伴HR-HPV感染的CIN Ⅲ級患者血清CD105水平變化及臨床意義探討

閆霜，李岳

（1.河南省榮軍醫院 婦產科，河南 新鄉 453000；2.新鄉縣人民醫院 婦產科，河南 新鄉 453000 ）

宮頸上皮內瘤變（CIN）是由于人乳頭瘤病毒（HPV）感染等所引起的一種癌前病變［1］。CIN Ⅲ級為宮頸高級別鱗狀上皮內病變，與高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染關系密切，相關研究顯示［2］，CIN Ⅲ級患者的HR-HPV 陽性率為89.80%，嚴重威脅女性患者的生命健康，故臨床一旦發現需盡快進行干預。宮頸環形電切術（LEEP）是臨床治療CIN Ⅲ級較為常用的方法之一，但部分CIN Ⅲ級患者術后可能會存在病變殘留、復發的情況，極易進展為宮頸癌，影響患者預后［3］。因此，臨床應盡早識別和控制伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者LEEP 術后復發的危險因素，以降低術后復發風險，改善患者預后。內皮糖蛋白（CD105）是位于細胞膜表面的Ⅰ型跨膜糖蛋白，是惡性腫瘤新生血管標志物，對監測惡性腫瘤具有重要意義［4］。目前，CD105 在婦產科領域得到了廣泛重視，相關資料顯示［5-6］，血清CD105 水平變化與卵巢癌、子宮內膜癌的分期、遠處轉移等密切相關。但目前尚無關于血清CD105 在伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者中的水平變化及其與預后關系的相關報道。鑒于此，本研究通過觀察伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者血清CD105 水平變化，并探討其與患者術后復發的關系，以為臨床早期防控提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標準：①疾病組均經細胞學及組織病理學確診為CIN，且均為初診；②疾病組CIN 病理學分級均為Ⅲ級，均行HPV 檢查；③疾病組均符合LEEP 術臨床指征，且均接受LEEP 術治療；④對照組經體檢均身體健康；⑤年齡≥18 歲；⑥受試者均知情同意。排除標準：①合并其他嚴重感染；②合并肝腎嚴重功能障礙；③月經期、妊娠期、哺乳期女性；④合并其他部位惡性腫瘤；⑤合并免疫系統疾病、造血系統疾病、凝血功能障礙；⑥合并淋巴系統疾病或處于急性炎癥期患者；⑦合并宮頸糜爛、陰道潰瘍、陰道炎、盆腔炎、尿道炎；⑧近期存在陰道用藥、使用抗生素或激素；⑨既往存在宮頸/子宮手術史。脫落標準：①研究過程中失訪；②研究過程中發生死亡等不良事件；③其他各種原因提前退出研究者。

根據樣本量計算公式N=Z2×σ2/d2（其 中Z＝1.96，σ＝0.5，d＝5.48%，得出N≈320）以及上述標準，同時考慮研究過程中樣本量的脫落情況等因素影響，共選取2018 年1 月至2022 年2月河南省榮軍醫院收治的352 例CIN Ⅲ級患者為疾病組，另選取同期在河南省榮軍醫院體檢的健康女性352 例為對照組。其中疾病組年齡20～52歲，平均（36.36±6.21）歲；體重指數（BMI）18.21～25.33 kg/m2，平均（22.07±2.19）kg/m2。對照組年 齡18～55 歲，平 均（37.07±6.29）歲；BMI 18.50～24.95 kg/m2，平均（21.89±2.07）kg/m2。兩組年齡、BMI 比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已通過醫院倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 血清CD105 水平檢測 于對照組體檢當日、疾病組入院24 h 內（手術前）及術后6 個月時采集空腹靜脈血5 mL，室溫靜置30 min 后，以3 000 r/min 離心10 min，分離血清，采用酶聯免疫吸附測定（ELISA）檢測CD105 水平，試劑盒為美國R&D Systems 公司產品，均嚴格按照說明書操作。

1.2.2 HPV 感染檢查及分組 患者取截石位，充分暴露宮頸，將采樣刷置入宮頸口后，沿順時針旋轉3～5 周以收集宮頸脫落細胞，放入HPV 樣本保存液中保存待測。采用實時熒光定量PCR 檢測HPV 基因和分型，HR-HPV 包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35 等十三種。根據上述檢查結果將CIN Ⅲ級患者分為非HR-HPV 感染組和HR-HPV 感染組。

1.2.3 資料收集 收集伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者的臨床資料，包括年齡、BMI、吸煙史、飲酒史、孕次、產次、首次性生活年齡、是否多個性伴侶、是否口服避孕藥、是否絕經、是否性生活前后清潔外陰、術前HR-HPV 載量、手術切緣狀態、病變累及象限、累及腺體。

