阿司匹林丁香酚酯咀嚼片的穩定性試驗

白莉霞,劉希望,楊亞軍,李世宏,秦 哲,葛聞博,許 笑,李劍勇

(中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所,農業農村部獸用藥物創制重點實驗室,甘肅省新獸藥工程重點實驗室,甘肅蘭州 730050)

阿司匹林丁香酚酯(aspirin eugenol ester,AEE)是利用藥物結構拼合原理研制的一種新型非甾體抗炎藥物,由阿司匹林的羧基與丁香酚的羥基結合而成[1-2]。在保持前體藥物藥理活性的基礎上減輕了阿司匹林對胃腸道的刺激及丁香酚的易氧化與毒性等問題[3],使藥理活性增強,不良反應降低。多項研究已證實AEE具有解熱抗炎[4-5]、降血脂[6]、預防血栓[7-8]、抗氧化[9-10]等作用。為使其更好地應用于臨床,研制了AEE咀嚼片,擬用于寵物血栓的防治。咀嚼片與普通片劑相比具有經嚼碎后直接吞咽、無需用水送服、可隨時隨地服用、促進藥物在體內的溶解與吸收減輕胃腸道負擔等[11-12]。將AEE制成咀嚼片,克服了傳統片劑適口性差的問題,可使寵物充分咀嚼藥物,保證AEE被較好吸收,發揮良好藥效[13]。但咀嚼片濕法制粒壓片中壓力較小,容易導致片劑穩定性降低。因此,考察AEE咀嚼片的穩定性在其質量控制研究中十分關鍵。本研究參照文獻[14]的相關規定,依據文獻[15]獸用化學藥物穩定性技術指導要求,研究影響因素試驗、加速試驗及長期試驗等對AEE咀嚼片穩定性的影響,為制劑的包裝、貯藏條件、有效期的確定提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 阿司匹林丁香酚酯對照品(含量99.6%,批號20190701)、雜質A對照品(含量99.5%,批號20190701)、阿司匹林丁香酚酯原料藥(含量100.1%,批號69119004),中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所獸藥研究室研制;阿司匹林對照品、丁香酚對照品、水楊酸對照品,中國食品藥品檢定研究院產品;AEE咀嚼片(批號20200501,20200502,20200503),四川恒通動物制藥有限公司制備;色譜純磷酸(批號STBG5058V),Sigma公司產品;色譜純甲醇和色譜純乙腈,賽默飛世爾科技有限公司產品。

1.1.2 主要儀器 Agilent LC1290高效液相色譜儀、Agilent Cary100 紫外-可見分光光度計,美國安捷倫科技有限公司產品;電熱鼓風干燥箱,上海恒一科學儀器有限公司產品;KQ-600DE數控超聲清洗機,昆山市超聲儀器有限公司產品;YP-GSD150綜合藥品穩定性試驗箱,上海蘇盈試驗儀器有限公司產品;WD-A藥物穩定性檢查儀,天津藥典標準儀器廠產品;CS-2B脆碎度測試儀,天津創興電子設備制造有限公司產品;BT25S型電子分析天平和SQP型電子天平,賽多利斯科學儀器有限公司產品。

1.2 方法

1.2.1 影響因素試驗 將AEE咀嚼片(批號20200501)分別在高溫(60℃)、高濕(25℃、RH 90%±5%、強光照射(4500±500)lx條件下放置10 d,第0、5、10天時按照質量標準所建立的方法測定咀嚼片的外觀性狀、重量差異、脆碎度、含量、有關物質和溶出度,考察影響AEE咀嚼片穩定性的因素。

1.2.2 加速試驗 將3批AEE咀嚼片(批號20200501、20200502、20200503)模擬上市包裝(寵物用熱帶型泡罩鋁及鋁箔包裝),置于綜合藥品穩定性試驗箱40℃±2℃、RH75%±5%條件下,放置6個月,分別于第0、1、2、3、6個月末取樣,檢測咀嚼片的外觀形狀、重量差異、脆碎度、含量、有關物質和溶出度。

1.2.3 長期試驗 將3批AEE咀嚼片(批號20200501、20200502、20200503)模擬上市包裝(寵物用熱帶型泡罩鋁及鋁箔包裝),置于25℃±2℃、RH 60%±10%條件下進行試驗,分別于第0、3、6、9、12、18、24個月末取樣,檢測咀嚼片外觀性狀、重量差異、脆碎度、含量、有關物質和溶出度。

