鮮積雪草化學成分的分離鑒定

黃穎雪 繆麗蘭 田明明 吳繼春

基金項目：

黔科合基礎［2019］1023號。

作者簡介：

黃穎雪（1997—），女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向為中藥化學。E-mail： 1412040400@qq.com

通信作者：

吳繼春（1982—），男，漢族，博士，副教授，研究方向為苗藥物質基礎。E-mail：493808408@qq.com

【摘? 要】

目的：分離鑒定積雪草的化學成分。方法：采用溶劑提取和硅膠柱層析分離化合物，通過核磁共振波譜數據鑒定結構。結果：從中分離得到7個化合物，分別鑒定為3-Hydroxy-8-acetoxy-pentadecadien-（1，9）-diin-（4，6）（1）、β-谷甾醇（2）、1，3-dihydroxylpropyl-（9Z，12Z）-octadeca-9，12-dienate （3）、咖啡酸甲酯（4）、araliadiol （5）、山柰酚（6）、槲皮素（7）。結論：化合物1、3、4為首次從積雪草中分離得到。

【關鍵詞】

積雪草；聚炔；化學成分

【中圖分類號】R284.1??? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）22-0035-03

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.22.zgmzmjyyzz202322009

Isolation and Identification of Constituents from the Fresh Plant of Centella asiatica

HUANG Yingxue? MIAO Lilan? TIAN Mingming? WU Jichun*

Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，? Guiyang 550025， China

Abstract：

Objective To isolate and identify the Constituents from the fresh plant of Centella asiatica. Methods The compounds were separated by solvent extraction and silica gel column chromatography， and their structures were identified by NMR data. Results Seven compounds were isolated and identified as 3-Hydroxy-8-acetoxy-pentadecadien-（1，9）-diin-（4，6）（1）， β-sitosterol （2）， 1，3-dihydroxylpropyl-（9Z，12Z）-octadeca-9，12-dienate （3）， methyl caffeic acid （4）， araliadiol （5）， kaempferol （6） and quercetin （7）. Conclusion Compounds 1， 3 and 4 were isolated from this plant for the first time.

Keywords：

Centella asiatica; Polyynes; Chemical Composition

積雪草Centella asiatica （L.） Urb.為傘形科積雪草屬多年生匍匐草本植物，廣泛分布于長江流域以南各地。積雪草用藥歷史悠久，始載于《神農本草經》，具有清熱利濕、解毒消腫的功效，主要用于治療濕熱黃疸、中暑腹瀉、石淋熱淋、癰腫瘡毒、跌撲損傷等病癥［1-2］。同時，鮮積雪草還是一種使用廣泛的鮮藥，內服或外用治療流行性腮腺炎、傳染性肝炎、帶狀皰疹等［3］。目前，已從該植物中發現三萜及其苷類、多炔類、揮發油、黃酮類、生物堿等化學成分［4］。藥理研究［5］表明，積雪草提取物具有抗腫瘤、抗纖維化、抗炎、抗阿爾茲海默癥、改善學習記憶能力、抗抑郁、抑制瘢痕增生和修復皮膚損傷等作用，積雪草苷被認為是發揮相關功效的主要活性成分。此外，積雪草總黃酮還具有促進組織愈合、止血、止痛等活性［6］。對鮮積雪草化學成分的研究未見報道。研究表明，鮮藥與干藥中的化合物種類和含量可能存在差異，藥理作用也有區別［7］。據此，本實驗對鮮積雪草全草95%乙醇提取物的化學成分進行分離鑒定，得到7個化合物，其中3個化合物為首次從積雪草中分離得到。報道如下。

1? 儀器與材料

1.1? 儀器? Bruker Avance Neo-400 MHz核磁共振波譜儀（TMS為內標，德國Bruker公司）；Buchi旋轉蒸發儀（瑞士Buchi公司）；WFH-308B型三色紫外分析儀（上海精科實業有限公司）；超聲儀（上海科導超聲儀器有限公司）；數顯熱風槍（德力西電氣）。

1.2? 材料? 柱層析硅膠（200～300目、300～400目，青島海洋化工有限公司）；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠（美國GE公司）；GF254薄層硅膠板（青島海洋化工有限公司）。其它試劑均為分析純。實驗藥材于2019年11月采自貴州省貴陽市花溪大學城，由貴州中醫藥大學江洪副教授鑒定為傘形科植物積雪草Centella asiatica （L.） Urb.的新鮮全草。

