?；撬釋?duì)幼刺參生長(zhǎng)、抗氧化和代謝酶活性的影響

李培玉，王美琪，宋志東，胡順鑫，劉財(cái)禮，李 璐，劉經(jīng)未，陸國(guó)峰

（1.山東省海洋資源與環(huán)境研究院，山東 煙臺(tái) 264006；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)科學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海 201306）

?；撬崾且环N有機(jī)酸，最早從牛膽汁中分離獲得[1]。它只存在于動(dòng)物蛋白中，幾乎不存在于植物中[2]。?；撬嶙鳛橐环N以游離形式存在的含硫氨基酸，不參與蛋白質(zhì)的生物合成，但是卻參與了水生動(dòng)物體內(nèi)廣泛的基本生理功能，包括滲透調(diào)節(jié)[3]、膽鹽結(jié)合[4]、視覺(jué)和視網(wǎng)膜發(fā)育[5]、免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)[6]和抗氧化活性[7-8]。水產(chǎn)動(dòng)物缺乏?；撬釙?huì)產(chǎn)生一些癥狀，如肝膽代謝紊亂[9]、溶血性貧血[3]。水生動(dòng)物通常可通過(guò)多種途徑合成?；撬帷０腚装彼醽喠蛩崦擊让福–SD）和半胱氨酸雙加氧酶（CDO）是半胱氨酸亞磺酸途徑的兩種限速酶，催化蛋氨酸或半胱氨酸轉(zhuǎn)化為?；撬?。最近研究表明CDO 和CSD 的活性以及魚(yú)類(lèi)對(duì)這兩種酶催化效率的調(diào)節(jié)機(jī)制與魚(yú)類(lèi)內(nèi)源牛磺酸的合成能力有關(guān)[10-12]。一般認(rèn)為，內(nèi)源性?；撬岬漠a(chǎn)生不足以滿足大多數(shù)水生動(dòng)物的需求，因此需要額外在飼料中添加?；撬醄2]。多項(xiàng)研究表明，添加外源性牛磺酸可促進(jìn)魚(yú)蝦的生長(zhǎng)和飼料利用，然而各水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)牛磺酸的最佳需求量存在較大差異，如凡納賓對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）對(duì)飼料?；撬嵝枨罅繛橘|(zhì)量分?jǐn)?shù)0.17%[13]，尼羅羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus）為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.97%[14]，牙鯛（Dentex dentex）為2 g/kg[15]，草魚(yú)（Cenopharyngodon idella）為2.50 g/kg[16]，黃 條（Seriola lalandi）為7.50 g/kg[17]，虹鱒（Oncorhynchus mykiss）為5 g/kg[18]。牛磺酸添加量受多種因素影響，不僅與動(dòng)物種類(lèi)有關(guān)，還與配方中含硫氨基酸有關(guān)。

近年來(lái)，刺參（Apostichopus japonicus）消費(fèi)需求不斷上升，推動(dòng)刺參養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展。野生刺參主要攝取有機(jī)沉積物，包括細(xì)菌、原生動(dòng)物、藻類(lèi)或動(dòng)物的碎屑[19]。而在養(yǎng)殖實(shí)踐中，刺參飼料的原料來(lái)自鼠尾藻（Sargassum thunbergii）、海帶（Laminaria japonica）與馬尾藻（Scagassum）等?；撬岷枯^低的水生植物[20]，這與刺參體內(nèi)高含量的牛磺酸形成明顯對(duì)比[21-22]。明確刺參是否具有在體內(nèi)合成?；撬岬哪芰?，并確定刺參生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)牛磺酸的需要量極為重要。因此，本研究以幼參為對(duì)象，研究了不同水平的?；撬峒捌浯x中間體（半胱氨酸和磺基丙氨酸）對(duì)刺參生長(zhǎng)性能、體成分、代謝和抗氧化酶活性的影響，為?；撬嵩诖虆⑴浜巷暳现械目茖W(xué)應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 制備包被氨基酸

