非小細胞肺癌患者血清CA211水平和NK細胞數與預后相關

丁 飛，王 灑，黃常新

1.杭州師范大學附屬醫院 腫瘤科，浙江 杭州 310015；2.杭州師范大學 臨床醫學院，浙江 杭州 310018

非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的類型之一,約占肺癌的80%[1]。由于NSCLC早期臨床表現并不特異,大多患者確診時已錯過最佳治療時間,手術及放療效果較差,危害患者的生命健康[2]。因此尋找能夠預測NSCLC患者預后狀態的因子意義重大。糖類抗原211(carbohydrate antigen 211,CA211)存在于腫瘤細胞胞質中,當腫瘤細胞壞死時,CA211會釋放至血液,因此臨床常將血清CA211表達水平作為監測胰腺癌、肺癌等腫瘤疾病進展的特異性指標[3-4]。自然殺傷(natural killing,NK)細胞具有免疫清除、免疫監視和提高人體抗腫瘤免疫能力等功能,還能起到抑制腫瘤形成的作用[5],相關研究發現,肺癌的發生也與NK細胞數有關[6]。基于此,本研究測定了NSCLC患者血清CA211表達水平及NK細胞數,并分析了二者與NSCLC患者預后的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取杭州師范大學附屬醫院2019年6月至2022年7月收治的132例NSCLC患者作為實驗組,年齡30～80歲,平均(67.6±11.1)歲。納入標準:1)符合《中華醫學會肺癌臨床診療指南(2018)版》[7]中NSCLC的診斷標準;2)患者及家屬同意參與本研究并簽署知情同意書。排除標準:1)合并心、肝等臟器功能損傷者;2)合并其他惡性腫瘤者;3)伴有慢性炎性反應、免疫疾病者;4)不能積極配合隨訪者。另選取同期于杭州師范大學附屬醫院檢查,一般資料與實驗組患者相匹配的132例肺部良性病變患者作為對照組。本研究經杭州師范大學附屬醫院倫理委員會批準后執行(批準號:201905-1506)。

1.2 方法

1.2.1 資料收集:收集所有研究對象的年齡、性別、體質指數(body mass index,BMI)、吸煙史、高血壓、糖尿病、高脂血癥、其他疾病史(甲狀腺結節、腰椎間盤突出等)、血肌酐、血紅蛋白、中性粒細胞/淋巴細胞值(neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)及血小板計數等一般資料。并于杭州師范大學附屬醫院檢驗科收集血清 CA211 表達水平和NK 細胞水平數據。

1.2.2 血清CA211表達水平和NK細胞水平的測定:采集所有研究對象的空腹外周血3 mL,于3 500 r/min轉速下離心5 min,收集上層血清置于無菌離心管中并于-80 ℃的冰箱中保存,待檢。采用CA211檢測試劑盒(廈門萬泰凱瑞生物技術有限公司),利用Wan 200+全自動化學發光免疫分析儀(廈門萬泰凱瑞生物技術有限公司)檢測血清CA211表達水平。

采集所有研究對象的空腹外周血100 μL,與10 μL熒光抗體CD45/CD3/CD19/CD56混勻后于室溫下避光染色15 min,隨后加入300 μL紅細胞裂解液,渦旋3 s后靜置1 min,再加入100 μL中和緩沖液,渦旋混勻,最后加入500 μL鞘液,渦旋混勻,采用Navios型流式細胞儀(Beckman-Coulter公司)檢測NK細胞數。

以血清CA211表達水平(5.60 ng/mL)、NK細胞數(200×106/L)的中位數為臨界值,將NSCLC患者分為CA211低表達組(66例)、CA211高表達組(66例)、NK細胞低水平組(68例)及NK細胞高水平組(64例)。

1.2.3 隨訪:采用電話及門診復查等方式對納入研究的NSCLC患者進行1年隨訪,以患者復發或癌因死亡為隨訪終點,生存時間記錄為術后日期至患者復發或癌因死亡時間或最終隨訪截止時間。本研究中患者隨訪率為100%。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 一般資料比較