2? 提取與分離

鮮積雪草全草100 kg，洗凈切碎，95%乙醇（200 L）浸泡提取4次，提取液減壓濃縮得浸膏3.0 kg。總浸膏混懸于10 L水中，分別用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。石油醚萃取部分（640 g）經硅膠柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯（100∶0→0∶100）梯度洗脫，得到5個流分Fr.A～Fr.E。Fr.B經硅膠柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯（10∶1）洗脫，得到Fr.B-1～Fr.B-2兩個流分。Fr.B-1經硅膠柱層析（石油醚∶乙酸乙酯=5∶1洗脫）、Sephadex LH-20柱層析（二氯甲烷∶甲醇=1∶1洗脫）得到化合物1（150 mg）。Fr.C重結晶（乙酸乙酯）得化合物2（15 g）；母液經硅膠柱層析（石油醚∶乙酸乙酯=5∶1洗脫）、Sephadex LH-20柱層析（二氯甲烷∶甲醇=1∶1洗脫）得到化合物3（20 mg）。乙酸乙酯萃取部分（100 g）通過硅膠柱層析，二氯甲烷∶甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，得到4個流分Fr.F～Fr.I。Fr.G采用硅膠柱層析（二氯甲烷∶甲醇=50∶1洗脫）、Sephadex LH-20柱層析（二氯甲烷∶甲醇=1∶1洗脫），最后重結晶（甲醇）得到化合物4（15 mg）。Fr.H采用硅膠柱層析（石油醚∶乙酸乙酯=1∶1洗脫）、Sephadex LH-20柱層析（二氯甲烷∶甲醇=1∶1洗脫），得到化合物5（10 mg）。Fr.I采用硅膠柱層析（石油醚∶乙酸乙酯=1∶1洗脫）分為Fr.I-1～Fr.I-3。Fr.I-1和Fr.I-3的沉淀分別用乙醇反復洗滌、離心得到化合物6（8.0 g）、7（10 g）。

3? 結構鑒定

化合物1：淡黃色油狀，易溶于石油醚、二氯甲烷，分子式為C17H22O3。1H NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 5.95 （1H， dd， J=8.6， 4.3 Hz， H-8）， 5.70 （1H， m， H-2）， 5.48 （1H， dq， J=15.6， 7.5， 5.3 Hz， H-10）， 5.26 （1H ddd， J=22.3， 13.3， 5.6 Hz， H-9）， 5.01 （1H dd， J=10.5， 5.2 Hz， H-1）， 4.72 （1H， t， J=5.0 Hz， H-3）， 1.98 （2H， dd， J=10.0， 4.8 Hz， H-11）， 1.88 （3H， s， H-17）， 1.21 （2H， t， J=7.1 Hz， H-12）， 1.12 （4H， m， H-13， 14）， 0.72 （3H， dt， J=10.7， 5.0 Hz， H-15）; 13C NMR （100 MHz， CDCl3） δ： 169.7 （C-16）， 136.2 （C-10）， 135.8 （C-2）， 123.7 （C-9）， 116.8 （C-1）， 79.0 （C-4）， 75.9 （C-7）， 69.4 （C-5）， 69.4 （C-6）， 62.9 （C-3）， 60.1 （C-8）， 31.2 （C-13）， 28.6 （C-12）， 27.6 （C-11）， 22.3 （C-14）， 20.7 （C-17）， 13.9 （C-15）。以上數據與文獻［8］中的化合物8-acetoxyfalcarinol相似，但是對比1H NMR和13C NMR譜發現，化合物1比化合物8-acetoxyfalcarinol少了兩個亞甲基。通過CAS SciFinder數據庫檢索發現，化合物1與文獻［9］中的化合物Ⅲ數據一致，故鑒定化合物1為3-Hydroxy-8-acetoxy-pentadecadien-（1，9）-diin-（4，6）。

