安慶市市區健康體檢人群幽門螺桿菌感染情況調查

胡曉東 李小月 王萬俊 朱芳來 喻朝霞 査 勇 吳珍珍

幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）是一種只有一條環狀染色體的多鞭毛、單極、螺旋形彎曲、末端鈍圓的原核桿菌，有1～2 個微小彎曲，菌體長2～4 μm，寬0.5～1.0 μm。Hp是革蘭氏陰性菌，不分解糖類，菌落富含尿素酶，可分解尿素釋放氨，是鑒定該菌的主要依據。在培養基中，細菌常生長為S形或呈海鷗型。培養Hp所需條件較高，需要5%～10%的二氧化碳和5%的氧氣，同時需要動物血清及37 ℃的培養環境[1]。在Hp直接的細胞毒性作用中，存在一種導致Hp感染位置產生炎性反應的重要效應蛋白，該蛋白具有遺傳基因多態性和地區分布的差異，同時與消化道潰瘍、胃炎、胃癌及一些非胃腸道疾病的發生發展密切相關，并影響胃損害的嚴重程度及臨床結局。其致病機制主要與影響多條細胞信息傳遞通路有關[2]。Hp感染導致不同的臨床結局，這是由Hp不同的毒力菌株、宿主遺傳背景及環境因素共同作用的結果[3]。鑒于以上背景，Hp在感染率、感染類型以及最終致病結果上存在一定的地域性差異。本文通過對安徽醫科大學附屬安慶第一人民醫院參與健康體檢的10008 例健康體檢者，采用ELISA法、免疫印跡法、化學發光免疫分析技術進行血清學檢測，以探究安徽省安慶市市區Hp的感染率情況及相關細胞因子水平，并初步探討其免疫學機制。

1 資料與方法

1.1 研究對象 回顧性分析2019年4月-2021年8月在安徽醫科大學附屬安慶第一人民醫院參與健康體檢者10008 例，所有人均已簽署知情同意書并知曉相關內容。

1.2 儀器與試劑 幽門螺桿菌抗體分型相關實驗采用伯勞特（深圳）公司生產的幽門螺桿菌抗體分型檢測試劑盒，并搭配其對應的免疫印跡儀使用；血清胃蛋白酶原采用蘇州長光華醫生物醫學工程公司提供的胃蛋白酶原試劑盒及其配套的全自動化學發光免疫分析儀檢測；胃泌素G-17 采用北京正旦國際科技有限責任公司提供的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒檢測，其余細胞因子水平檢測采用美國BD公司生產的ELISA試劑盒，并搭配美國BioTech公司酶標儀檢測。

1.3 實驗步驟 ①所有體檢者分批采血、分批檢驗，清晨6：00-8：00 在檢驗科窗口采集空腹靜脈外周血5 mL，4000 轉/min離心15 min，收集血清并做好標記。幽門螺桿菌分型實驗按照伯勞特（深圳）公司所售試劑盒說明書要求操作，結果判讀時：出現質控帶，且空泡毒素（CagA）、穿孔蛋白（VacA）區帶出現一種或二者同時出現，則為HpⅠ型感染；出現質控帶，尿素酶A（UreA）和尿素酶B（UreB）區帶出現一種或二者同時出現，且未見CagA，VacA帶，則為Hp Ⅱ型感染；僅出現質控帶則為陰性結果。②測定胃蛋白酶原PG I和胃蛋白酶原PG Ⅱ時，樣品與特異性單克隆抗體反應后形成抗體-抗原-抗體夾心復合物。復合物形成固相后，反應溶液中的磁性顆粒被磁場吸附，未結合的化合物被清除。加入底物溶液，然后檢測化學發光光子的強度。光強度與血清樣品中胃蛋白酶原的濃度成正比。樣品中分析物的量由多點校準曲線確定。③G-17與其它細胞因子水平檢測實驗按照各自ELISA試劑盒說明書要求操作，加入終止液后即刻使用酶標儀，檢測出OD值并換算出具體濃度。

1.4 統計學方法 本研究使用SPSS 20.0 統計學軟件對數據進行處理。計數資料以百分比（n%）形式表示；計量資料則以均值±標準差（±s）的形式表示，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 安慶市區健康體檢人群近年來幽門螺桿菌感染情況分析 安慶市健康體檢人群中，陰性率為41.16%（4119/10008）、Hp總體感染率為58.84%（5889/10008），其中HpⅠ型感染率33.99%（3402/10008）高于HpⅡ型的24.85%（2487/10008）。

2.2 不同性別組體檢人群的，HpⅠ型感染與HpⅡ型感染情況分析 女性HpⅠ型、HpⅡ型和總感染率分別為14.86%、11.33%和26.19%。同時，男性HpⅠ型、HpⅡ型感染率和總感染率分別為19.13%、13.52%和32.65%。男性HpⅠ型、HpⅡ型感染率和總感染率均高于女性，但差異均無統計學意義，見表1。

表1 安慶市市區健康體檢人群不同性別Hp感染率分析 例(%)

2.3 不同年齡組體驗人群的HpⅠ型感染與HpⅡ型感染情況分析 根據年齡可分為七組，各年齡組間Hp抗體陽性率差異具有統計學意義（χ2=529.652、1751.295、70.807，均P＜0.01），見表2。