1.2.4 術后隨訪和復發判定 術后通過復查的形式對疾病組患者進行1 年的隨訪?；颊呙? 個月進行1 次復查，復查內容主要有陰道鏡、宮頸液基薄層細胞（TCT）檢查、HR-HPV 檢查，連續兩次HR-HPV 檢查陰性即為HPV 轉陰，半年內無CIN 病變存在即為痊愈；術后6 個月內TCT 檢查為陰性，而6 個月后TCT 檢查陽性、組織學診斷為宮頸CIN 病變，則為復發［7］。根據上述標準將伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者分為復發組和未復發組。

1.3 觀察指標

①疾病組與對照組血清CD105 水平比較；②非HR-HPV 感染組和HR-HPV 感染組術前血清CD105 水平比較；③復發組與未復發組一般資料比較；④分析伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的影響因素；⑤分析血清CD105 水平對伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的預測價值，統計靈敏度、特異度、曲線下面積（AUC）和95%置信區間（95%CI）。

1.4 統計學方法

統計學分析采用SPSS 26.0 軟件。計量資料以均數±標準差（）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多樣本比較采用單因素方差分析和SNK-q檢驗；計數資料采用百分率（%）表示，用χ2檢驗組間差異，若任一理論頻數≥1 且≤5 需對檢驗校正；采用Logistic 回歸分析伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的影響因素；采用受試者工作特征（ROC）曲線分析血清CD105 水平對伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的預測價值。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 疾病組與對照組術前血清CD105 水平比較

疾病組術前血清CD105 水平為（101.42±15.31）pg/mL，高于對照組［（30.78±6.22）pg/mL］，差異有統計學意義（t=80.200,P＜0.001）。

2.2 非HR-HPV 感染組和HR-HPV 感染組術前血清CD105 水平比較

疾病組352 例患者中HR-HPV 感染的有306 例，非HR-HPV 感染的46 例。HR-HPV 感染組患者術前血清 CD105 水平為（105.37±17.88）pg/mL，非HR-HPV 感染組患者術前血清CD105 水平為（75.15±18.31）pg/mL，HR-HPV 感染組高于非HR-HPV 感染組，差異有統計學意義（t=10.655，P＜0.001）。

2.3 HR-HPV 感染患者復發組與未復發組一般資料比較

術后隨訪期間，疾病組352 例患者中共脫落24 例。328 例CIN Ⅲ級患者中有35 例術后復發，術后復發率為10.67%，289 例伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者中有32 例術后復發，術后復發率為11.07%。復發組與未復發組年齡、BMI、吸煙史、飲酒史、孕次、產次、首次性生活年齡、是否口服避孕藥、是否性生活前后清潔外陰、病變累及象限比較差異無統計學意義（P＞0.05）；復發組是否多個性伴侶、是否絕經、術前HR-HPV 載量高負荷、手術切緣陽性、累及腺體占比及術前血清CD105 水平、術后6 個月血清CD105 水平均高于未復發組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 HR-HPV 感染組復發組與未復發組一般資料比較

2.4 伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的影響因素分析

將伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發情況記為因變量（未復發=0，復發=1），將一般資料中比較顯示P＜0.05 的因素記為自變量并進行賦值：多個性伴侶（否=0，是=1）、絕經（否=0，是=1）、術前HR-HPV 載量（低負荷=0，高負荷=1）、手術切緣狀態（陰性=0，陽性=1）、累及腺體（否=0，是=1）、術前血清CD105 水平（實測值）、術后6個月血清CD105 水平（實測值）。多因素Logistic回歸分析結果顯示，絕經、術前HR-HPV 載量高負荷、手術切緣陽性、累及腺體及術前、術后6個月高水平血清CD105 均為伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的危險因素，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的影響因素分析

2.5 血清CD105 水平對伴HR-HPV 感染的CINⅢ級患者術后復發的預測價值

術后6 個月血清CD105 水平預測伴HR-HPV感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的靈敏度、特異度分別為87.50%、72.76%，AUC 為0.841（95%CI：0.794～0.881）（P＜0.05），見圖1。術前血清CD105水平預測伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的靈敏度、特異度分別為81.25%、71.98%，AUC 為0.808（95%CI：0.758～0.852）（P＜0.05），見圖2。

圖1 術后6 個月血清CD105 水平預測伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的ROC 曲線