將?；撬峋w（純度99.0%）粉碎成粉末，與蒸餾水以質(zhì)量比1∶4 混合，配制成氨基酸溶液。向氨基酸溶液中加入與?；撬嵬荣|(zhì)量的β-環(huán)糊精，完全混合成糊狀，然后在水?。?5 ℃）中加熱并連續(xù)攪拌30 min，冷凍干燥，研磨，用250 μm 篩網(wǎng)過(guò)篩，然后在-18 ℃下儲(chǔ)存。

1.2 實(shí)驗(yàn)飼料制備

以魚(yú)粉、海藻粉、蝦粉等為主要蛋白源，添加α-淀粉、卡拉膠以及海泥（采自山東蓬萊長(zhǎng)島網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)域）等配制成基礎(chǔ)飼料（Tau 0，對(duì)照），在該配方上添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.30%、0.60%、0.90%、1.20%、1.50%的包被?；撬幔═au 0.3、Tau 0.6、Tau 0.9、Tau 1.2和Tau 1.5）以及0.60%的半胱氨酸（CY）、0.60%的半胱酸（CA），形成8 種等氮等脂的實(shí)驗(yàn)飼料（表1），其常規(guī)營(yíng)養(yǎng)組成見(jiàn)表2。實(shí)測(cè)飼料中?；撬豳|(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.08%、0.22%、0.37%、0.51%、0.74%、1.04%、0.07%和0.08%（以下含量數(shù)值均以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)）。將所有干成分充分混勻后，加入蒸餾水?dāng)嚢杈鶆?，然后冷擠壓成條帶（1.00 cm × 0.50 cm × 0.08 cm）。采用如下方法測(cè)定飼料中牛磺酸溶失率：稱(chēng)取5 g飼料置于裝有25 mL 水的燒杯中靜置，不同時(shí)間取樣測(cè)定水中?；撬岷?，根據(jù)水的體積推算?；撬崛艹隽浚▓D1）。經(jīng)測(cè)定對(duì)比，?；撬峤?jīng)包被后，其在飼料中的溶失率低于未包被?；撬?，因此在本實(shí)驗(yàn)飼料制作中牛磺酸的添加形式為包被后牛磺酸。

圖1 包被與未包被飼料的牛磺酸浸出率Fig.1 Taurine dissolution rate of feeds containg coated-taurine and crystal taurine

表1 實(shí)驗(yàn)飼料組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)Table 1 Mass fraction of experimental diet components %

表2 實(shí)驗(yàn)飼料的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)組成質(zhì)量分?jǐn)?shù)及能量（干基）Table 2 Proximate composition of experimental diets(dry mass basis)

1.3 實(shí)驗(yàn)管理

刺參幼參從山東安源種業(yè)科技有限公司（蓬萊）購(gòu)得，在東營(yíng)某實(shí)驗(yàn)基地的玻璃纖維桶（400 L）中馴化2 周。實(shí)驗(yàn)桶底部設(shè)置聚乙烯波紋板作為遮蔽物。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前停飼24 h，然后隨機(jī)選擇大小相似的健康幼參[（11.40 ± 0.04）g]，分配到24 個(gè)養(yǎng)殖桶（30 頭/桶）。每3 桶投喂1 種實(shí)驗(yàn)飼料，日投喂1 次（16:00），投喂量為刺參體質(zhì)量3%。收集剩余殘餌和糞便，記錄每天攝食量，持續(xù)8 周。養(yǎng)殖期間，采用自然海水養(yǎng)殖，pH 為7.50～8.20，溶解氧＞6 mg/L，鹽度為28～30，日換水率為600%，溫度保持在（16±1）℃。

1.4 取樣及計(jì)算

實(shí)驗(yàn)結(jié)束對(duì)每桶刺參進(jìn)行稱(chēng)質(zhì)量和計(jì)數(shù)。測(cè)定各養(yǎng)殖桶刺參數(shù)量和體質(zhì)量，計(jì)算增重率（WGR）、特定生長(zhǎng)率（SGR）和存活率（SR）。每桶隨機(jī)抽取10頭幼參，解剖體壁、呼吸樹(shù)和腸道樣本，在-80 ℃下儲(chǔ)存以供分析。

