口腔鱗狀細胞癌中酪氨酸激酶受體-2的表達與臨床病理特征的關系

沈 陽,費 偉,駱 敬

(1.成都市第七人民醫院口腔科,四川 成都 610044;2.四川省醫學科學院·四川省人民醫院口腔科,四川 成都 610072)

口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的發生和發展需要多種信號通路共同參與[1]。酪氨酸激酶受體-2(tyrosine kinase receptor-2,Tie-2)是一種酪氨酸激酶受體,對促進腫瘤淋巴管和血管形成具有至關重要的作用[2,3]。大量研究證實,Tie-2在其他惡性腫瘤中表達上調會刺激癌細胞增殖,促進腫瘤發生局部和遠處轉移,而且Tie-2陽性率與腫瘤惡性程度之間存在極其密切的聯系[4,5]。然而關于Tie-2受體在OSCC中的表達情況,以及Tie-2陽性率是否與OSCC臨床病理相關鮮有報道。本研究采用免疫組織化學(Immunohistochemistry,IHC) 檢測Tie-2在OSCC中的表達情況,并分析其與臨床病理參數的關系,為尋找OSCC治療的潛在靶點提供新依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入2019年12月至2021年6月在四川省人民醫院頜面外科就診的110例OSCC患者,納入標準:① 均經病理學確診;②臨床病歷資料保存完整;③患者及家屬知情同意。排除標準:①術前行放化療等抗腫瘤治療;②手術僅行原發灶切除而未進行頸淋巴結清掃;③合并有其他系統惡性腫瘤、免疫系統疾病、血液系統疾病等。其中男60例,女50例,年齡(54.0±2.1)歲。根據世界衛生組織(WHO)提出腫瘤組織病理分級標準[6],術后病理診斷為高分化42例、中分化38例、低分化30例。其中30例患者存在頜骨侵犯,37例患者存在頸淋巴結轉移。另選同期30例非腫瘤患者正常口腔黏膜組織作為對照組,其中男16例,女 14例,年齡(52.2±4.2)歲。兩組性別和年齡比較,差異無統計學意義(P>0.05)。本研究獲得四川省人民醫院倫理委員會的批準。

1.2 IHC檢測免疫組化染色過程按試劑盒所附說明進行,石蠟標本4 μm連續切片,常規脫蠟、抗原修復;加入兔抗人Tie-2單克隆抗體(親科生物研究中心有限公司;1∶200),孵育1 h;加入二抗,孵育20 min;加入DAB 溶液顯色,蒸餾水沖洗、復染、脫水、透明封片,電子顯微鏡下觀察采圖。

1.3 判定Tie-2表達由專業病理人員采用雙盲法判定Tie-2的陽性表達[7]:把每一張經過染色后的玻片放在200倍鏡下觀察,每例標本隨機選取5個視野(×200)計算陽性細胞所占腫瘤細胞數的百分比,從而得到著色細胞百分比。同時觀察組織著色程度,將兩者相乘所得結果進行評分,分數為0～2分表示Tie-2陰性表達,分數≥3分表示Tie-2陽性表達。見表1。對存在頜骨侵犯的標本,用Image J 1.8.0圖像解析軟件對骨病變周圍腫瘤組織以及其他部位腫瘤(距離骨病變周圍腫瘤組織邊緣>3 cm)檢測,計算平均光密度值(mean optical density,MOD)來反映染色強度。

表1 TIE-2表達評分標準

1.4 統計學方法利用SPSS 23.0軟件對數據進行統計分析,使用 Graph Pad Prism 5.0 軟件繪制統計圖。計數資料組間比較采用卡方檢驗;計量資料數據采用均數±標準差表示,比較采用t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Tie-2在OSCC組織與正常組織中的陽性表達率比較免疫組織化學檢測顯示,OSCC組織中Tie-2表達陽性率高達78.2%(86/110);正常口腔組織樣本中Tie-2表達陽性率為20%(6/30),Tie-2在OSCC組織中陽性表達率顯著高于正常口腔組織,差異有統計學意義(χ2=4.634,P<0.05)。

2.2 Tie-2在OSCC組織中的主要分布情況在癌細胞胞漿中可見Tie-2陽性表達(圖1a),在癌組織血管內皮細胞中也呈陽性表達(圖2a)。此外,在癌巢內發現大量Tie-2陽性表達的單核細胞聚集(Tie-2 expressing monocytes,TEM)(圖2b)。

圖1 腫瘤組織和正常組織中Tie-2的表達情況 a:腫瘤組織;b:正常組織(IHC,×100)

圖2 Tie-2在腫瘤組織中的表達 a:Tie-2在血管內皮細胞中的陽性表達;b:癌巢中可見大量TEM (IHC,×200)

2.3 不同部位腫瘤組織Tie-2的表達情況骨病變周圍腫瘤組織Tie-2的陽性表達率明顯高于其它部位腫瘤組織,組織染色程度顯著加深。骨旁腫瘤組織MOD值(0.42±0.13)顯著高于其它部位腫瘤組織(0.23±0.12),差異有統計學意義(χ2=2.640,P<0.05)。見圖3。