1.2.4 考察項目 對AEE咀嚼片的外觀性狀、重量差異、脆碎度、溶出度、含量及有關物質進行檢查。①外觀性狀。取AEE咀嚼片置光照良好的白色背景下,目測觀察產品顏色,應為白色片。②重量差異。依據《中國獸藥典》2020版0101片劑項下規定,取3批AEE咀嚼片各20片,精密稱定總重量,求得平均片重后,再分別精密稱定每片的重量,每片重量與平均片重相比較,超出重量差異限度的不得多于2片,并不得有1片超出限度1倍,限度規定為±5%。③脆碎度檢查。依據文獻[14]片劑脆碎度檢查法,片重為0.65 g或以下者取若干片,使其總重約為6.5 g。用吹風機吹去片劑脫落的粉末,精密稱重,置片劑脆碎度檢查儀的圓筒中,25 r/min轉動100次。取出,同法除去粉末,精密稱重,減失重量不得過1%,且不得檢出斷裂、龜裂及粉碎的片。④溶出度測定。按照文獻[14]附錄溶出度測定(槳法),以1%十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質,體積900 mL,轉速為75 r/min,依法操作。在60 min時,取溶液10 mL,濾過,取續濾液3倍稀釋后,于紫外可見分光光度計279 nm波長下測定。⑤含量測定。色譜條件為:Hypersil ODS(4.6 mm×150 mm,5 μm)色譜柱;甲醇∶水(V∶V= 77∶23)流動相;279 nm檢測波長;35℃柱溫;0.9 mL/min流速,進樣10 μL。⑥有關物質測定。色譜條件為:Phenomenex luna C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱;0.5%磷酸水溶液(流動相A)與乙腈(流動相B);35℃柱溫;279 nm檢測波長;1.0 mL/min流速;進樣10 μL(表1)。

表1 梯度洗脫程序

2 結果

2.1 影響因素試驗結果

AEE咀嚼片在高溫、高濕、強光條件下的各項指標均符合質量標準(圖1),在不同條件下外觀性狀幾乎不變,均為白色片。AEE含量均在標示量90%～110%之間(表2),雜質A含量均為0.13%,60 min時溶出度均大于限度要求70%,重量差異變化均在±5%之內,脆碎度減失重量均小于1%,且無斷裂、龜裂及粉碎片。表明AEE咀嚼片在高溫、高濕及強光條件下穩定性良好。

圖1 AEE咀嚼片影響因素試驗的外觀性狀

表2 AEE咀嚼片(批號20200501)影響因素試驗結果

2.2 加速試驗結果

加速條件下AEE咀嚼片的各項檢測指標均符合質量標準,外觀形狀均為白色片(圖2)。AEE含量均在標示量90%～110%之間,無明顯變化,雜質A含量均為0.13%;60 min時溶出度均大于限度要求70%;重量差異變化均在±5%之內;脆碎度減失重量均小于1%,且無斷裂、龜裂及粉碎片。說明AEE咀嚼片在加速條件下穩定(表3～表5)。

圖2 AEE咀嚼片(批號20200501)加速試驗的外觀性狀

表3 AEE咀嚼片(批號20200501)加速試驗結果

表4 AEE咀嚼片(批號20200502)加速試驗結果

表5 AEE咀嚼片(批號20200503)加速試驗結果

2.3 長期性試驗結果

AEE咀嚼片的含量隨著時間的延長呈下降趨勢,但均在標示量90%～110%之內(表6～表8),雜質A含量均在0.5%以內,溶出度自12月起有一定程度降低,但仍大于限度要求70%,重量差異變化均在±5%之內,脆碎度稍有所上升,但減失重量小于1%,且無斷裂、龜裂及粉碎片;外觀性狀無變化,均為白色片(圖3)。AEE咀嚼片的各項檢測指標均符合質量標準有關規定,表明咀嚼片放置24個月內穩定性良好。

圖3 AEE咀嚼片(批號20200502)長期試驗的外觀性狀

表6 AEE咀嚼片(批號20200501)長期試驗結果

表7 AEE咀嚼片(批號20200502)長期試驗結果

表8 AEE咀嚼片(批號20200503)長期試驗結果

3 討論

本研究旨在考察AEE咀嚼片在不同極端環境條件下的穩定性,為咀嚼片有效期的計算提供理論支撐。本研究對1批次AEE咀嚼片中試產品進行影響因素試驗,對3批次中試產品進行加速試驗及長期試驗。在高溫、高濕與強光條件下,AEE咀嚼片的含量、有關物質均沒有明顯改變,表明AEE的化學穩定性良好;溶出度、重量差異與脆碎度均符合質量標準,表明AEE咀嚼片的貯存穩定性良好。在加速條件下,AEE咀嚼片的各項指標均無明顯變化,產品較穩定。在長期貯存條件下,AEE咀嚼片的含量隨著時間的延長稍有所降低,但仍在標示量限度之內;有關物質沒有明顯差異;溶出度隨時間逐漸降低,脆碎度有所上升,可能由于片劑水分減少,硬度降低,粘結力不強所致;重量差異均符合標準。表明AEE咀嚼片制備工藝穩定可行,所選用的包裝合適,在極端環境條件下產品質量較為穩定。但仍然建議制劑包裝應密閉,宜置于干燥陰涼處存放。