高危型人乳頭瘤病毒聯合液基薄層細胞學檢測技術在基層女性宮頸病變早期篩查中的應用

曹碧紅，王春暉，吳顯勁

惠州市中心人民醫院檢驗中心，廣東 惠州 516001

宮頸癌是全世界女性中第二大常見惡性腫瘤，嚴重危害了女性的身心健康，不僅給患者及其家庭成員帶來極大的痛苦，也給社會經濟發展及全球健康造成巨大的損失［1］。據2012 年報道［2］，發展中國家有40 萬左右的宮頸癌新增病例，占據了全球發病例數的84%。據WHO 統計，2018 年全球約有56.9 萬新增確診病例，31.1 萬死亡病例［2］。我國發布的全國癌癥統計數據報告顯示，每年新發病例約為13 萬例，相當于全球宮頸癌每年總新發病例的28%。研究人員已確認宮頸癌的主要致病因素是高危型人乳頭瘤病毒（HPV）持續反復感染［3］，使宮頸癌成為目前人類所知癌癥中唯一病因明確的癌癥，因此，早期篩查與防治顯得尤為重要。目前對宮頸病變早期篩查普遍采取細胞學檢測或HPV篩查、陰道鏡檢查及宮頸組織活檢三階段診斷流程［4］。基層醫療機構，特別是經濟落后的地區，人群宮頸病變早期篩查條件有限，全流程診斷難以實現，而且采用單一的篩查方法存在弊端，無法保證早期篩查的準確性。為貫徹落實國家“兩癌”檢查政策，更加有效地進行宮頸癌早期篩查和干預，本研究探討高危型HPV聯合液基薄層細胞檢測技術（TCT）在宮頸病變早期篩查中的應用價值，旨在為基層醫院開展宮頸癌的預防和早期篩查探索科學、合理、經濟性的篩查方案，現將結果報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2021年1—6月惠州市博羅縣兩個鄉鎮5 160名女性宮頸脫落細胞樣本，年齡范圍35～64 歲，中位年齡47歲。研究對象沒有臨床懷孕的可疑癥狀，避開月經期，由惠州市中心人民醫院婦科醫生采用專用的宮頸細胞保存管，留取足量的宮頸脫落細胞樣本，統一保存。所有樣本送至惠州市中心人民醫院博羅分院檢驗科分子生物實驗室進行高危型HPV-DNA（PCR-熒光探針法）檢測，病理科進行TCT。

1.2 試劑與儀器

高危型HPV-DNA 核酸提取試劑盒（磁珠法）和核酸檢測試劑盒由上海科華生物工程股份有限公司提供，可定性檢測女性宮頸脫落細胞樣本中15 種高危型HPV-DNA 核酸，其中可分型檢測2 種極度高危型HPV16、HPV18 型，不可分型檢測其他13 種高危亞型包括（HPV31、HPV33、HPV35、 HPV39、 HPV45、 HPV51、 HPV52、 HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68）。核酸提取設備為上海科華的DP-1000自動核酸提取儀，核酸擴增設備為美國的ABI 7500熒光定量PCR儀。TCT細胞樣本處理采用的液基細胞和微生物處理，保存試劑由廣州安必平醫藥科技股份有限公司提供，設備為廣州安必平制片染色一體機。

1.3 方法

1.3.1 HPV-DNA 檢測 按配套儀器的操作說明書進行操作。按照實驗數量，將一定量的去抑制劑、洗滌液A、洗滌液B和洗脫液分別分裝到編號為1、2、3、4號深孔板相應孔中。樣本充分振蕩混勻后，吸取200 μL加入1號深孔板相應孔內，再加入400 μL 裂解工作液。開啟核酸提取儀，將深孔板放置于相應位置，插上磁套，按儀器提示編輯核酸提取程序并運行，提取好的模板立即用于PCR擴增檢測。若不立即使用，將模板置于-20 ℃冰箱暫存備用。檢測到1 種HPV 亞型或以上者判為陽性，未檢測到者判為陰性。

1.3.2 細胞學檢查 應用TCT 進行女性宮頸脫落細胞形態學檢查。標本混勻后轉移至透明離心管，經離心后棄去上清液，震蕩混勻后加入3～4 mL 細胞保存液，離心制片，巴氏染色，封片，閱片。宮頸細胞學TBS分類［5］診斷結果為：（1）未見上皮內病變細胞和惡性細胞（NILM）；（2）不典型鱗狀上皮細胞（ASC），包括未明確意義的ASC（ASC-US）及不排除高度病變的ASC（ASC-H）；（3）低度鱗狀上皮內病變（LSIL）；（4）高度鱗狀上皮內病變（HSIL）；（5）鱗狀細胞癌（SCC）等。NILM 者為陰性，ASC或以上病變為細胞學檢查陽性，統一歸為癌變組。

1.3.3 陰道鏡組織病理檢查 所有HPV或TCT陽性女性均行常規陰道鏡檢查及宮頸組織病理活檢。按照病理學的診斷標準［6］將宮頸病變分為：（1）正常或炎癥；（2）宮頸上皮內瘤變Ⅰ級（CIN Ⅰ）；（3） 宮頸上皮內瘤變Ⅱ級（CIN Ⅱ）；（4）宮頸上皮內瘤變Ⅲ級（CIN Ⅲ）；（5）宮頸癌（鱗癌、腺癌）。正常或炎癥者判為陰性，定期隨訪；其余診斷均判為陽性，需要治療。

