2 min,經13 min比例變化為VA∶VB=15∶85,持續時間15 min。

1.2.4 溶液配制 供試品溶液:精密稱量樣品適量(含氟雷拉納17.5 mg)與50 mL容量瓶中,用乙腈稀釋定容至刻度即可。對照溶液:精密量取1 mL有關物質供試品溶液與10 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,作為供試品溶液1,精密量取供試品溶液11 mL于10 mL容量瓶中,定容,作為對照溶液。

2 結果

根據文獻[11]中獸用化學藥物穩定性研究技術指導原則,供試品的“顯著變化”為含量測定中發生5%的變化,所以含量測定合格范圍為(100±5)%。根據文獻[11]中獸用化學藥物雜質研究技術指導原則,原料藥雜質質控限度為0.5%。表2為0 d原輔料相容性試驗測試結果,混合原料藥與豬肝粉的樣品外觀為棕褐色粉末,與明膠的樣品外觀為淡黃色粉末,其余樣品均為白色粉末或乳白色液體。0 d泊洛沙姆188和明膠與原料藥混合時含量低于95%。表明原料藥氟雷拉納與泊洛沙姆188和明膠不能進行配伍。

表2 0 d原輔料相容性試驗測試結果

2.1 高溫試驗結果

符合含量合格范圍(100±5)%與供試品溶液中雜質含量小于規定的輔料有PEG3350、泊洛沙姆188、玉米淀粉、明膠、羧甲基纖維素鈉、甘油、豬肝粉1號、豬肝粉3號、大豆油、十二烷基硫酸鈉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、對羥基苯甲酸丙酯鈉、硬脂酸鎂、阿斯巴甜和微粉硅膠,含量與0 d相比差異不顯著,雜質含量增加,其中氟雷拉納與大豆油混合樣品性狀發生輕微顏色的變化(表3)。

表3 高溫10 d原輔料相容性測試結果

2.2 光照試驗結果

符合含量測定合格范圍(100%±5%)與供試品溶液中雜質含量小于規定的輔料有PEG3350、泊洛沙姆188、玉米淀粉、明膠、羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲基纖維素鈉、甘油、丙二醇、豬肝粉1號、豬肝粉2號、豬肝粉3號、大豆油、十二烷基硫酸鈉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、對羥基苯甲酸丙酯鈉、硬脂酸鎂、阿斯巴甜和微粉硅膠,含量與第0 d相比差異不顯著,輔料雜質均有所增加,樣品性狀均無變化(表4)。

表4 光照10 d原輔料相容性測試結果

2.3 高濕試驗結果

符合含量合格范圍(100%±5%)、吸濕性小于5%與供試品溶液中雜質含量小于規定的輔料有PEG3350、玉米淀粉、大豆油、十二烷基硫酸鈉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、對羥基苯甲酸丙酯鈉、硬脂酸鎂、阿斯巴甜和微粉硅膠。其中氟雷拉納與明膠、羧甲基纖維素鈉、玉米淀粉、交聯羧甲基纖維素鈉、PEG3350、蔗糖、豬肝粉1號、豬肝粉2號、豬肝粉3號、泊洛沙姆188、丙二醇和甘油的混合樣品吸濕性大于5%,混合樣品粉末有結塊現象(表5)。

表5 高濕(92%±5%)10 d原輔料相容性測試結果

符合含量測定合格范圍(100%±5%)、吸濕性小于5%與供試品溶液中雜質含量小于規定的輔料有PEG3350、泊洛沙姆188、玉米淀粉、丙二醇、大豆油、十二烷基硫酸鈉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、對羥基苯甲酸丙酯鈉、硬脂酸鎂、阿斯巴甜和微粉硅膠。其中氟雷拉納與明膠、羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲基纖維素鈉、豬肝粉1號、豬肝粉2號、豬肝粉3號、丙二醇和甘油的混合樣品吸濕性大于5%,且混合樣品粉末樣出現結塊現象(表6)。

表6 高濕(72%±5%)10 d原輔料相容性測試結果

3 討論

氟雷拉納分子結構中的異惡唑環呈弱堿性,在強酸環境中會存在開環現象;結構中酰胺鍵是一種帶負電的官能團,呈中性。從檢測數據上看,第0天以明膠和泊洛沙姆188位輔料的樣品原料藥氟雷拉納的含量低于95%,泊洛沙姆188有助溶作用,有水分存在時助溶了氟雷拉納,可能發生水解反應,降低了藥物的生物利用度[12]。氟雷拉納在樣品在60℃高溫、4500 lx光照、92%高濕和75%高濕條件下,有關物質雜質含量均較0 d條件下有所增加,主要原因是氟雷拉納中異惡唑環具有弱堿性,由于N-O鍵較弱,有發生光解或者熱分解的可能性。60℃高溫條件下,豬肝粉2號、交聯羧甲基纖維素鈉和丙二醇為輔料的樣品中氟雷拉納的含量低于95%,豬肝粉2號可能存在重金屬,在無水環境下可以作為Lewis酸,可以吸附藥物,如果結合緊密或很難解吸則會降低藥物的生物利用度[11]。交聯羧甲基纖維素鈉,潛在可反應的雜質為一氯乙酸、亞硝酸鈉、硝酸鈉,由于靜電作用吸附弱堿性藥物,殘留的一氯乙酸會發生SN2親核反應,氟雷拉納的分子結構中有異惡唑環,為弱堿性鍵,具有與一氯乙酸發生反應的可能性[13-15]。相對濕度92%條件下,明膠、羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲基纖維素鈉、豬肝粉1號、豬肝粉2號、豬肝粉3號、泊洛沙姆188、丙二醇和甘油為輔料樣品中的氟雷拉納的含量低于95%。相對濕度75%條件下,明膠、羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲基纖維素鈉、豬肝粉2號、豬肝粉3號、甘油為輔料樣品中的氟雷拉納含量低于95%,主要原因分析如下:輔料在高濕條件下具有一定的吸濕性,導致氟雷拉納在相應的樣品重量下含量降低,而單獨的氟雷拉納對照樣品吸濕性為0,氟雷拉納含量及有關物質變化較小。在光照條件下,原輔料相容性樣品性狀均無變化,在高溫條件下,大豆油與原料藥氟雷拉納混合物顏色輕微變化,但在高濕條件下,性狀變化較大,主要為原料藥氟雷拉納與輔料混合粉末結塊現象,試驗結果表明氟雷拉納咀嚼片應在干燥常溫的條件下保存。