文氏馬齒莧湯對急性濕疹小鼠血清IgE、IL-2和IL-5的影響

鄒瑾，景明夷，朱寶華，3，陳明嶺?

（1. 成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，四川 成都 610000； 2. 成都中醫(yī)藥大學，四川 成都 610000；3. 中山市中醫(yī)院，廣東 中山 528400）

濕疹是一種具有滲出傾向的炎癥性皮膚病，臨床根據(jù)病程及皮損特點將其分為急性、亞急性、慢性濕疹［1-2］。急性濕疹在紅斑的基礎上見丘疹、丘皰疹，有明顯的滲出，皮損境界不清楚，瘙癢劇烈，可以發(fā)生于任何年齡、任何季節(jié)。本病的發(fā)病機制尚不清楚，目前多認為與免疫功能異常、皮膚屏障功能障礙、菌群失調(diào)或內(nèi)分泌變化等因素相關，其中以T 細胞介導免疫反應研究最多［3］。相關研究顯示，近30 年來在工業(yè)國家中，兒童和成人的濕疹患病率分別上升15%～30%和2%～10%［4］。目前西醫(yī)治療以外用糖皮質(zhì)激素制劑和口服抗組胺藥物為主，但療效短暫，具有停藥后容易復發(fā)、長期使用不良反應較多等缺陷。濕疹，中醫(yī)又稱為濕瘡，因稟賦不耐，風、濕、熱阻于肌膚所致［5］。中醫(yī)藥治療濕疹有獨特的優(yōu)勢，大量的臨床研究證明中醫(yī)藥治療濕疹安全有效。本研究所使用的文氏馬齒莧湯是由簡化消風散合馬齒莧湯化裁而來，為四川文氏皮科流派傳承人艾儒棣教授及陳明嶺教授根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗總結的經(jīng)驗方。既往的臨床試驗證明該方治療濕疹的療效明確，復發(fā)率較低，且無明顯不良反應［6-9］，但未曾在動物試驗中開展相關研究，故本實驗通過建立急性濕疹動物模型，初步探討文氏馬齒莧湯對急性濕疹小鼠免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）、白細胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、白 細 胞 介 素-5（interleukin-5，IL-5）的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康Balb/c 雄性小鼠36 只，8 周齡，體質(zhì)量（20 ±2）g，由四川省成都市達碩實驗動物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（川）2015-03，于成都醫(yī)學院SPF級實驗動物房飼養(yǎng)。動物房內(nèi)每日保持明/暗周期12/12 h（光照時間為7：00—19：00），每個Optimice 100 EVC籠具內(nèi)飼養(yǎng)6只動物，籠具內(nèi)隔音、通風、溫度控制在20～26 ℃、相對濕度40%～70%。常規(guī)飼養(yǎng)，自由攝食，在同一環(huán)境中適應性喂養(yǎng)1周后開始實驗。所有動物均使用成都醫(yī)學院實驗動物中心提供的飼料和滅菌水喂養(yǎng)。本研究已獲得成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院動物實驗倫理委員會審批，倫理審批號：2022DL-013。

1.2 主要試劑

2，4-二硝基氯苯（DNCB，成都科龍化工有限公司，批號：2022042203）；丙酮（成都科龍化工有限公司，批號：20220116）；橄欖油（成都科龍化工有限公司，批號：20220316）；小鼠IgE、IL-2、IL-5檢測試劑盒（江蘇晶美生物科技有限公司，批號分別為JM-02339M2、JM-02981M2、JM-02447M2）。

1.3 主要儀器

臥式冷凍箱（合肥美菱股份有限公司，型號：BCD-318AT）；電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司，型號：ME203E/02）；臺式高速冷凍離心機（龍醫(yī)療設備有限公司，型號：D3024R）；電熱鼓風干燥箱（天津萊玻特瑞儀器有限公司，型號：GEL-70）；渦旋混合器（大龍醫(yī)療設備有限公司，型號：MXE）；酶標檢測儀（深圳雷杜生命科學股份有限公司，型號：RT-6100）。

1.4 藥品

文氏馬齒莧湯組方：馬齒莧20 g，黃芩10 g，金銀花15 g，連翹15 g，生地黃20 g，川射干15 g，龍骨20 g，紫荊皮15 g，石膏20 g，知母10 g，地膚子30 g，煅磁石30 g，山藥30 g，生甘草6 g。由成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中藥房制備（其中高劑量組為105.298 g/kg，中劑量組為52.649 g/kg，低劑量組為26.325 g/kg）。龍膽瀉肝丸（北京同仁堂制藥有限公司，國藥準字Z11020653），小鼠服用劑量為2.466 g/kg。

