馥芳艾納香組培快繁體系的初步研究

黃若干 周淑瑤 藍曉東 江紫薇 吳祿祥

1.廣西白云山盈康藥業有限公司，廣西 南寧 530002；2.廣東漢潮中藥科技有限公司，廣東 廣州 510145

0 引言

馥芳艾納香（Blumea aromaticaDC.）為菊科艾納香屬的粗壯草本或亞灌木狀的植物，全草可入藥，味辛、微苦，性溫，具有祛風消腫、活血止癢的功效，主治風濕關節痛、濕疹、皮膚瘙癢及外傷出血等［1］。馥芳艾納香主要分布于我國云南省、四川省、貴州省、廣西壯族自治區（以下簡稱廣西）等地，多生長于低山林緣、荒坡或山谷路旁［2］。馥芳艾納香在廣西有著悠久的用藥歷史，民間常用于風濕骨痛、皮膚瘙癢等癥的治療，廣西白云山盈康藥業有限公司以馥芳艾納香為主藥開發了風濕骨痛純壯藥制劑——華佗風痛寶片（膠囊）、祛風濕藥酒等品種。近年來，隨著市場和產業的發展，馥芳艾納香市場需求量逐年增加，加劇了人們對馥芳艾納香野生資源的過度開采。在自然條件下馥芳艾納香種子發芽率極低，種子壽命較短，不利于馥芳艾納香的推廣種植。因此，資源緊缺現已成為制約馥芳艾納香藥材及制劑產業發展的關鍵問題之一［3］。

目前，國內尚未大面積開展馥芳艾納香人工栽培，關于馥芳艾納香人工栽培的研究報道也較少。因此，筆者以馥芳艾納香種子為外植體，探索外植體消毒最佳時間，繼代增殖、生根培養適宜的培養基，初步建立馥芳艾納香組培快繁技術體系，為實現馥芳艾納香大面積人工栽培生產、提高藥材產量和品質奠定基礎。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

2023年1月，于廣西河池市采集馥芳艾納香種子，要求采種母株生長健壯、無病蟲害。種子采收后，晾曬干燥，篩除雜質，于陰涼處貯藏備用。

試驗試劑有無水乙醇（分析純），由天津市大茂化學試劑廠生產；氯化汞溶液（分析純），由天津市富宇精細化工有限公司生產；α-萘乙酸（α-Naphthaleneacetic acid，NAA），由阿拉丁化學試劑公司生產；6-芐氨基嘌呤（6-Benzylaminopurine，6-BA），由阿拉丁化學試劑公司生產；蔗糖，由天津市大茂化學試劑廠生產；瓊脂，由天津市大茂化學試劑廠生產。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養基配制

以MS 為基本培養基，添加瓊脂7.5 g/L、蔗糖30.0 g/L、pH 值調為6.0～6.2，配制分裝后，于116 ℃、0.1 MPa的條件下滅菌30 min。

1.2.2 初代培養

將馥芳艾納香種子用自來水沖洗5 min，濾紙吸干水分。于超凈工作臺中，將種子用75%乙醇浸泡30 s，再用0.1%氯化汞溶液浸泡消毒8 min，消毒時不斷搖動燒杯。消毒后，用無菌水清洗3 次，每次清洗1 min，期間不斷搖晃燒杯。將消毒后的種子接種于添加2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA 的1/2 MS 培養基中進行初代培養［4］。

1.2.3 繼代培養

挑選健壯、長勢較好的叢生芽，以MS 為基本培養基，探索6-BA（1.0、1.5、2.0、3.0 mg/L）和NAA（0.1、0.2 mg/L）不同植物生長調節劑組合（共8個處理）對馥芳艾納香繼代培養的影響。每瓶接種1 個叢生芽，每個處理接種20瓶，重復3次。

1.2.4 生根培養

挑選生長至1.5 cm 的健壯不定芽，將其接種于不同的生根培養基中進行生根誘導。以1/2 MS 為基本培養基，研究不同質量濃度的NAA（0.1、0.3、0.8、1.5、2.0 mg/L）對馥芳艾納香生根培養的影響。每瓶接種1個不定芽，每個處理接種20瓶，重復3次。

