上海市松江區豬口蹄疫病毒3ABC 抗體血清學調查

金一春 上海市松江區農產品質量安全中心 上海 201611

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄動物發生急性、熱性、高度接觸性的烈性傳染病[1]，聯合國糧農組織（FAO）和世界動物衛生組織（OIE）將其列入必須通報的動物疫病[2]。 該病傳播快、發病率高，暴發流行時會造成十分慘重的經濟損失， 是當前影響養豬業最嚴重的傳染病之一。 我國為防控口蹄疫采取免疫、檢疫、監測、撲殺及消毒等相結合的辦法，其中最為關鍵性的措施就是采取疫苗免疫接種[3]。

口蹄疫的非結構蛋白會參與病毒復制、 多聚蛋白裂解和病毒顆粒組裝，與結構蛋白相比變異較少、相對保守[4]。根據這些特性，2004 年Moonen P 等[5]發現采用FMDV 非結構蛋白3ABC 抗體ELISA 方法不但能檢測陰性感染動物， 還能區分自然感染動物和滅活疫苗免疫動物。 為掌握松江區生豬口蹄疫感染情況，區分感染和免疫生豬，為轄區內豬口蹄疫防控提供科學依據，自2020 年起，筆者用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）方法連續3 年對轄區內的生豬開展口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體血清學檢測，檢測情況報告如下。

1 材料與方法

1.1 被檢血清 按照轄區內生豬的養殖方式和規模，隨機對具有代表性的規模場、專業戶抽樣，采集已完成免疫28 d 以上的生豬血液樣本，采用常規方法分離血清，并于-20 ℃冰箱冷凍保存、備用。 共抽檢血清樣本1 505 份，其中規模豬場共950 份（種豬590 份、肉豬360 份），專業戶555 份（肉豬）。

1.2 檢測試劑 選用武漢科前生物股份有限公司生產的口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 阻斷ELISA抗體檢測試劑盒。

1.3 檢測方法與結果判定

1.3.1 檢測方法 嚴格按照檢測試劑盒的使用說明。 為達到試驗所需條件要求， 將檢測試劑在20～25 ℃環境下平衡，用超純水或去離子水將濃縮洗液作20 倍稀釋，用樣品稀釋液將陰性、陽性對照血清和待檢血清作2 倍稀釋。取微量反應板，用約300 μL洗滌液洗滌板孔，重復2 次，最后將板拍干；在微量反應板各相應孔中加入已處理過的被檢血清及陰性、陽性對照血清各100 μL，振蕩、混勻、封膜，置37 ℃下溫育60 min； 用約300 μL 洗滌液洗滌反應板孔，重復5 次，最后將板拍干；每孔加入酶標記物100 μL，振蕩、混勻、封膜，置37 ℃下溫育30 min；用約300 μL 洗滌液洗滌板孔，重復5 次，最后將板拍干；每孔加入底物溶液100 μL，混勻，置室溫（20～25 ℃）避光顯色10 min；每孔加入終止液50 μL，混勻，置酶標儀上用單波長630 nm 讀取結果。

1.3.2 結果判定 在試驗有效性成立條件下， 計算被檢樣品的阻斷率。阻斷率≥50%，該樣品判為抗體陽性，阻斷率<50%，該樣品判為抗體陰性。

2 結 果

2.1 不同年份豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體檢測 從檢測結果看（見圖1），2020 年，規模場和專業戶的豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體陽性率分別為0.0%和0.0%；2021 年，規模場和專業戶的豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體陽性率分別為2.12%和8.18%；2022 年，規模場和專業戶的豬口蹄疫非結構蛋白3ABC 抗體陽性率分別為1.25%和1.67%。

圖1 不同年份豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體檢測

2.2 不同養殖方式豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC抗體檢測 共抽檢豬血清樣品1 505 份，經檢測，陽性數有32 份，陽性率為2.13%。其中，規模場豬血清樣品950 份，陽性數11 份，陽性率為1.16%；養殖專業戶豬血清樣品555 份， 陽性數21 份， 陽性率為3.78%（見表1）。

表1 不同飼養方式豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體檢測

2.3 不同豬群豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體檢測 抽檢種豬血清樣品共590 份、 肉豬血清樣品共915 份。 檢測數據顯示（見表2），2020 年，種豬和肉豬的豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體陽性率分別為0.0%和0.0%；2021 年，種豬和肉豬的豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體陽性率分別為2.05%和5.92%；2022 年，種豬和肉豬的豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體陽性率分別為1.40%和1.40%。 不同養殖方式肉豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體檢測結果見圖2。

表2 不同豬群豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體

圖2 不同養殖方式肉豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體

3 討 論

監測結果表明，2020 年上海市松江區豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC 抗體陽性率為0.00%，而2021 年和2022 年的陽性率均高于2020 年。 其中，2021 年肉豬FMDV-3ABC 抗體陽性率為5.92%，結合2021 年上半年肉豬FMDV-O 免疫抗體合格率較低（42.7%），存在感染風險。 通過對豬場針對性的流行病學調查， 并未發現臨床感染案例， 由于FMDV在動物體內存在隱性感染狀況， 監測結果揭示，2021-2022 年規模場和專業戶豬群均存在FMD 無癥狀隱性感染情況，或者曾感染過并產生了抗體。

從調查數據匯總來看， 專業戶比規模場的陽性率高，肉豬比種豬的陽性數多，間接提示相對于種豬來說，日齡較小的肉豬由于FMDV-3ABC 抗體陽性率較高，發生口蹄疫病毒感染的可能性也越大。要加強專業戶的養殖管理理念， 提高生物安全和疫情防控意識，特別是在調運和引進種畜上加強管理，做好消毒工作和疫苗接種。

本次試驗采集的樣品都是來自轄區內口蹄疫免疫豬群， 有研究表明免疫非純化或者純度不高的疫苗同樣會產生非結構蛋白抗體陽性[6]，而當前疫苗生產工藝， 在病毒純化過程中不能去除全部非結構蛋白，這就對區分野毒感染還是免疫形成一定的干擾。本試驗結果也不排除疫苗純度不夠導致FMDV-3ABC 抗體陽性，所以，疫苗生產商需進一步改進疫苗純化工藝，從而提高檢測準確性，為口蹄疫防控起到積極作用。

本次監測調查只是做了初步篩查工作， 但結果也表明松江區動物口蹄疫野毒感染的風險依然存在，不能掉以輕心。 要根據實際情況，持續開展口蹄疫免疫抗體監測，并科學合理、有計劃地進行口蹄疫病毒非結構蛋白抗體的檢測；對于FMDV 非結構蛋白抗體陽性的個體或群體， 并不代表一定是感染了FMDV，建議開展流行病學調查，結合臨床癥狀，并采集相應的組織樣品及O/P 液等進行病毒核酸PCR 檢測；實行科學的免疫程序，確保100%免疫覆蓋率，有條件的及時對監測結果進行風險評估，作出科學的預警預報， 為本區動物口蹄疫的根除和消滅提供技術支撐。