兩組年齡、性別、BMI、吸煙史、飲酒史等一般資料差異無統計學意義,而實驗組NLR值(3.93±0.79)高于對照組(2.90±0.42)(P<0.05)。

2.2 兩組血清CA211表達水平和NK細胞數

實驗組患者血清CA211表達水平高于對照組,而NK細胞數則低于對照組(P<0.05)(表1)。

表1 兩組血清CA211表達水平和NK細胞數

2.3 血清CA211表達水平及NK細胞數相關性分析

實驗組患者血清CA211表達水平與NK細胞數呈負相關(r=-0.405,P<0.001)(圖1)。

圖1 血清CA211表達水平及NK細胞數相關性分析Fig 1 Relationship between the expression level of serum CA211 and the number of NK cells

2.4 血清CA211表達水平、NK細胞數與NSCLC患者臨床病理特征的關系

血清CA211表達及NK細胞數與年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、有無胸腔積液、有無心包積液及組織學類型與無關,而不同血清CA211表達水平和NK細胞數的患者淋巴結轉移情況以及TNM分期存在性差異(P<0.05)(表2)。

表2 血清CA211表達水平、NK細胞數與NSCLC患者臨床病理特征的關系

2.5 NSCLC患者血清CA211表達水平、NK細胞數與生存時間的關系

CA211低表達患者1年生存率(61/66,92.42%)高于CA211高表達患者(53/66,80.30%)(χ2=4.117,P<0.05),NK細胞高水平患者1年生存率(63/68,92.65%)高于NK細胞低水平患者(51/64,79.69%)(χ2=4.702,P<0.05)(圖2,3)。

圖2 NSCLC患者血清CA211表達水平與患者1年總生存率的關系Fig 2 Relationship between serum CA211 expression level and 1-year overall survival rate in NSCLC patients

圖3 NSCLC患者血清NK細胞數與患者1年總生存率的關系Fig 3 Relationship between serum NK cell count and 1-year overall survival rate in NSCLC patients

2.6 多因素Cox回歸分析NSCLC患者預后的影響因素

淋巴結轉移、TNM分期、CA211是影響NSCLC患者預后的危險因素(P<0.05),NK細胞數是NSCLC患者預后的保護因素(P<0.05)(表3)。

表3 多因素Cox回歸分析NSCLC患者預后的影響因素Table 3 Multivariate Cox regression analysis of prognostic factors in NSCLC patients

3 討論

NSCLC是臨床常見的肺癌類型,常發于老年人群,大多數患者確診時已存在不同程度的轉移,導致常規治療方法效果并不理想,患者生存率較低[8]。因此尋找相關指標對NSCLC患者的預后進行預測,并及時施以干預措施具有重要意義。本研究探究了血清CA211表達水平及NK細胞數與NSCLC患者預后的相關性。

CA211是臨床常見的腫瘤標志物,其表達水平與胰腺癌、胃癌等腫瘤疾病的發生密切相關[9]。本研究中,實驗組患者血清CA211表達水平高于對照組,并且NLR值也高于對照組。這主要是由于CA211存在于腫瘤細胞胞質中,當腫瘤細胞發生溶解、破裂時,CA211會釋放入血液,進而導致血清CA211表達水平的升高。本研究結果還顯示,CA211低表達患者1年生存率高于CA211高表達患者。相關研究也顯示,CA211≥5 ng/mL的非小細胞癌患者無進展生存時間短于CA211<5 ng/mL的患者[10]。以上結果均表明血清CA211表達水平與NSCLC的發生及患者預后狀態密切相關。NLR值是反映機體炎性反應與免疫平衡的指標,NLR值升高表明該平衡趨向于腫瘤前的炎性反應,因此實驗組NLR值高于對照組。

大量研究表明,肺癌患者的預后狀態與機體免疫逃逸有關,而NK細胞作為機體免疫系統的屏障,在抗腫瘤免疫逃逸過程中發揮著重要作用[11],因此在診斷評估惡性腫瘤疾病時具有較高的穩定性。本研究結果顯示,實驗組患者NK細胞數低于對照組,并且NK細胞高水平患者1年生存率高于NK細胞低水平患者,推測是由于NK細胞能夠與腫瘤細胞表面的活化或抑制體結合,起到殺傷腫瘤細胞、抑制細胞逃逸的作用,進而也會影響NSCLC患者的預后狀態[12]。進一步分析NSCLC患者的臨床病理特征,結果顯示,淋巴結轉移、TNM分期、CA211,及NK細胞是影響NSCLC患者預后的重要因素。

綜上所述,NSCLC患者血清CA211表達水平、NK細胞數與臨床病理特征及預后有密切聯系,但CA211及NK細胞對NSCLC患者預后狀態的具體影響機制還需進行深入探討。