生長(zhǎng)性能根據(jù)以下公式計(jì)算：

1.5 體成分分析

樣品水分含量是在105 ℃下干燥至恒重測(cè)得。粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮儀（Kieltec 8400，F(xiàn)OSS Analytical A/S）測(cè)定，脂肪含量采用索氏提取法（Soxtex 2050，F(xiàn)OSS Analysis A/S）測(cè)定，粗灰含量采用馬弗爐燃燒法在550 ℃下測(cè)定，總能量采用熱量計(jì)（IKA?C6000，Janke&Kunkel KG，IKA-werk）測(cè)定。肌肉和飼料的氨基酸組成采用酸解法測(cè)定，即樣品用6 mL HCl（6 mmol/L）在110 ℃下水解22 h，除酸后獲得的最終水解液通過(guò)氨基酸分析儀（Hitachi L8900，Hitachi High-Technologies Corporation，Japan）測(cè)定。組織和飼料的?；撬岷坎捎肎B 5009.169—2016標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定[23]。

1.6 酶活性分析

腸道低溫勻漿后在4 000 r/min、4 ℃下離心10 min，分離上清液用于酶活性分析。淀粉酶（Amylase）、脂肪酶（Lipase）、蛋白酶（Protease）、葡萄糖激酶（GK）、丙酮酸激酶（PK）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）活性均使用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測(cè)定。半胱氨酸亞硫酸酯脫羧酶（CSD）和半胱氨酸雙加氧酶（CDO）的活性根據(jù)Goto 等[24-25]的方法進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)?；撬崤cβ-丙氨酸的面積比計(jì)算?；撬岷孔鳛槊富钚詥挝?。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0（SPSS 股份有限公司，Chicago）進(jìn)行單因素方差分析和鄧肯多重比較，P＜0.05即為各處理組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用SPSS軟件分段線性回歸模型對(duì)特定生長(zhǎng)率、糞便產(chǎn)生率以及呼吸樹(shù)和腸道?；撬岷窟M(jìn)行擬合預(yù)測(cè)折點(diǎn)，分析各個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)與牛磺酸水平的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 飼料?；撬崴綄?duì)刺參生長(zhǎng)性能的影響

如表3 所示各組SR、腸壁比（IBR）和臟壁比（VBR）無(wú)明顯差異（P＞0.05）。隨著牛磺酸添加水平的上升，WGR 及SGR 呈現(xiàn)先升高后平穩(wěn)趨勢(shì)，各?；撬崽砑咏M均提高了WGR 和SGR（P＜0.05）。添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.60%～1.50%?；撬犸@著提高了刺參的排糞率（FPR）（P＜0.05）。CY 組刺參WGR 和SGR 與對(duì)照組相比并無(wú)顯著差異（P＞0.05），而CA組刺參WGR 和SGR 均高于對(duì)照組（P＜0.05）。以SGR 和FPR 為評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)飼料?；撬崴浇⒄郜F(xiàn)回歸模型，分析得出，初始體質(zhì)量為（11.40 ±0.04）g幼參對(duì)飼料中?；撬岬淖钸m需求量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.42%～0.51%（圖2）。

圖2 刺參特定生長(zhǎng)率及糞便產(chǎn)生率與飼料中牛磺酸含量的階段線性回歸分析Fig.2 Broken line analysis of specific growth rate and fecal production rate,taurine actual level in feed for Apostichopus japonicus

