LncRNA HEIH和miR-103在非小細胞肺癌組織中的表達及臨床意義

宋玉 劉昱君

(青海大學附屬醫院 1急診內科,青海 西寧 810000;2腫瘤內科)

肺癌是我國病死率較高的惡性腫瘤之一,其中非小細胞肺癌(NSCLC)占80%～85%,5年生存率僅為5%～10%〔1〕。然而,由于缺乏有效的腫瘤標志物,NSCLC的治療效果仍然很差〔2〕。因此,深入探索NSCLC相關標志物,提高NSCLC治療和診斷效率至關重要。

長鏈非編碼RNA(lncRNA)不具備蛋白質編碼功能,長度超過200個核苷酸。研究發現,lncRNA表達異常出現在多種癌癥,在腫瘤調控中具有重要作用。諸多文獻中報道,NSCLC中lncRNA的調控作用,而且不同lncRNA 的作用和機制也是多樣化。Qu等〔3〕提出lncRNA ROR在NSCLC組織中顯著過度表達,這是預后不良的重要因素。此外,研究提出,lncRNA 00680高表達是軟組織肉瘤患者預后不良的獨立危險因素〔4〕。微小RNA(miRNA)是一種內源性單鏈非編碼RNA,長度為20～24個核苷酸。其不僅可以調節細胞的發育和分化,而且是參與多種腫瘤相關過程的潛在腫瘤分子標志物,是關鍵的基因調節因子,在NSCLC進展和預后中發揮重要作用。miR-216a可用于NSCLC的分類和分期,在晚期鱗癌和腺癌組織中表達顯著下調〔5〕。miR-613可增強NSCLC細胞對順鉑敏感性,具有腫瘤抑制作用,可能是NSCLC的治療靶點〔6〕。

研究發現,lncRNA HEIH 在多種癌癥中表達升高,其表達紊亂通過不同潛在機制影響腫瘤細胞增殖、遷移、侵襲和癌細胞耐藥性,而且HEIH的高表達與晚期腫瘤分期、腫瘤大小、總體生存率降低顯著相關〔7〕。miR-103a-3p 通過靶向10號染色體上缺失的磷酸酶和緊張蛋白同源物(PTEN)和蛋白激酶B(AKT)信號通路促進NSCLC進展〔8〕。miR-103在NSCLC患者血清中表達下調,可能對NSCLC預后具有一定預測作用〔9〕。LncRNA HEIH和miR-103在NSCLC患者癌組織中表達異常,但其作用目前尚未闡明。因此,本研究通過對NSCLC患者癌組織及癌旁組織中lncRNA HEIH和miR-103的表達進行分析并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年12月在青海大學附屬醫院進行癌組織切除性治療的NSCLC患者96例,男平均年齡(57.43±11.56)歲;女平均年齡(61.47±12.33)歲。本研究經醫院倫理委員會批準,患者及其家屬簽署知情同意書。納入標準:(1)臨床資料完整,而且樣本保存完好;(2)經病理科確診為原發性非小細胞肺癌;(3)術前未經放療、化療等治療手段。排除標準:(1)合并其他惡性腫瘤;(2)患有影響生存時間的其他疾病;(3)患者病歷資料不全,依從性差,不配合研究者。

1.2指標檢測 收集患者切除的癌組織及癌旁組織樣本,置于液氮罐中凍存24 h后移至-80 ℃保存待用。利用RNA提取試劑盒提取總RNA,再按照逆轉錄試劑盒操作說明制備cDNA,以GAPDH為內參,實時定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)分析lncRNA HEIH和miR-103表達水平,引物序列分別為:LncRNA HEIH正向引物5′-CCGGTTTTCCAGTTCTTGCAC-3′,反向5′-GCCTCACAGGGAAACTTCATGC-3′;miR-103正向引物5′-CCCGCCAAGCCCTTACC-3′,反向5′-GCCGTCGGTGATGCTTTTTTGG-3′;GAPDH正向引物5′-GGAAGGACTCATGACCACAGTCC-3′,反向5′-TCGCTGTIGAAGTCAGAGGAGACC-3′。

1.3統計學方法 采用SPSS25.0軟件進行獨立樣本t檢驗、χ2檢驗,繪制Kaplan-Meier生存曲線,Cox回歸分析預后影響因素。

2 結 果

2.1組織中lncRNA HEIH和miR-103相對表達水平比較 癌組織中lncRNA HEIH相對表達(1.79±0.11)顯著高于癌旁組織(1.05±0.02;t=0.573,P=0.041),癌組織中miR-103表達水平(0.48±0.14)顯著低于癌旁組織(1.03±0.03;t=5.702,P=0.001)。

