外周血微小RNA表達與甲狀腺激素水平的關聯及對甲狀腺功能異常的預測效能分析

朱林青

南陽醫學高等專科學校附屬中醫院內分泌科，南陽 473000

甲狀腺功能亢進（甲亢）、甲狀腺功能減退（甲減）均為臨床十分常見的內分泌代謝異常疾病；前者是因甲狀腺激素分泌過多導致，后者是因甲狀腺激素分泌不足導致。甲亢患者大多表現為情緒易激動、煩躁，其臨床癥狀以食欲亢進、體質量下降及心動過速等為主，而甲減患者大多表現為畏寒、乏力或心力衰竭［1-2］。不同類型患者的癥狀表現具有一定相似性，但因其發病原因不同，臨床所采取的藥物、非藥物治療方案均存在一定差異［3］。近年隨著人們生活方式、飲食習慣的改變，甲狀腺功能異常的患病率在逐步上升，早期明確患者的發病原因及發病類型對指導臨床治療具有重要意義［4］。此前臨床主要將甲狀腺激素檢測作為鑒別甲狀腺疾病類型的重要手段，但實踐表明，除甲亢、甲減患者外，女性妊娠期間以及伴垂體疾病者也可存在甲狀腺激素水平異常，單純依賴甲狀腺激素水平檢測難以實現對甲狀腺疾病類型的有效鑒別［5］。外周血微小RNA（miRNA）為一種內源性小分子非編碼RNA，可通過調節基因表達來參與多種疾病的發生及病情發展［6］。為實現對甲狀腺功能異常疾病的有效鑒別，本研究主要探討miRNA 表達與甲狀腺激素水平的關聯及對甲狀腺功能異常的預測效能。

資料與方法

1.一般資料

選取2021 年1 月至2022 年12 月于南陽醫學高等專科學校附屬中醫院接受治療的126 例甲狀腺功能異常患者作為研究對象，根據甲狀腺激素水平不同將患者分為甲亢組（60 例）、甲減組（66 例）。甲亢組中男35 例，女25 例，年齡42～68（55.25±5.61）歲，體質量指數（body mass index，BMI）22～26（24.35±5.16）kg/m2，病程3～10（6.52±1.33）個月。甲減組中男36 例，女30 例，年齡40～70（56.16±5.28）歲，BMI 23～25（24.12±5.31）kg/m2，病程4～9（6.13±1.82）個月。兩組患者一般資料比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）。

本研究經南陽醫學高等專科學校附屬中醫院醫學倫理委員會批準（P2022112310）。

納入標準：⑴甲亢組患者均符合甲亢診斷要點，甲減組均符合甲減診斷要點［7-8］；⑵經實驗室檢查均確認存在甲狀腺激素水平異常；⑶參與本研究前1 個月內未接受過其他藥物干預；⑷均已知悉此次研究目的及內容，同意獲取既往臨床資料。

排除標準：⑴有其他內分泌功能異常疾病者；⑵有感染性疾病或免疫功能異常者；⑶惡性腫瘤者；⑷臨床資料缺失者。

2.方法

⑴研究方法：比較兩組患者甲狀腺激素水平以及外周血miRNA-192、miRNA-21 相對表達量間的差異，Spearman相關性分析miRNA 相對表達量與各甲狀腺激素水平的相關性；通過繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）驗證miRNA 表達對甲狀腺功能異常的預測效能。⑵甲狀腺激素檢測：取外周靜脈血為檢測樣本，經抗凝處理后將血液樣本送入離心機，3 000 r/min 離心（半徑0.5 cm）分離血清后將血清樣本送入美國BEACKMANCOULTER 公司提供的AU5800 型全自動生化分析儀中檢測甲狀腺激素水平，檢測方法為酶聯免疫吸附試驗。⑶外周血miRNA 檢測：同樣取外周靜脈血為檢測樣本，經抗凝、離心后在-80 ℃下保存備用，離心參數同上；經Trizol 法提取血清樣本中總RNA，并取5 μl 總RNA 加入至濃度為2%的瓊脂糖凝膠中電泳檢測RNA 純度及完整度；將RNA 逆轉錄為cDNA 后，以U6 作為內參基因檢測血清各miRNA 表達情況，通過實時熒光定量分析法在95 ℃環境下預變性10 min 后，參考引物序列計算各miRNA 的相對表達量。

3.觀察指標

⑴檢測并對比兩組患者的甲狀腺激素水平及miRNA相對表達量。甲狀腺激素檢測指標包括促甲狀腺激素（thyroid-stimulating hormone，TSH）、游離甲狀 腺激素3、FT4、總三碘甲狀腺原氨酸（total thyroid triiodothyronine 3，TT3）、總甲狀腺素（total thyroxine，TT4）。TSH 參考值為2～10 mU/L，FT3 參考值為3～9 pmol/L，FT4 參考值為12～22 pmol/L，TT3 參考值為1.54～3.08 nmol/L，TT4 參考值為65～155 nmol/L；miRNA 包 括miRNA-192、miRNA-21。⑵相關性分析：使用Spearman 相關性分析不同組患者miRNA 相對表達量與甲狀腺激素水平的相關性，當0＜r＜1、P＜0.05時認為二者正相關，當-1＜r＜0、P＜0.05時認為二者負相關［9］。⑶預測效能評估：通過繪制ROC 分析各miRNA 與各甲狀腺激素水平的相關性，當曲線下面積（area under the curve，AUC）＞0.85時認為二者顯著相關［10］。

4.統計學方法

數據均采用軟件SPSS 22.0 處理，計數資料以例（%）表示，采用χ2檢驗，計量資料符合正態分布，以（±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

1.兩組患者甲狀腺激素比較

甲亢組TSH 低于甲減組，FT3、FT4、TT3、TT4 均高于甲減組，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表1。