表3 刺參生長(zhǎng)性能Table 3 Growth performance of Apostichopus japonicus

2.2 飼料牛磺酸水平對(duì)全參基本營(yíng)養(yǎng)成分和氨基酸組成的影響

如表4、5 和6 所示，添加?；撬岵⑽锤淖?nèi)珔⑺趾痛种竞恳约叭珔惲?、?lài)、精、絲、谷、丙、酪等氨基酸含量（P＞0.05），但是1.20% 和1.50%?；撬峤M全參灰分含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。全參粗蛋白在0.60%～1.20%的添加水平下顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），但是在1.50%的添加水平下反而呈下降趨勢(shì)。與對(duì)照組相比，添加0.60%～1.20%牛磺酸顯著提高了全參蘇氨酸含量（P＜0.05），添加0.30%～1.50%?；撬崽岣吡死i氨酸含量（P＜0.05），添加0.90%～1.20%?；撬崽岣吡说鞍彼岷浚≒＜0.05），添加0.90%～1.50%?；撬崽岣吡税腚装彼岷浚≒＜0.05）。亮氨酸含量先上升后降低，最高值出現(xiàn)在0.90%?；撬崽砑咏M。組氨酸含量則呈現(xiàn)持續(xù)下降的趨勢(shì)。與對(duì)照組相比，CY和CA 組均提高了全參亮氨酸含量而降低了組氨酸含量（P＜0.05）。添加CY 顯著提高全參半胱氨酸含量（P＜0.05），而添加CA 則降低半胱氨酸含量（P＜0.05）。

表4 刺參全參營(yíng)養(yǎng)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)(干物質(zhì))Table 4 Mass fraction of nutrition component of whole body of Apostichopus japonicus(dry matter) %

表5 刺參全參必需氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)（干基）Table 5 Mass fraction of essential amino acid of whole body of Apostichopus japonicus（dry matter basis）%

表6 刺參全參非必需氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)（干基）Table 6 Mass fraction of non-essential amino acid of whole body of Apostichopus japonicus(dry matter basis) %

2.3 飼料?；撬崴綄?duì)刺參體壁、呼吸樹(shù)和腸道牛磺酸含量的影響

由表7可知，隨著飼料中?；撬崴缴仙?，各組織中?；撬岷砍手饾u上升后平穩(wěn)趨勢(shì)。0.60%～1.50%添加組刺參體壁和呼吸樹(shù)中?；撬岷烤@著高于對(duì)照組（P＜0.05），0.30%～1.50%添加組的刺參腸道中牛磺酸含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。CY 組呼吸樹(shù)和腸道?；撬岷颗c對(duì)照組無(wú)顯著性差異（P＞0.05），但CA 組腸道中牛磺酸含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。分別以呼吸樹(shù)和腸道牛磺酸含量對(duì)飼料牛磺酸添加水平進(jìn)行模型擬合（圖3），預(yù)測(cè)牛磺酸添加量分別為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.41%和0.47%。

圖3 刺參呼吸樹(shù)及腸道中?；撬岷颗c飼料中?；撬岷康碾A段線性回歸分析Fig.3 Broken line analysis of the taurine content in the respiratory tree and intestine and taurine actual level in feed for A.japonicas

表7 刺參體壁、呼吸樹(shù)和腸道?；撬豳|(zhì)量分?jǐn)?shù)Table 7 Taurine mass fractions in body wall,respiratory tree and intestine of Apostichopus japonicus mg/kg

2.4 飼料?；撬崴綄?duì)刺參腸道消化和代謝酶活性的影響

如表8所示，各組間腸道蛋白酶、ALT和AST活性無(wú)顯著差異（P＞0.05）。但是隨著?；撬崽砑恿康纳撸虆⒛c道脂肪酶、淀粉酶和PK 等活性呈先升高后下降趨勢(shì)，且均在0.90%水平下達(dá)到最大值；所有?；撬峤M刺參腸道的GK、AKP 等活性均高于對(duì)照組（P＜0.05）。另外，腸道CDO 活性隨著飼料中牛磺酸含量的增加呈下降趨勢(shì)，在1.20%～1.50%添加水平下顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），而CSD 活性在0.60%～1.5%水平下低于對(duì)照組（P＜0.05）。

表8 刺參腸道消化與代謝酶活性Table 8 Activity of intestinal digestive and metabolic enzymes of Apostichopus japonicus

2.5 飼料牛磺酸水平對(duì)刺參腸道抗氧化性能的影響

如表9 所示，腸道CAT 和SOD 活性隨?；撬崴降纳仙氏壬吆笙陆第厔?shì)，添加0.90%牛磺酸顯著提高了腸道CAT 活性，0.60%～1.50% 添加水平顯著提高了SOD 活性（P＜0.05）。腸道丙二醛（MDA）含量變化則呈現(xiàn)相反趨勢(shì)，0.90%～1.50%添加水平下刺參腸道MDA含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。CY 組腸道CAT 和SOD 活性與對(duì)照組無(wú)差異（P＞0.05），但是CA 組腸道CAT 和SOD 活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