表2 安慶市市區健康體檢人群不同年齡Hp感染率 例(%)

2.4 不同感染類型組體驗人群的各種細胞因子水平情況分析 本市健康體檢人群中，相對于沒有感染Hp的體檢者，IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ與TNF-α在感染者體內均有所升高，且差異具有統計學意義，兩種免疫應答類型均發揮著重要作用，缺一不可。而在HpⅠ型感染者與HpⅡ型感染者之間，除IL-8 外，上述細胞因子水平則沒有顯著差異。胃泌素-17（G-17）僅在HpⅡ型感染著體內顯著升高，PGI與PGⅡ在兩種感染者體內均有顯著升高，但二者的比值在感染前后差異無統計學意義，見表3。

表3 安慶市區健康體檢人群不同Hp感染類型分組后各細胞因子水平分析（±s）

表3 安慶市區健康體檢人群不同Hp感染類型分組后各細胞因子水平分析（±s）

注：★：P＜0.05；★★：P＜0.01；★★★：P＜0.001，與幽門螺桿菌陰性組相比

感染類型IL-1β(ng/L) IL-6(ng/L)IL-8(ng/L)IL-10(ng/L) IFN-γ(ng/L)TNF-α(ug/L)G-17(pmol/L) PGI(ng/mL) PGⅡ(ng/mL) PGRⅠ型 9.18±3.46★★★13.74±8.88★★116.27±14.14★★★61.45±21.11★★★24.95±15.87★16.31±9.99★ 4.30±3.67 118.14±35.36★★★14.69±8.67★★★14.79±23.80Ⅱ型 9.68±1.98★★★13.50±6.79★★93.55±13.62★★44.79±18.19★★★26.94±9.40★★16.04±12.45★6.68±16.51★★ 81.87±32.07 9.21±5.26 10.04±3.62陰性3.15±1.80 1.77±1.23 61.40±24.954.75±3.848.57±6.28 4.35±3.39 0.650±0.43 85.30±25.21 6.99±2.46 12.68±2.77

3 討 論

幽門螺桿菌作為一種對外界生長環境十分苛刻的螺旋形、兼性厭氧型原核細菌，是唯一一種能在胃酸環境中生存的微生物。Hp存在兩種重要的毒力因子，即細胞空泡毒素（VacA）和細胞毒素相關蛋白（CagA），VacA能使細胞產生空泡變性的蛋白，分子量為87 KD，此蛋白能通過改變離子通透性導致細胞空泡形成，進而損傷胃黏膜，造成糜爛或潰瘍形成。CagA蛋白分子量為120～140 KD，其致病作用尚未完全明確，無致空泡變性的作用，但是CagA與VacA之間存在良好的相關性，可視為Hp的毒力標志。根據Hp可否表達VacA和CagA，將Hp分為Ⅰ和Ⅱ型兩個亞型，Ⅰ型Hp菌株分泌含有VacA和或CagA，為高毒力菌株，與消化性潰瘍和胃癌的發生關系密切；Ⅱ型Hp菌株不表達VacA和CagA，這類菌株毒性相對較小[4]。Hp主要通過消化道進入人體，即所謂“病從口入”。目前主流觀點認為一旦感染Hp就應立刻、全部消滅，常規方法為服用胃酸抑制藥物（PPI）、抗生素及鉍制劑，但根除率并非100%[5]。因此，調查并了解人群Hp感染情況、研究致病機理就顯得十分必要。

安慶市作為“全國文明城市”，生活節奏較慢，尤其是聚餐文化盛行更是給Hp在人群中的傳播提供了便利條件。本研究的主要對象是在市區工作的成年人，合餐制聚餐較多，這使得可以通過“口-口”途徑傳播的Hp有機會在此類人群中傳播。因此，在全國Hp感染率呈逐年下降趨勢的背景下，安慶市區Hp感染率仍然與10 余年前的全國平均感染水平58%幾乎保持一致[6]，這表示安慶市區人們生活水平的提升并未完全帶動衛生習慣的改善，例如，在聚餐時公筷、公勺的使用仍然是一個容易被忽視的問題。需要提出的是，本次研究的對象幾乎全是在市區工作的體檢人群，而安慶地處皖西南，下轄縣級區域較多，各縣衛生習慣、生活水平與市區存在一定的差異，故本次研究未能反映整個“大安慶”地區的全面情況。另外，尚未成年的兒童由于幾乎沒有體檢病例，也被排除在研究之外。但有研究顯示Hp在兒童中反而有著更高的感染率[7]。有待后續研究完善上述不足之處。相對于碳呼氣實驗與快速尿酶實驗，本次研究所采用的免疫印跡實驗不僅陽性檢出率高，且能對Hp感染進行分型[8]，從而可對后續治療提供指導意見。

綜上所述，安徽省安慶市區健康體檢人群中Hp感染率隨年齡增長而增加，60～69 歲感染率最高，70 歲后降低。60～69 歲Hp感染者G-17 和PG水平顯著高于未感染人群。與HpⅡ型感染者相比，HpⅠ型感染者PG水平較高，但兩者之間G-17 水平沒有差異。加強易感人群健康教育，改善本地衛生條件，及時根除感染，對預防本地Hp感染具有關鍵作用。