天花粉多糖對正常大鼠鎮痛作用的研究

呂 航,王紫怡,付立波,李佳林

(長春師范大學生命科學學院,吉林 長春 130032)

疼痛是一種極其復雜的體驗,在感知覺方面以及情感方面都有涉及[1]。疼痛產生的原因眾多,多種疾病都會因組織損傷產生相應部位的疼痛,這也成為了病人就醫的主要原因,而沒有組織損傷則大多與心理因素有關。隨著科技進步和研究深入,我們逐步發現了疼痛的機理是中樞神經系統對外周傷害性刺激的反應,隨著研究逐步加深,出現了較為成體系的治療藥物,主要分為西藥和中成藥兩大類。其中,西藥應用較為廣泛,而在中成藥方面的研究相對較少。

天花粉是葫蘆科植物栝樓(TrichosantheskirilowiiMaxim)的干燥根。天花粉多糖是天花粉的主要活性成分,從天花粉中提取到的多糖含有兩組組分[2],是由6種單糖構成的雜多糖,其提純以水提醇沉法為主[3]。生理功能主要為抗腫瘤和免疫調節[4]。目前國內外對天花粉多糖的研究主要集中于提純和生理功能的研究,尚沒有研究表明其是否具有鎮痛效果,故此次實驗選擇天花粉多糖進行痛覺方面的研究。

1 實驗材料

1.1 實驗器材

Randall-Selitto痛覺測試儀(壓板):出自意大利UGO;YLS-6B熱板儀:出自上海曼普生物公司;YP1201N電子天平:出自上海精科實業集團;注射器:出自江西洪達醫療器械集團有限公司;灌胃針:出自上海玉研科學儀器有限公司;燒杯:出自浙江潤蘭科技有限公司。

1.2 實驗藥品和動物

天花粉蛋白粗提物:西安瑞英生物科技有限公司;生理鹽水:廣州零界醫藥有限公司;雄性Wistar大鼠6只:長春億斯實驗動物技術有限責任公司。

2 實驗方法

2.1 大鼠灌胃

準備灌胃針頭,用左手小指和無名指抓住大鼠尾巴,另外三指按住大鼠頸部,保持大鼠的頭部和頸部成一條直線,方便灌胃針頭順利進入并將對大鼠的傷害降到最低。灌胃針從大鼠嘴角進入,能夠壓住舌頭并抵住上顎,將灌胃針頭輕輕向內推進,有刺空感說明針頭順利通過食管進入食道,此時可以進行灌胃藥液推進[5]。注意若無刺空感,不可強行將藥物灌胃,可以重新找準位置將灌胃針頭插入。

2.2 行為學測痛

行為學測痛包括熱板測試和壓板測試兩部分。正式實驗前,需對大鼠進行為期至少7天的訓練使大鼠熟悉測試內容,做到人鼠配合默契。正式實驗注射藥物前,進行三輪測試求取平均值作為基礎對照值,分別灌胃生理鹽水,5,20,80 mg/mL的天花粉多糖水溶液,在灌胃后的5,10,15,20,30,45,60 min的7個時間節點測量大鼠后爪縮爪反應潛伏期(Hindpaw Withdrawal Latencies,HWL)。

2.3 數據處理

將記錄的時間數據輸入Excel表格進行初步計算,以“均值±標準誤”形式表示,使用Origin9.1軟件作圖。數據整合分析使用SPSS 26.0軟件,其中組內對比采用單因素方差分析,組間對比采用獨立樣本t檢驗的方法進行。

3 實驗結果

生理鹽水與不同濃度天花粉多糖水溶液灌胃后大鼠HWL的變化百分比如表1至表3所示。由表1可知,與灌胃生理鹽水組相比,灌胃5 mg/mL天花粉多糖水溶液對正常大鼠的右爪的熱刺激HWL有差異(P<0.05),對左爪和右爪的機械刺激HWL均有顯著差異(P<0.05)。

表1 灌胃5 mg/mL天花粉多糖水溶液后大鼠對熱刺激和機械刺激的后爪縮爪反應潛伏期變化

表2 灌胃20 mg/mL天花粉多糖水溶液后大鼠對熱刺激和機械刺激的后爪縮爪反應潛伏期變化

表3 灌胃80 mg/mL天花粉多糖水溶液后大鼠對熱刺激和機械刺激的后爪縮爪反應潛伏期變化

由表2可知,與灌胃生理鹽水組相比,灌胃20 mg/mL天花粉多糖水溶液對正常大鼠的左爪和右爪的熱刺激HWL有顯著差異(P<0.01),對左爪和右爪的機械刺激HWL也有顯著差異(P<0.01)。

由表3可知,與灌胃生理鹽水組相比,灌胃80 mg/mL天花粉多糖水溶液對正常大鼠左爪的熱刺激HWL有顯著差異(P<0.01),對右爪的熱刺激有極顯著差異(P<0.001),對左爪和右爪的機械刺激HWL均有極顯著差異(P<0.001)。

4 討論

本實驗結果證明,與灌胃生理鹽水作對照,天花粉多糖水溶液具有鎮痛效果,且濃度越大,鎮痛效果越明顯,在30 min時鎮痛效果最佳,鎮痛效果會持續一定的時間。多數學者研究發現,中藥成分中提取的多糖常為鎮痛作用的有效成分。例如伸筋草多糖在外周與中樞神經上都能夠發揮止痛作用[6];甘青青蘭多糖能夠消炎止痛[7];枸杞多糖[8]與刺五加多糖[9]也能夠抗炎止痛等。且相關研究表明,多糖能通過抑制趨化因子與黏附因子表達和抑制酶活性從而進行抗炎鎮痛[10-12];或者能夠降低炎癥初期毛細血管的通透性,抑制炎癥介質部分滲出而減輕疼痛[13]。但對于天花粉多糖的鎮痛途徑還有待進一步研究。