表9 刺參腸道抗氧化性能Table 9 Antioxidation abilities ofApostichopus japonicus intestine

3 討論

3.1 ?；撬釋?duì)刺參生長(zhǎng)性能的影響

研究證明飼料中添加?；撬崮軌虼龠M(jìn)魚(yú)類(lèi)攝食和生長(zhǎng)、提高脂肪的吸收沉積以及增強(qiáng)抗氧化能力[7,26-27]，且魚(yú)類(lèi)能夠調(diào)節(jié)牛磺酸合成的相關(guān)代謝酶基因的表達(dá)和酶活性[28]。?；撬嵩隰~(yú)類(lèi)飼料中應(yīng)用較多，但是在刺參飼料中的應(yīng)用研究較少。本實(shí)驗(yàn)中，?；撬崽砑铀皆?.30%～0.90%時(shí)，刺參生長(zhǎng)隨?；撬崽砑恿可仙岣撸f(shuō)明刺參單靠?jī)?nèi)源?；撬岬暮铣煽赡軣o(wú)法滿足自身需要，飼料中添加?；撬崮軌蚋纳拼虆⒌纳L(zhǎng)性能。這一研究與Zhao等[22]的結(jié)論有很大差異，可能是本實(shí)驗(yàn)中?；撬岵捎冒环绞?，降低了?；撬崛苁?，提高了刺參有效攝食濃度。另有相關(guān)研究表明添加牛磺酸可以改善飼料的適口性，提高動(dòng)物的采食率[29]。本實(shí)驗(yàn)中由于殘餌崩解造成收集困難，無(wú)法測(cè)算攝食率，但是攝食率和糞便產(chǎn)生率具有正相關(guān)性[30-31]。幼參糞便產(chǎn)生率隨著?；撬岷康纳叨岣?，說(shuō)明添加牛磺酸改善了飼料的誘食性，這與在象牙貝（Babylonia areolate）[32]以及方斑東風(fēng)螺（Babylonia areolata）[33]等上的研究結(jié)果一致。根據(jù)折線回歸模型可見(jiàn)，在以藻粉、魚(yú)粉、蝦粉以及豆粕為主飼料中，添加0.42%～0.51%?；撬峥梢悦黠@改善幼參的飼料利用和生長(zhǎng)。這一估測(cè)值明顯低于象牙貝（1.50%～2.00%）[32]、鲇（Pangasianodon hypophthalmus）（1.505%～1.631%）[34]等的需求量，但是接近于凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannemei）（0.43%）[35]、中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）（0.40%～0.80%）[7]、真鯛（Pagrus major）（0.50%）[36]、黃鱔（Monopterus albus）（0.37%）[26]等的需求量，說(shuō)明?；撬岬男枨罅坑蟹N屬差異性。

3.2 ?；撬釋?duì)刺參基本營(yíng)養(yǎng)成分的影響

刺參具有鈣質(zhì)骨片，本實(shí)驗(yàn)中，高水平的?；撬幔?.20%和1.50%）添加提高了體壁灰分，說(shuō)明?；撬崮軌虼龠M(jìn)鈣等礦物質(zhì)在刺參體壁中沉積，與在黑鯛（Acanthopagrus schlegelii）上的研究結(jié)果一致[29]。在一些動(dòng)物模型上的研究也發(fā)現(xiàn)?；撬峥梢酝ㄟ^(guò)與鈣作用促進(jìn)骨的形成從而提高骨密度[37-38]。另外，隨飼料?；撬崴缴仙珔⒌鞍缀匡@著提高，說(shuō)明?；撬嵩诖龠M(jìn)蛋白沉積上扮演重要角色，在大菱鲆（Scophthalmus maximus）、花鱸（Lateolabrax japonicus）也發(fā)現(xiàn)類(lèi)似現(xiàn)象[39,40]。雖然?；撬岵粎⑴c機(jī)體蛋白合成，但是卻參與含硫氨基酸的代謝轉(zhuǎn)化。添加適量?；撬岚l(fā)揮氨基酸節(jié)約作用，使得蛋氨酸和胱氨酸等含硫氨基酸可以更多地參與到蛋白質(zhì)合成代謝中，促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)沉積[41]。氨基酸組成測(cè)定結(jié)果也證實(shí)了這一推斷：適量牛磺酸添加不僅提高了含硫氨基酸含量，也顯著提高了其它幾種氨基酸如蘇氨酸、纈氨酸的含量。?；撬崤c這些氨基酸的代謝之間的關(guān)聯(lián)作用，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