表1 兩組甲狀腺功能異常患者的甲狀腺激素水平比較（± s）

表1 兩組甲狀腺功能異常患者的甲狀腺激素水平比較（± s）

注：甲亢為甲狀腺功能亢進，甲減為甲狀腺功能減退；TSH 為促甲狀腺激素，FT3 為游離甲狀腺激素3，FT4 為游離甲狀腺激素4，TT3 為總三碘甲狀腺原氨酸，TT4為總甲狀腺素

2.兩組患者miRNA相對表達量比較

甲亢組miRNA-192 相對表達量低于甲減組，miRNA-21 相對表達量高于甲減組，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表2。

表2 兩組甲狀腺功能異常患者miRNA相對表達量比較（± s）

表2 兩組甲狀腺功能異常患者miRNA相對表達量比較（± s）

注：甲亢為甲狀腺功能亢進，甲減為甲狀腺功能減退。miRNA為微小RNA

3.miRNA與甲狀腺激素的相關性分析

Spearman 相關性 分析顯 示，miRNA-192 與TSH 正 相關，與FT3、FT4、TT3、TT4 負相關；miRNA-21 與TSH 負相關，與FT3、FT4、TT3、TT4正相關。見表3。

表3 miRNA與甲狀腺激素的相關性分析（126例）

4.miRNA對甲狀腺功能異常的預測效能分析

經ROC 驗證，miRNA-192 相對表達會隨TSH 降低以及FT3、FT4、TT3、TT4 升高而下降；miRNA-21 相對表達會隨TSH 降低以及FT3、FT4、TT3、TT4 升高而上升。見表4、表5、圖1、圖2。

圖1 miRNA-192 與甲狀腺激素的相關性受試者工作特征曲線（126例）

圖2 miRNA-21 與甲狀腺激素的相關性受試者工作特征曲線（126例）

表4 miRNA-192對甲狀腺功能異常的預測效能（126例）

表5 miRNA-21對甲狀腺功能異常的預測效能（126例）

討論

甲狀腺功能異常為一種十分常見的內分泌疾病，若甲狀腺自身產生過量激素則會導致機體代謝活動加快，進而引發以神經、循環及消化功能代謝興奮性提升為主要表現的甲亢［10］。針對此類患者，臨床多會應用β 受體阻滯劑或抗甲狀腺激素藥物進行治療［11］。若甲狀腺腺體分泌作用減弱，則可能引發以全身畏寒、乏力、心力衰竭為典型癥狀的甲減［12］。針對甲減患者，臨床多會予以口服左甲狀腺素鈉，以上調甲狀腺激素水平，改善患者相關癥狀、體征［13］。不同類型甲狀腺功能異常患者的部分癥狀相似，但其發病原因及治療方法卻有顯著差異，早期明確患者病情是指導臨床治療的重要基礎。甲狀腺激素檢測為目前鑒別甲亢、甲減的重要方法。甲亢患者的TSH 呈低水平表達，FT3、FT4、TT3、TT4 呈高水平表達；而甲減患者的TSH 呈高水平表達，FT3、FT4、TT3、TT4卻呈低水平表達［14］。

本研究中，甲亢組患者TSH 低于甲減組，FT3、FT4、TT3、TT4 均高于甲減組（均P＜0.05）。有研究指出，若患者受檢前服用相關藥物或長時間處于饑餓、應激狀態時，均可能導致實驗室檢查結果出現偏差，檢測樣本未合理保存也是影響檢測結果的重要原因［15］。若女性正處于妊娠階段，或自身合并垂體疾病時，其血清中甲狀腺激素水平也會存在一定變化，僅依賴甲狀腺激素指標對甲狀腺功能異常疾病進行診斷、鑒別或存在一定漏診、誤診風險［16］。miRNA是多個核苷酸組成的小分子RNA，可通過與靶基因相結合而促使基因降解并阻斷基因翻譯，可參與調控機體代謝、組織細胞分化等多種生理過程，通過檢測miRNA 相對表達量能實現對多種疾病的有效診斷及病情評估［17］。本研究中，甲亢組miRNA-192 相對表達量低于甲減組，miRNA-21 相對表達量高于甲減組，提示在不同類型甲狀腺功能異常患者中，其血清各miRNA相對表達量均存在一定差異；Spearman相關性分析顯示，miRNA-192 與TSH 正相關，與FT3、FT4、TT3、TT4 負相關；miRNA-21 與TSH 負相關，與FT3、FT4、TT3、TT4 正相關。miRNA 可通過與mRNA 進行特異性結合而調控組織細胞中的RNA 基因表達，可通過影響組織蛋白翻譯過程而影響疾病的發生或進展。miRNA-192 與miRNA-21 均是反映甲狀腺細胞分化功能的重要指標。與血清甲狀腺激素相比，miRNA的保守性更高，在血清中的表達更加穩定且更易被檢出，各miRNA 相對表達量對于甲狀腺功能異常疾病或具有更高診斷效能［18-19］。本研究經ROC驗證后結果顯示，miRNA-192 相對表達會隨TSH 降低以及FT3、FT4、TT3、TT4 升高而下降；miRNA-21 相對表達會隨TSH降低以及FT3、FT4、TT3、TT4升高而上升。丁莉等［20］研究結果顯示，miRNA-21會隨TSH 水平降低，FT3、FT4、TT3、TT4 水平升高而升高，miRNA-192 表達情況則與miRNA-21 相反；該學者認為，miRNA-21 在甲亢患者血清中普遍呈高表達，而miRNA-192 呈低表達，與本研究結論一致。

綜上所述，miRNA 相對表達量與甲狀腺激素水平密切相關，對不同類型甲狀腺功能異常疾病均有較高預測效能。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突