1.4 統計學方法

采用SPSS 25.0 軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t 檢驗。計數資料以例數和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV與TCT檢測結果

5 160 名研究對象中，高危型HPV 篩查陽性人數375例（陽性率為7.27%），其中HPV16 約占17.07%，HPV18約占10.13%，其他13種高危型HPV占72.8%。TCT篩查陽性人數230 例（陽性率為4.46%），其中ASC 約占61.74%，LSIL 約占30.43%，HSIL 約占6.52%，SCC 約占1.31%。HPV 和TCT 聯合篩查檢出陽性人數424 例（陽性率為8.22%），高于HPV或TCT單獨篩查陽性率。

2.2 HPV、TCT檢測的診斷效能

對HPV 與TCT 聯合篩查陽性的424 例女性進行陰道鏡組織病理檢查。375 例HPV 陽性經組織病理檢查180 例為陽性，陽性結果預測值為48.00%，陰性預測值為91.84%。其中HPV16 陽性預測值為79.69%，HPV18 陽性預測值為73.68%，均高于其他13 種高危型陽性預測值37.00%；49 例HPV 陰性而TCT 陽性經病理檢查4 例為陽性。TCT 檢查中細胞學陽性預測值、陰性預測值分別為79.13%、98.97%。TCT 陽性指標隨著細胞病變程度加深，陽性預測值也逐步增加，HSIL 的陽性預測值為93.33%，SCC 的陽性預測值為100.00%。HPV 與TCT 聯合篩查檢出雙陽性的陽性預測值為98.34%，均明顯高于HPV、TCT單一篩查的陽性預測值，見表1。

表1 HPV、TCT與組織病理結果

3 討論

近年來，全球宮頸癌的發病率呈逐步上升趨勢，發病年齡越來越年輕化，對于女性的身體健康產生了嚴重威脅。在我國，雖然宮頸癌的病死率有所下降，但各級醫院對于宮頸癌患者的收治比例卻呈升高趨勢［7］。依據患者的臨床癥狀及相關檢查指標及時檢查確診，是保證宮頸癌與癌前病變及時診斷和有效治療的重要基礎［8-9］。然而宮頸癌早期病變的臨床癥狀并不十分明顯，患者常無不適感，難以引起自身足夠的重視，特別是在較偏遠地區或基層鄉鎮的女性群眾。由于受教育程度低，缺乏宮頸相關疾病的預防知識，容易忽視自身的健康狀況，導致宮頸輕微病變最終發展為宮頸癌的可能性增大［10］。故早篩查、早診斷并及時治療對降低人群宮頸癌的發病率和死亡率有很大的臨床價值和社會經濟效益。目前，宮頸癌診斷的金標準仍是病理學檢查，但存在創傷性較大、操作復雜、報告時間長的弊端，而且基層醫療衛生機構技術條件非常有限，無法應用于人群大規模篩查。為此，本研究借助國家“兩癌”篩查政策對博羅縣鄉鎮婦女群眾進行HPV 核酸檢測和TCT檢查，以了解該地區婦女群眾HPV 感染和宮頸病變情況，探討HPV和TCT在基層女性宮頸病變早期篩查和預防中的應用價值。研究結果顯示，該地區鄉鎮婦女群眾高危型HPV 篩查陽性率為7.27%，低于世界水平（10.40%）［11］和醫院檢查人群感染率（14.40%、16.94%）［9，12］；TCT 篩查陽性率為4.46%，低于粵東地區水平（6.04%）［12］。這可能與研究對象分布不同有關，本文研究對象為鄉鎮普通女性人群，不包括醫院就診人群數據。高危型HPV16和HPV18占比達到27.2%，兩者的陽性預測值遠高于其他13 種高危型陽性預測值，提示HPV16、HPV18型與宮頸病變密切相關，在人群篩查中應該重點關注這種亞型陽性的感染人群，加強防范和預防接種，有臨床癥狀者及早就醫治療。TCT 篩查的陽性預測值和陰性預測值分別為79.13%、98.97%，且隨著宮頸細胞病變程度的加深，陽性預測值逐步增加，提示TCT 結果異常時，要警惕宮頸病變惡化，要早診斷早治療。

有研究［13］發現，HPV 感染具有一過性，許多感染者HPV 可于1～2 年自然消退，致使HPV 檢測的特異性降低；而TCT 檢測會受到病理形態學診斷技術的影響，導致靈敏度偏低而假陰性率高。本文分析HPV聯合TCT檢測結果發現，HPV 與TCT聯合篩查檢出的陽性率與陽性預測值均高于單一的HPV 或TCT 檢測。這與相關研究［14］結論相似，表明HPV聯合TCT檢測在宮頸病變早期篩查中優于單一的HPV 或TCT篩查，能顯著提高宮頸病變早期篩查的靈敏度和特異性。因此建議采用HPV聯合TCT檢測方法作為基層女性人群宮頸病變早期篩查的重要手段。

綜上所述，HPV 聯合TCT檢測方法的診斷效能優于單一的HPV或TCT檢測，能夠提高宮頸病變早期篩查靈敏性和特異性，對基層健康人群的宮頸病變早期篩查具有重要意義。HPV疫苗已被批準上市，主要用于預防HPV感染引起的宮頸癌等癌前病變或不典型病變。但接種成本較高、接種后效果評價和全面推廣還需時間。因此，要因地制宜，強化健康教育和早期篩查價值，加強針對高危型的HPV疫苗的接種推廣，使更多的女性遠離HPV的感染，降低人群宮頸癌發病率。