3.3 ?；撬崽砑铀綄?duì)幼參?；撬岷铣赡芰σ约敖M織中分布的影響

研究發(fā)現(xiàn)，CDO和CSD酶活性主要取決于水產(chǎn)動(dòng)物種類(lèi)。如黃尾鲴（Xenocypris davidi）、大黃魚(yú)（Pseudosciaena crocea）、貽貝（Mytilus edulis）和疣荔枝螺（Reishia clavigera）等物種中CSD 的活性很低[24]，而虹鱒（Oncorhynchus mykiss）、鱸（Lateolabrax japonicus）、泥蚶（Tegillarca granosa）、芝麻螺（Monodonta labio）、疣荔枝螺（Reishia clavigera）等則活性很高[42-43]。CDO的表達(dá)也受多種因素調(diào)節(jié)，如含硫氨基酸、外源?；撬岬萚44-45]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著飼料中牛磺酸添加水平的升高，刺參腸道CSD和CDO活性均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，而添加半胱酸卻能夠提高CSD活性，這與在大菱鲆[46]、卵形鯧鲹（Trachinotus ovatus）[28]、虹鱒以及牙鲆（Paralichthysolivaceus）[11]上的結(jié)果一致。?；撬岷铣擅傅目烧{(diào)節(jié)性說(shuō)明刺參具有一定程度的牛磺酸合成能力，因此也解釋了刺參生長(zhǎng)的低牛磺酸需求。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)添加CA能夠改善幼參生長(zhǎng)、提高牛磺酸組織含量等，而CY卻不能明顯提高組織?；撬岷?，這說(shuō)明在CY 轉(zhuǎn)化成CA 過(guò)程中存在一定障礙，這也說(shuō)明了飼料中添加?；撬岬谋匾?。

水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)?；撬峒却嬖谄鞴傩罘e差異，也存在種屬差異[28,47-48]。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，刺參的腸道和呼吸樹(shù)對(duì)牛磺酸蓄積較多，而體壁則蓄積較少，這說(shuō)明牛磺酸可能參與調(diào)節(jié)呼吸樹(shù)和腸道的一些生理功能活性，反映了器官組織對(duì)?；撬嵝枨蟮牟町愋?。腸道和呼吸樹(shù)?；撬嵝罘e水平隨飼料牛磺酸添加水平呈現(xiàn)先升高后平穩(wěn)趨勢(shì)，符合二段式線性回歸特點(diǎn)，其折點(diǎn)代表了組織所能容納?；撬岬淖畲罅?，也暗示了組織代謝所需要的最低量。根據(jù)估算，飼料中牛磺酸達(dá)到0.41%～0.47%可滿足刺參腸道和呼吸樹(shù)代謝的需求。這一估測(cè)值與生長(zhǎng)模型所預(yù)測(cè)的?；撬嵝枨罅炕疽恢拢f(shuō)明0.41%～0.47%的牛磺酸能同時(shí)滿足代謝和生長(zhǎng)的需要。