2.2癌組織lncRNA HEIH和miR-103表達水平與患者臨床病理特征關系 將lncRNA HEIH 相對表達水平中位數(1.75±0.32)作為界限,低于中位數者為lncRNA HEIH低表達,高于中位數者為lncRNA HEIH高表達;miR-103中位表達水平為(0.54±0.08),低于miR-103中位數為低表達,高于miR-103中位數為高表達。根據性別、年齡、是否有吸煙史、有無淋巴結轉移、TMN分期、病理類型、分化程度,lncRNA HEIH和miR-103在癌組織中的表達水平進行比較,結果表明淋巴結轉移、TMN分期與lncRNA-HEIH表達水平和miR-103表達水平差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.3lncRNA HEIH和miR-103表達水平與NSCLC患者預后的關系 隨訪2～24個月,主要為電話隨訪或復診,隨訪總例數96例,其中失訪9例(9.38%)。如圖1所示,經繪制Kaplan-Meier生存曲線結果表明,NSCLC患者癌組織中lncRNA HEIH高表達患者生存率顯著低于lncRNA HEIH低表達患者(χ2=6.048,P=0.034)。miR-103低表達患者生存率顯著低于miR-103高表達患者(χ2=10.623,P=0.000)。提示lncRNA HEIH高表達者和miR-103高表達者遠期生存率更低。

表1 癌組織lncRNA HEIH和miR-103高表達水平與臨床病理特征關系〔n(%)〕

圖1 lncRNA HEIH和miR-103不同表達水平患者總生存率

2.4影響NSCLC患者預后單因素及多因素Cox回歸 單因素Cox回歸分析結果表明,有淋巴結轉移、TMN分期Ⅲ期和Ⅳ期、lncRNA HEIH高表達和miR-103低表達是NSCLC患者預后的危險因素和獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 影響NSCLC患者預后單因素Cox回歸分析

3 討 論

由于NSCLC生長和分裂緩慢,轉移相對較晚,一旦確診患者多已處于中晚期,缺乏早期診斷的生物標志物成為其治療的最大挑戰之一。然而,隨著研究不斷深入,越來越多研究證實lncRNA和miRNA影響NSCLC的發生和進展。

LncRNA在非編碼RNA網絡中發揮重要作用,并參與調節腫瘤相關基因的表達,從而調節多種腫瘤的發展。LncRNA Ⅰ型前膠原前肽(PINT)具有抑制A549和H1299細胞生長作用,并通過調控不同基因抑制NSCLC細胞的遷移和侵襲。另外,研究提出,lncRNA會促進NSCLC的進展。Liu等〔10〕通過海綿吸附miR-433-3p促進NSCLC細胞的侵襲性。LncRNA MBNL1-AS1通過下調miR-301b-3p抑制NSCLC進展〔11〕。本研究結果提示,lncRNA HEIH可能在NSCLC進展中具有促進作用。

除了lncRNA,miRNA也是腫瘤學的研究熱點。諸多研究發現,miRNA通過靶向調控癌基因發揮促進或抑制NSCLC的作用。miR-103通過直接抑制人絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(LATS)2促進肝細胞癌的轉移和EMT進展〔12〕。Li等〔13〕研究提出,miR-103可能通過靶向Krüpple樣轉錄因子(KLF)7促進NSCLC進展,這與本研究結果不同,因為Li等〔13〕研究內容主要從體外細胞試驗著手進行分析,本研究對象為臨床樣本,因此,研究結果存在差異。研究發現,miR-103通過直接靶向程序性細胞死亡因子(PDCD)-10發揮NSCLC腫瘤抑制作用〔14〕,這與本文研究結果一致。因此,推測miR-103可能在不同癌癥進展過程中,具有促癌或抑癌作用。

腫瘤轉移通常發生在癌癥晚期,因此早期診斷對改善腫瘤預后極為重要〔15〕。目前常用癌癥診斷工具包括內鏡超聲、無創成像和基于細針穿刺的細胞學檢查。但每種檢測方法都有其缺陷,超聲對較小腫瘤檢測的靈敏度較低,細針穿刺細胞學檢測和非侵入性成像的應用受到廣泛限制〔16〕。因此,需要進行常規和廉價篩查的無創或微創方法。LncRNA和miRNA很容易從體液和組織中分離提取進行檢測。目前,已發現多種lncRNA 和miRNA可作為腫瘤診斷生物標志物。研究發現,miRNA標記(miR-200c、miR-424、miR-29c和miR-124)可以預測順鉑治療效果,并作為NSCLC患者的預后因素〔17〕。lncRNA HEIH足夠穩定,可以在癌癥患者血清及癌組織中檢測到〔18〕。本研究不足之處在于臨床樣本收集有限,隨訪時間短,且沒有對lncRNA HEIH和miR-103表達對NSCLC進展的分子機制進行深入探究,后期研究仍需進一步擴大樣本,結合基礎研究,為NSCLC診療提供可靠生物靶點。

綜上,在NSCLC癌組織中lncRNA HEIH顯著上調和miR-103顯著下調,且二者均可作為評估NSCLC患者預后的生物標志物。