1.5 動物分組

適應性飼養(yǎng)1 周后，依據(jù)體質(zhì)量按照區(qū)間分組法隨機分為空白組、模型組、龍膽瀉肝丸組和文氏馬齒莧湯高、中、低劑量組，每組6只。

1.6 模型制備

參照文獻［10-11］制備方法，采用2，4-二硝基氯苯（DNCB）的方法造模，造模前1 d于小鼠背部選1.5 cm ×2 cm 大小區(qū)域用剃毛刀去毛。第1 天和第2 天，以7%DNCB（0.7 g DNCB 溶于10 mL 丙酮-橄欖油溶劑，丙酮∶橄欖油 = 4∶1）100 μL 外涂小鼠去毛背部致敏；第7、9、11天，除空白組外，用移液槍在其余組小鼠右耳雙側外涂1% DNCB（0.1 g DNCB 溶于10 mL 丙酮-橄欖油溶劑，丙酮∶橄欖油 = 4∶1）20 μL激發(fā)，同時左耳外涂丙酮-橄欖油溶劑作為對照。

1.7 動物給藥

造模成功后，龍膽瀉肝丸組予以龍膽瀉肝丸灌胃，文氏馬齒莧湯高、中、低劑量組予以高、中、低劑量文氏馬齒莧湯灌胃，每次灌胃0.2 mL，空白組和模型組予以等量生理鹽水灌胃，1次/d，連續(xù)7 d。

1.8 檢測指標

治療結束后，小鼠眼眶采血，3 000 r/min，離心15 min，采集血清，于-20 ℃中保存，采用ELISA 法檢測血清中IgE、IL-2、IL-5水平。

1.9 統(tǒng)計學方法

運用SPSS 26.0 軟件進行統(tǒng)計學分析，各組數(shù)據(jù)以均數(shù) ± 標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析。P＜ 0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 局部皮損表現(xiàn)

與空白組比較，造模后小鼠背部可見紅腫、滲出、脫屑、結痂等皮損改變。7 d 治療結束后，龍膽瀉肝丸組小鼠背部可見焦黃色厚痂皮，皮膚紅斑、水腫、滲出減少；文氏馬齒莧湯高劑量組小鼠大部分痂皮脫落，局部皮膚仍可見少量痂殼、紅斑、脫屑；文氏馬齒莧湯中劑量組小鼠痂皮完全脫落，大部分皮膚已修復，肉眼可見少量紅斑；文氏馬齒莧湯低劑量組小鼠背部可見黃色厚薄不一的痂皮，上覆少量鱗屑，紅斑、水腫、滲出減少。見圖1。

圖1 不同組別小鼠局部皮損變化

2.2 各組血清IgE、IL-2、IL-5水平比較

與空白組比較，模型組IgE、IL-2、IL-5 水平顯著升高（P＜ 0.01）。經(jīng)藥物干預后，各藥物組IgE、IL-2、IL-5 水平出現(xiàn)不同程度降低。與模型組比較，龍膽瀉肝丸組及文氏馬齒莧湯高、中劑量組IgE、IL-2、IL-5 水平顯著降低（P＜ 0.01），文氏馬齒莧湯低劑量組IgE、IL-2 水平顯著降低（P＜ 0.01；P＜0.05）；與龍膽瀉肝丸組比較，文氏馬齒莧湯中劑量組IgE 顯著降低（P＜ 0.05），文氏馬齒莧湯高劑量組IL-2 水平顯著降低（P＜ 0.05），文氏馬齒莧湯中、低劑量組IL-5 水平顯著降低（P＜ 0.01，P＜ 0.05）。具體見表1。

表1 各組小鼠血清IgE、IL-2、IL-5水平比較（±s）

表1 各組小鼠血清IgE、IL-2、IL-5水平比較（±s）

注：與空白組比較，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01；與模型組比較，#P ＜ 0.05，##P ＜ 0.01；與龍膽瀉肝丸組比較，△P ＜ 0.05，△△P ＜ 0.01。

組別空白組模型組龍膽瀉肝丸組文氏馬齒莧湯高劑量組文氏馬齒莧湯中劑量組文氏馬齒莧湯低劑量組IL-5/（pg/mL）10.57 ± 2.07##△△21.69 ± 1.86**△△17.30 ± 1.88**##15.01 ± 2.64**##13.35 ± 2.66*##△△20.24 ± 1.17**△n 6 6 6 6 6 6 IgE/（pg/mL）4.57 ± 0.75##△△9.27 ± 1.33**△△7.33 ± 1.20**##7.12 ± 1.48**##5.81 ± 0.91##△7.22 ± 1.13**##IL-2/（pg/mL）98.20 ± 16.87##△△230.03 ± 29.02**△△188.39 ± 29.29**##154.11 ± 27.91**##△159.28 ± 33.54**##194.56 ± 13.19**#