化合物2：白色針狀結晶，易溶于二氯甲烷、乙酸乙酯等溶劑，分子式為C29H50O。1H NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 5.30 （1H， m， H-6）， 0.97 （3H， s， H-19）， 0.88 （3H， d， J=6.6 Hz， H-21）， 0.81 （3H， m， H-27）， 0.78 （3H， d， J=1.7 Hz， H-26）， 0.75 （3H， d， J=6.9 Hz， H-29）， 0.65 （3H， d， J=7.4 Hz， H-18）; 13C NMR （100 MHz， CDCl3） δ： 140.7 （C-5）， 121.4 （C-6）， 71.5 （C-3）， 56.7 （C-14）， 55.9 （C-17）， 50.0 （C-9）， 45.7 （C-24）， 42.2 （C-4）， 42.1 （C-13），? 39.6 （C-12）， 37.1 （C-1）， 36.4 （C-10）， 36.0 （C-20）， 33.8 （C-22）， 31.8 （C-8）， 31.7 （C-2）， 30.1 （C-7）， 29.0 （C-25）， 28.2 （C-16）， 25.9 （C-23）， 24.2 （C-15）， 22.9 （C-28）， 20.9 （C-11）， 19.7 （C-26）， 19.2 （C-19）， 18.9 （C-27）， 18.6 （C-21）， 11.9 （C-29）， 11.8 （C-18）。以上數據與文獻［10］一致，故鑒定化合物2為β-谷甾醇。

化合物3：棕黃色油狀，易溶于二氯甲烷、乙酸乙酯等溶劑，分子式為C21H38O4。1H NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 5.39 （4H， m， H-9， 10， 12， 13）， 4.14 （3H， pd， J=11.7， 4.8 Hz， H-1′，2′，3′）， 2.34 （2H， t， J=7.5 Hz， -CH2-COO）， 0.88 （3H， t， J=4.1 Hz， H-18）; 13C NMR （100 MHz， CDCl3） δ： 173.8 （C-1）， 130.1 （C-10）， 129.9 （C-12）， 128.0 （C-13）， 127.8 （C-9）， 68.3 （C-2′）， 65.0 （C-1′，C-3′）， 34.0 （C-2）， 31.8 （C-6）， 31.4 （C-16）， 29.5 （C-7）， 29.3 （C-15）， 29.1 （C-4）， 29.0 （C-5）， 27.1 （C-8，C-14）， 25.6 （C-11）， 24.8 （C-3）， 22.5 （C-17）， 14.0 （C-18）。以上數據與文獻［11］一致，故鑒定化合物3為1，3-dihydroxylpropyl-（9Z，12Z）-octadeca-9，12-dienate。

化合物4：乳白色顆粒，溶于甲醇；分子式為C10H10O4。1H NMR （400 MHz， MeOD） δ： 7.58 （1H， d， J=15.9 Hz， H-7）， 7.16 （1H， d， J=1.9 Hz， H-2）， 7.05 （1H， dd， J=8.2， 2.0 Hz， H-6）， 6.80 （1H， d， J=8.1 Hz， H-5）， 6.30 （1H， d， J=15.9 Hz， H-8）， 3.87 （3H， s， -CH3）; 13C NMR （100 MHz， MeOD） δ： 170.9 （C-9）， 150.4 （C-3）， 149.3 （C-4）， 146.9 （C-8）， 127.7 （C-1）， 123.9 （C-6）， 116.4 （C-5）， 115.8 （C-2）， 111.6 （C-7）， 56.4 （C-10）。以上數據與文獻［12］一致，故鑒定化合物4為咖啡酸甲酯。

化合物5：黃色油狀，易溶于二氯甲烷、乙酸乙酯，分子式為C15H20O2。1H NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 5.92 （1H， ddd， J=17.0， 10.1， 5.4 Hz， H-2）， 5.59 （1H， m， H-10）， 5.51 （1H， dd， J=8.3， 1.5 Hz， H-9）， 5.47 （1H， d， J=1.4 Hz， H-1）， 5.24 （1H， d， J=10.1 Hz， H-1）， 5.19 （1H， d， J=8.2 Hz， H-8）， 4.93 （1H， d， J=5.2 Hz， H-3）， 2.09 （2H， qd， J=7.3， 1.4 Hz， H-11）， 1.38 （2H， m， H-12）， 1.27 （4H， m， H-13， 14）， 0.87 （3H， t， J=6.8 Hz， H-15）; 13C NMR （100 MHz， CDCl3） δ： 135.6 （C-2）， 134.5 （C-10）， 127.5 （C-9）， 117.3 （C-1）， 79.74 （C-7）， 78.1 （C-4）， 70.2 （C-5）， 68.6 （C-6）， 63.3 （C-3）， 58.4 （C-8）， 31.3 （C-14）， 28.8 （C-12）， 27.5 （C-11）， 22.4 （C-13）， 13.9 （C-15）。以上數據與文獻［13］一致，故鑒定化合物5為araliadiol。