1.3 測定項目及方法

1.3.1 繼代培養階段

接種20 d后，統計馥芳艾納香的增殖系數、玻璃化率，觀察不定芽的生長狀況，篩選出馥芳艾納香適宜的繼代增殖培養基。

1.3.2 生根培養階段

接種20 d后，統計馥芳艾納香的生根率、平均主根數、平均主根長、平均株高，觀察組培苗的生長情況，篩選出馥芳艾納香適宜的生根誘導培養基。

1.4 數據處理

試驗數據采用SPSS 28.0軟件進行統計分析。

2 試驗結果與分析

2.1 不同植物生長調節劑組合對馥芳艾納香繼代培養的影響

由表1 可知，不同植物生長調節劑組合下，馥芳艾納香的繼代增殖效果存在較大差異。各處理不定芽生長情況如圖1 所示。以增殖系數為主要指標，發現H2處理馥芳艾納香的增殖系數最高（9.4），且不定芽生長健壯，呈嫩綠色。其次為H3處理，增值系數為2.3。綜合考慮馥芳艾納香的增值系數及生長情況，最終選擇添加1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA 的MS 培養基為馥芳艾納香適宜的繼代增殖培養基。

表1 馥芳艾納香的繼代培養效果

圖1 不同植物生長調節劑組合下馥芳艾納香生長情況

2.2 不同質量濃度NAA 對馥芳艾納香生根培養的影響

由表2 可知，隨著NAA 質量濃度的升高，馥芳艾納香的生根率呈先下降后升高的趨勢。F1、F2組培苗生長狀況如圖2 所示。其中，NAA 質量濃度為0.1、1.5、2.0 mg/L時，馥芳艾納香的生根率均為100%，生根效果較好。以生根率為主要指標，綜合考慮馥芳艾納香組培苗的平均主根長和根的生長情況，最終選擇添加0.1 mg/L NAA 的1/2 MS 培養基為馥芳艾納香適宜的生根誘導培養基。

表2 馥芳艾納香的生根培養效果

圖2 不同質量濃度NAA處理下馥芳艾納香生根情況

3 討論與結論

近年來，馥芳艾納香市場需求量不斷增加，但馥芳艾納香種子在自然條件下自我繁殖困難，且新優品種難以采用扦插、嫁接、播種等方式進行繁殖。一般通過組培繁殖技術實現具有優良特性的馥芳艾納香種苗的培育。應用組培快繁技術可以短時間內生產出無菌、無毒、健康、性狀一致的優質種苗，是解決馥芳艾納香種苗短缺、實現規模化生產的有效方法之一［5］。

植物生長調節劑是促進植物組織分化的重要調節物質，不同組合及質量濃度的植物生長調節劑可能會刺激植物不同控制基因的酶類，從而影響植物內源激素的水平，進而影響植物不定芽的增殖效果和植株的生長狀態［6-7］。因此，篩選適宜的植物生長調節劑組合及質量濃度是建立植物組培快繁技術的關鍵。此次研究發現，在馥芳艾納香外植體誘導培養過程中，6-BA的質量濃度對外植體的增殖系數起著關鍵作用。外植體在誘導培養30 d 后，其增殖系數隨著6-BA 質量濃度的增加而下降，說明高質量濃度的6-BA 不利于馥芳艾納香的繼代增殖。此次試驗中，以增殖系數為主要指標，結合不定芽的生長情況，篩選出添加1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA 的MS 培養基為馥芳艾納香適宜的繼代增殖培養基。

植物生長調節劑的質量濃度也是影響植物組培苗生根的關鍵因素。此次研究發現，隨著NAA質量濃度的升高，馥芳艾納香的生根率和平均主根長均呈先下降后升高的趨勢，最終篩選出添加0.1 mg/L NAA 的1/2 MS 培養基為馥芳艾納香不定芽適宜的生根誘導培養基，組培苗的平均主根長達5.9 cm，且主根粗壯，有利于組培苗后期順利經過煉苗階段。

綜上所述，馥芳艾納香種子以75%乙醇和0.1%氯化汞溶液消毒后，于無菌條件下接種在添加2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA 的1/2 MS 培養基中進行初代培養可得到叢生芽。切下誘導出的叢生芽，將其接種于添加1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA 的MS 培養基進行繼代培養，誘導形成不定芽。將不定芽接種于添加0.1 mg/L NAA 的1/2 MS 培養基中可誘導其生根。此次試驗可為構建馥芳艾納香組培快繁體系奠定基礎。