3.4 牛磺酸對(duì)刺參腸道消化代謝酶的影響

本實(shí)驗(yàn)中，添加0.60%～0.90%?；撬峥商岣叽虆⒛c道脂肪酶和淀粉酶活性，這一結(jié)果與Zhao等[49]一致，這說(shuō)明添加?；撬嵊兄谟讌?duì)脂肪和碳水化合物的消化吸收。但是隨飼料?；撬崴竭M(jìn)一步升高，脂肪酶和淀粉酶活性有所下降，說(shuō)明過(guò)高?；撬岱炊种屏诉@兩種酶的分泌，相似現(xiàn)象也在黃 鱔（Monopterus albus）[26]、紅鰭東方鲀（Takifugu rubripes）[50]、草 魚(yú)（Ctenopharyngodon idella）[51]等魚(yú)類(lèi)上發(fā)現(xiàn)。在本實(shí)驗(yàn)中，隨?；撬岷康脑黾?，GK 和PK 活性呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，分別在0.60%和0.90%的添加水平下達(dá)到最高。由此可見(jiàn)，適量添加水平的?；撬峥赡苷{(diào)節(jié)腸道糖酵解代謝，提高葡萄糖利用能力。堿性磷酸酶對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物吸收水中鈣質(zhì)具有重要作用，能夠催化各種含磷化合物水解。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加牛磺酸可改善刺參腸道堿性磷酸酶活性，與紅鰭東方鲀[50]、中華絨螯蟹[7]上的研究結(jié)果一致。刺參具有內(nèi)骨片結(jié)構(gòu)，因此堿性磷酸酶活性提高說(shuō)明飼料?；撬嵩谝欢ǔ潭壬夏苌险{(diào)成骨細(xì)胞活力，促進(jìn)刺參內(nèi)骨片生長(zhǎng)[52-53]。綜上，從刺參腸道消化代謝酶方面來(lái)看，飼料?；撬崽砑铀皆?.60%～0.90%（飼料實(shí)際?；撬岷?.37%～0.51%）范圍，能夠促進(jìn)刺參的消化和代謝活動(dòng)。

3.5 牛磺酸對(duì)刺參腸道抗氧化性能的影響

本實(shí)驗(yàn)中，飼料添加一定量的?；撬峥梢蕴岣叽虆⒛c道SOD和CAT活性，這一發(fā)現(xiàn)與Zhao等[49]的研究結(jié)果一致?？赡芴砑优；撬嵩鰪?qiáng)了刺參腸道在線粒體膜潛力，改善呼吸鏈傳遞途徑介導(dǎo)的能量代謝[54]，并通過(guò)Nrf2 介導(dǎo)的信號(hào)通路作用于抗氧化酶系統(tǒng)，增強(qiáng)SOD和CAT等抗氧化酶的合成以消除活性氧[55-56]。相反，過(guò)量牛磺酸抑制SOD和CAT活性，導(dǎo)致刺參抗氧化能力的降低。說(shuō)明過(guò)量牛磺酸對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生一定毒性作用，從而抑制細(xì)胞分泌SOD 和CAT，這一結(jié)論在非洲鲇（Clarias gariepinus）上也得到證實(shí)[57]。MDA 是氧自由基攻擊多不飽和脂肪酸而形成的脂質(zhì)過(guò)氧化物，反映細(xì)胞損傷和脂質(zhì)過(guò)氧化程度。在本研究中，?；撬崽砑铀酱笥?.60%時(shí)，腸道MDA含量顯著低于對(duì)照組。隨著?；撬崽砑铀降脑黾?，MDA 含量呈降低趨勢(shì)，與SOD 和CAT酶的變化趨勢(shì)基本相符。這也說(shuō)明在刺參中添加?；撬岣哂?.60%時(shí)（實(shí)際?；撬岷?.37%）有助于提高機(jī)體抗氧化能力，降低脂質(zhì)過(guò)氧化對(duì)細(xì)胞的毒性，從而保護(hù)機(jī)體免受自由基的損害。

4 結(jié)論

綜合特定生長(zhǎng)率、糞便產(chǎn)生率、呼吸樹(shù)和腸道牛磺酸蓄積水平的回歸分析，并結(jié)合消化酶、抗氧化能力等，推測(cè)初始體質(zhì)量為（11.40 ± 0.04）g 刺參幼參對(duì)飼料中牛磺酸的最適需求量為0.47%～0.51%，這個(gè)范圍內(nèi)的?；撬崽砑铀?，可以提高刺參幼參對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和代謝能力，增強(qiáng)幼參抗氧化性能，又可以促進(jìn)幼參生長(zhǎng)。