化合物6：黃色粉末，溶于甲醇；分子式為C15H10O6。1H NMR （400 MHz， MeOD） δ： 8.07 （2H， d， J=9.0 Hz， H-2′， 6′）， 6.89 （2H， d， J=8.9 Hz， H-3′， 5′）， 6.37 （1H， d， J=2.1 Hz， H-8）， 6.16 （1H， d， J=2.1 Hz， H-6）; 13C NMR （100 MHz， MeOD） δ： 177.2 （C-1）， 165.5 （C-7）， 162.4 （C-5）， 160.4 （C-4′）， 158.1 （C-9）， 147.9 （C-2）， 137.0 （C-3）， 130.6 （C-2′， C-6′）， 123.6 （C-1′）， 116.2 （C-3′， C-5′）， 104.5 （C-10）， 99.2 （C-6）， 94.4 （C-8）。以上數據與文獻［14］一致，故鑒定化合物6為山柰酚。

化合物7：黃色粉末，溶于甲醇；分子式為C15H10O7。1H NMR （400 MHz， DMSO-d6） δ： 7.67 （1H， d， J=2.1 Hz， H-2′）， 7.54 （1H， dd， J=8.5， 2.2 Hz， H-6′）， 6.88 （d， J=8.5 Hz， H-5′）， 6.40 （1H， d， J=2.0 Hz， H-8）， 6.18 （1H， d， J=2.0 Hz， H-6）; 13C NMR （100 MHz， DMSO-d6） δ： 175.3 （C-4）， 163.4 （C-7）， 160.2 （C-5）， 155.6 （C-9）， 147.1 （C-2）， 146.2 （C-4′）， 144.5 （C-3′）， 135.2 （C-3）， 121.4 （C-1′）， 119.4 （C-6′）， 115.1 （C-5′）， 114.5 （C-2′）， 102.5 （C-10）， 97.6 （C-6）， 92.8 （C-8）。以上數據與文獻［15］一致，故鑒定化合物7為槲皮素。

4? 討論

新鮮積雪草總浸膏采用硅膠、Sephadex LH-20凝膠柱層析等方法進行分離純化，通過核磁共振波譜數據鑒定結構，得到7個化合物，分別是3-Hydroxy-8-acetoxy-pentadecadien-（1，9）-diin-（4，6）（1）、β-谷甾醇（2）、1，3-dihydroxylpropyl-（9Z，12Z）-octadeca-9，12-dienate （3）、咖啡酸甲酯（4）、araliadiol （5）、山柰酚（6）、槲皮素（7）。其中化合物1、5是聚炔類化合物。聚炔具有抗微生物、抗腫瘤、異株克生等活性［16］。化合物1的活性研究未見報道，化合物5具有抑制人乳腺癌細胞（MCF-7）生長［13］和保護神經［17］等作用。雖然前人也從積雪草中得到多種聚炔成分，但是對這些成分的活性研究較少，有待深入。化合物6和7是黃酮類化合物，本實驗發現這兩個化合物在新鮮積雪草中含量較高。有文獻［18］報道積雪草中的山奈酚含量較低，與本實驗結果矛盾。化合物6具有抗腫瘤、治療糖尿病和骨質疏松、保護損傷細胞等作用［19］，化合物7具有抗糖尿病、抗高血壓、抗阿爾茨海默病、抗衰老及保護心血管等作用［20］。積雪草總黃酮在治療慢性肛裂的過程中能夠促進組織聚合、止血、減少疼痛［6］，今后可以針對積雪草中的黃酮單體化合物展開相關研究。化合物1、3、4為首次從積雪草中分離得到，同時化合物6的含量與前人報道矛盾，表明干鮮積雪草的化合物種類和含量可能均有差異。后續還需要系統分析產地、采收期、加工過程等因素對積雪草的化學成分和功效的影響，為合理開發利用這一藥材提供依據。

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（收稿日期：2023-02-15? 編輯：劉? 斌）