3 討論

文氏馬齒莧湯是由四川文氏皮科流派代表人物艾儒棣教授及陳明嶺教授經(jīng)驗方——簡化消風散合馬齒莧湯化裁而來，兩方合用，針對急性濕瘡的病因病機，效果更佳。方中馬齒莧清熱解毒、散血消腫，黃芩清熱燥濕，兩者共為君藥；金銀花和連翹配伍可疏散風熱、清熱解毒，生地黃清熱涼血、養(yǎng)陰生津，知母和石膏配伍可清熱瀉火、生津潤燥，加上射干共助君藥清熱之力；紫荊皮、地膚子祛風止癢，龍骨、磁石鎮(zhèn)驚安神止癢，佐以山藥，補益脾胃，以防用藥過于寒涼傷胃，甘草為使藥，全方共奏清熱除濕、祛風止癢之效。現(xiàn)代藥理學研究證明馬齒莧具有抗炎、抑菌、抗腫瘤、抗氧化和增強免疫力的作用［12］；黃芩中含有黃芩苷、汗黃芩素等成分，通過強化機體的巨噬細胞功能，能夠提高機體的免疫功能［13］；生地黃能幫助合成淋巴細胞DNA 和蛋白質(zhì)，同時減輕毛細血管壁通透性，抑制血管內(nèi)皮炎癥，發(fā)揮抗過敏的作用［14］；地膚子提取物可以抑制速發(fā)型變態(tài)反應并且通過抑制白細胞總數(shù)、調(diào)節(jié)細胞因子和受體抗Ⅳ型超敏反應［15］；龍骨和磁石配伍，鎮(zhèn)驚和催眠、止癢效果更佳。本研究發(fā)現(xiàn)給予急性濕疹小鼠文氏馬齒莧湯后，其皮損大部分已修復，肉眼僅可見少量紅斑、痂殼、鱗屑，其中文氏馬齒莧湯高、中劑量組最為顯著。

本研究通過建立急性濕疹小鼠模型，探討文氏馬齒莧湯對小鼠皮損及血清IgE、IL-2 和IL-5 的影響。結果發(fā)現(xiàn)與模型組比較，文氏馬齒莧湯能不同程度降低血清IgE。與龍膽瀉肝丸組比較，文氏馬齒莧湯中劑量組IgE 表達更低，差異具有統(tǒng)計學意義。研究表明濕疹患者的血清中IgE 濃度高于正常人［16］，原因是濕疹患者皮膚屏障功能的下降使過敏原滲透到皮膚中，刺激表皮的朗格漢斯細胞，從而產(chǎn)生高親和性的IgE抗體，吸附在細胞表面，引起免疫系統(tǒng)的高敏感性，細胞表面的IgE 抗體與抗原結合，最終引發(fā)I 型超敏反應，表現(xiàn)為皮膚瘙癢［17］。

濕疹的致病原因復雜，其發(fā)病機制可能與Ⅳ型變態(tài)反應有關，相關的T淋巴細胞產(chǎn)生一系列淋巴因子，各種炎癥細胞活化因子共同引起血管擴張，血管壁通透性增強從而形成皮膚濕疹樣改變［18］。所以本研究亦選擇IL-2 和IL-5 作為檢測的指標。IL-2 是由Th1細胞活化所產(chǎn)生的免疫調(diào)節(jié)因子，對于免疫細胞增殖和機體免疫功能調(diào)節(jié)有著重要的作用［19］，能促進白介素-2 受體（IL-2R）的表達，并且刺激TNF-α、IFNγ 等其他細胞因子的分泌，引起組織形成以淋巴細胞（主要是T細胞）和單核吞噬細胞系浸潤為主的滲出性炎癥，同時在各種炎癥細胞和活性因子的作用下，血管擴張，管壁通透性增加，最終導致皮膚濕疹樣改變或加重濕疹皮損的炎癥反應［20］。IL-5 是主要由Th2 細胞分泌的細胞因子，能夠清除外來病原體，還可導致血清免疫球蛋白IgE 和嗜酸性粒細胞過度表達，加重Ⅰ型變態(tài)反應［21］。IL-5 能夠與細胞因子特異性亞基受體IL-5Rα結合，后者主要在嗜酸性粒細胞上高表達，嗜酸性粒細胞在兩者的共同作用下分化形成［22］。總之，IL-5 在嗜酸性粒細胞的誘導和增殖中發(fā)揮重要作用，能夠促進炎癥組織和血液中嗜酸性細胞增多，加重炎癥反應。本研究結果顯示模型組小鼠血清IL-2、IL-5表達水平明顯升高，經(jīng)藥物干預后，與龍膽瀉肝丸組比較，文氏馬齒莧湯高劑量治療組IL-2水平明顯降低，文氏馬齒莧中、低劑量組IL-5表達水平顯著降低。說明不同劑量的文氏馬齒莧湯對降低IL-2、IL-5的水平不一，對血清中炎癥細胞因子IL-2、IL-5有較明顯的抑制作用，提示文氏馬齒莧湯能夠調(diào)節(jié)小鼠免疫反應，抑制改善皮損水腫、紅斑和滲出狀態(tài)。

4 結論

綜上所述，文氏馬齒莧湯降低急性濕疹小鼠血清IgE、IL-2、IL-5 表達水平，具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用，從而改善急性濕疹皮損狀況。