2.4 不同臨床特征中Tie-2的表達水平比較低分化組Tie-2陽性表達例數高于中分化及高分化組,中分化組Tie-2陽性表達例數高于高分化組,腫瘤組織分化程度低者,Tie-2的陽性表達率更高(P<0.05)。相較于不存在淋巴結轉移的OSCC病例,存在淋巴結轉移的OSCC中Tie-2陽性表達率顯著增加(P<0.05)。此外,在有頜骨侵犯的所有30例患者腫瘤組織中,均存在Tie-2陽性表達,其陽性表達率顯著高于無頜骨侵犯組(P<0.001)。見表2。

3 討論

Tie-2最初被認為是一種特殊的血管生長因子,能在不同生理環境下對血管內皮細胞功能進行調控[8]。但近年來已有許多研究提示其在非血管正常組織和病理組織中表達,如造血干細胞、成骨細胞、TEM和多種癌細胞[5,9～11]。有研究報道稱:Tie-2過表達會刺激腫瘤淋巴管和血管生成,加速腫瘤生長和轉移[2,3]。最近研究表明,Tie-2高表達不僅局限于血管結構中,在各種癌癥的非血管細胞中也有表達,如胃癌、乳腺癌和膠質瘤等[8]。研究發現,Tie-2在乳腺癌腫瘤組織中的表達較正常組織明顯升高[4]。但目前對于Tie-2在OSCC組織中表達情況的研究十分匱乏。本研究中,我們通過IHC檢測Tie-2在OSCC組織與正常口腔組織中的表達差異,我們發現Tie-2在OSCC組腫瘤組織中明顯表達增多,這也可以對既往的研究結果進行進一步補充。

活化的血管內皮細胞會分泌血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2),將TEM募集到腫瘤組織內[11,12]。TEM是腫瘤相關巨噬細胞的一個亞種,也是循環系統中Tie-2陽性免疫細胞的主要群種[13,14]。Joseph等在非小細胞肺癌中發現TEM的聚集,并證實了TEM能夠和Ang-2產生協同作用促進癌細胞增殖,刺激腫瘤組織血管形成[15]。有研究報道稱:選擇性消除TEM會損害血管生成并抑制腫瘤生長[12,14]。由于TEM在腫瘤中的特殊性,已有學者建議將TEM用作一種新的診斷標志物并使其成為有希望的治療靶點之一[16]。在本研究中,我們可以在病理下發現OSCC的癌巢內可見大量TEM,因此推測TEM的大量聚集參與了OSCC 的發生發展過程。

OSCC在所有OCC中最常見,占OCC的90%以上[17]。OSCC作為一種來源于上皮的腫瘤,對其周圍組織的侵犯十分明顯。盡管外科手術和放化療技術不斷進步,但OSCC患者5年生存率并無顯著改善,仍約為50.0%[18,19]。在OSCC局部侵犯行為中,侵犯頜骨并造成骨質破壞的現象時有發生。只要OSCC侵犯骨皮質,則將其劃分為T4期[1]。若骨髓質被侵襲,則提示患者可能會出現較差的預后及較高的致死率[20]。據研究表明,Ang-2常作為Tie-2的配體,Ang/Tie-2信號體系在調節骨代謝方面有著十分重要的作用[21,22]。最近許多研究發現,Ang-2可作為一種環境依賴性激動劑,在病理狀態下,尤其是在癌癥微環境中,Ang-2可作為Tie-2的激動劑促進腫瘤侵襲和腫瘤血管生成,并導致多重耐藥發生[23,24]。轉基因鼠中Ang-1過度表達能夠增加其骨量,此外,Ang/Tie-2信號體系也被證實在乳腺癌骨轉移過程中起到了十分重要的作用[5,25]。Tang等在骨轉移性前列腺癌細胞系中找到了Tie-2陽性細胞群,這些細胞與Tie-2陰性細胞群相比,不僅表現出更強的骨黏附能力,且對化療藥物有更強的抗性[12]。本研究發現在骨旁腫瘤組織中的表達率明顯高于其他部位的腫瘤組織,骨旁腫瘤組織著色的程度更深、Tie-2表達的量更高,所有出現頜骨侵犯的患者腫瘤組織中,均存在Tie-2陽性表達。因此,可以推測Tie-2可能也在OSCC侵犯頜骨的病理生理過程中產生著巨大的作用。

此外,本研究還探討了Tie-2在腫瘤組織中的表達情況與OSCC病理分級之間的關系,發現表達Tie-2高表達與OSCC的惡性生物學行為有關。Tie-2在低分化OSCC的表達率明顯高于中分化、高分化的OSCC。高表達的Tie-2與淋巴結轉移密切相關。相對于沒有發生淋巴結轉移的OSCC,已經出現淋巴結轉移的OSCC中的Tie-2的陽性表達率更高。

綜上所述,本研究發現Tie-2在OSCC中存在高表達現象,Tie-2在不同OSCC病理分級、是否存在淋巴結轉移及頜骨侵犯中存在差異性表達。這也提示Tie-2有望成為OSCC的治療靶點,具體作用機制有待深入研究。但本研究樣本量較小,需要進一步擴大樣本量來進行研究。此外,本研究沒有對患者的TNM分期、生存預后進行分析,在今后的研究中可進一步探討Tie-2的表達對患者預后的影響。同時,更高級的檢查技術如:實時-PCR、蛋白質印跡法應當用于之后的研究中,以利于進一步探討Tie-2對OSCC發生發展的潛在機制。