3 討論

CIN Ⅲ級患者處于重度不典型增生或原位癌階段，進展為浸潤癌的風險較高［8］。HR-HPV 感染是CIN 發病的獨立危險因素，并且與宮頸癌關系密切。HR-HPV 感染不僅能夠加快CIN 增生，還是CIN 轉向癌化的重要因素［9］。臨床上主要通過LEEP 術治療CIN Ⅲ級，通過電功率將病灶切除，可有效阻斷病情進展，但仍有少數患者術后復發，最終可進展為宮頸癌。本研究結果顯示，伴HRHPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的發生率為11.07%，與劉靜云等［10］研究報道的11.70%相近，均提示伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者具有較高的術后復發風險。故早期評估伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發風險，并及時采取有效措施，對預防術后復發發生尤為重要。

本研究中疾病組術前血清CD105 水平高于對照組，HR-HPV 感染組術前血清CD105 水平高于非HR-HPV 感染組，提示血清CD105 水平在CINⅢ級患者中異常升高，并與HPV 感染有關。伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者異常增生的細胞占據上皮內2/3 以上或達全層，屬宮頸癌癌前病變，與宮頸癌有相同的促血管新生的能力。CD105 作為存在于細胞表面的同源二聚體跨膜糖蛋白，主要表達于腫瘤相關的新生血管內皮細胞上，被標記的新生血管與腫瘤組織的增殖及轉移密切相關，在活躍增殖過程中患者機體內血清CD105 濃度升高［11］。本研究結果顯示，復發組術前、術后6 個月血清CD105 水平均高于未復發組，且經多因素Logistic 回歸分析發現，術前、術后6 個月血清CD105 水平均為伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的危險因素，提示血清CD105 水平與伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者預后密切相關。高水平的血清CD105 與轉化生長因子β1（TGF-β1）受體結合，不僅阻斷了TGF-β1/ALK5 的信號傳導，同時阻斷了TGF-β1 對內皮細胞增殖、轉移的抑制作用，促進異常增生的細胞增殖、轉移、侵襲，增加伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發風險［12-13］。SUR 等［14］研究顯示，在結直腸癌預后生物標志物研究中，CD105 水平高于健康對照組，并與結直腸癌患者的不良預后呈正相關。高水平的血清CD105 與TGF-β1 受體相結合，能夠誘導Smda 蛋白磷酸化，并使磷酸化Smda 蛋白與轉錄因子相互作用，通過多種信號途徑使基因轉錄，從而減弱TGF-β1 的生物學效應，抑制TGF-β1 的信號傳導，使被侵犯組織部位細胞增殖、遷移，加劇HPV 感染，最終導致術后復發［15］。另本研究ROC 結果顯示，術后6 個月血清CD105 水平預測伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的靈敏度、特異度、AUC 分別為87.50%、72.76%、0.841，術前血清CD105 水平預測患者術后復發的靈敏度、特異度、AUC 分別為81.25%、71.98%、0.808，提示血清CD105 水平對伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發具有較好的預測效能。因此，臨床可通過監測伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者血清CD105 水平來預測預后情況，以指導臨床干預，以期降低患者術后復發風險。

另本研究發現，絕經、術前HR-HPV 載量高負荷、手術切緣陽性、累及腺體均為伴HR-HPV感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的危險因素，與既往研究結果一致［16-17］。女性絕經后各項機體功能均出現一定程度上的減退，免疫功能下降，增加感染HPV 風險，另患者宮頸萎縮，宮頸移行帶區移入宮頸管內，更易復發。HR-HPV 載量與感染的上皮細胞數量和感染細胞病毒數量直接相關，術前HR-HPV 載量高負荷提示HR-HPV 復制更為活躍，整合到宿主細胞的風險增加，易進入皮膚組織深處，導致術后復發；此外，術前HR-HPV載量高負荷會增加手術難度，術后易出現病灶殘留，提高術后復發風險。手術切緣陽性患者手術范圍較為保守，病變組織未完全切除，殘留病變組織仍具有增殖分化能力，增加了復發風險。SAND 等［18］研究顯示，手術切緣陽性增加了復發疾病風險，且具有一定的診斷效能。累及腺體會導致手術難度的增加，病灶切除不理想，從而出現殘留，導致術后復發風險高。

綜上所述，血清CD105 水平在伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者中異常升高，是伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的危險因素，且對患者術后復發具有較好的預測價值，另絕經、術前HR-HPV 載量高負荷、手術切緣陽性、累及腺體均是伴HR-HPV 感染的CIN Ⅲ級患者術后復發的危險因素，臨床可通過監測上述因素用以指導治療與防控，降低術后復發風險，改善患者預后。