謝氏四妙宣痹顆粒質量標準研究

劉雅琴，李睿，石倩，趙琪，賴先榮，李姝

謝氏四妙宣痹顆粒是由黃柏、野菊花、紫花地丁、木瓜、川牛膝、牡丹皮等十三味藥材制備成的復方顆粒，是眉山市中醫醫院治療風濕痹癥的經驗方。黃柏作為君藥，具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡的功效[1]。野菊花作為臣藥，具有清熱解毒，瀉火平肝的功效[1]。十三味藥材通過君臣作使，相煎制成的顆粒具有祛風清熱，利水消腫，通絡止痛的功效，臨床用于治療濕熱、關節紅腫的痹癥，效果顯著，既有傳統中藥易于吸收、作用快的特點，又方便攜帶，不易變質[2]。為保證制劑質量及臨床應用安全有效、我們對顆粒劑中的藥材進行定性鑒定，為顆粒的質量標準提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

DZKW-S-4暗箱式紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠），WK-60搖擺式制粒機(山東省青州市精誠醫藥制備有限公司），FA1004分析電子天平（上海良平儀器儀表有限公司），DHG-9624A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海將任實驗設備有限公司），BSA124S萬分之一電子天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司），UPH-I-10T型優普純水制造系統（成都優普超純科技有限公司），DZKW-S-4型電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫療儀器廠)，SHZ-DW予華牌循環水真空泵、RE-2000A旋轉蒸發器均購自鞏義市英峪高科儀器有限責任公司等。

1.2 試藥

黃柏（批號210901)、野菊花（批號210801）、紫花地丁（批號210701）、木瓜（批號210801)、川牛膝（批號210501）、牡丹皮（批號211201）均購于洪雅縣瓦屋山藥業有限公司；川牛膝對照藥材（批號121065-201707）、野菊花對照藥材（批號120995-201707）黃柏對照藥材（批號121510-201807）紫花地丁對照藥材（批號121429-202106）木瓜對照藥材（批號121003-201206）均購于中國食品藥品檢定研究院；小檗堿對照品（批號DSTDY002801)、蒙花苷對照品（批號DSTDM004301）均購自成都德思特生物技術有限公司，各對照品質量分數均≥98%，符合要求；秦皮乙素對照品（批號PS000763)、丹皮酚對照品（批號PS00281)、杯莧甾酮照品（批號PS010993)、熊果酸對照品（批號PS012671）均購自成都普思生物科技股份有限公司，各對照品質量分數均≥98%，符合要求；甲醇、醋酸、乙酸乙酯、丁酮、甲酸、三氯甲烷、氨水、甲苯、環己烷、硫酸、丙酮均為分析純，購于成都市科隆化學品有限公司。

2 方法和結果

2.1 黃柏的薄層鑒別

2.1.1 專屬性考察

（1）供試品溶液的制備 稱取顆粒劑粉末1 g，加1%醋酸甲醇溶液40 mL，于60 ℃超聲處理20 min，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。

（2）對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小柏堿對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

（3）對照藥材溶液的制備 稱取黃柏對照藥材0.1 g，加1%醋酸甲醇20 mL，按照“2.1.1”項下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。

（4）陰性對照品溶液的制備 稱取除黃柏外的處方量藥材按照顆粒劑制備方法制成陰性顆粒，粉碎過篩，按照“2.1.1”項下供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

（5）鑒別方法 照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述三種溶液各3-5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10:6:1:1）的下層溶液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視[3]。

（6）結果 供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，結果如圖1-A所示。

圖1 薄層色譜圖Fig1 Chromatogram of TLC

2.1.2 耐用性考察 考察了三青島海浪硅膠干燥劑有限公司、南京全隆生物技術有限公司和青島海灣精細化工有限公司個不同廠家的薄層G板，0 ℃、15 ℃和35 ℃三個不同的溫度，以及20%和75%兩個不同的濕度，樣品與對照品和對照藥材在相應的位置出現顏色相同的斑點，陰性無干擾。

2.2 野菊花薄層鑒別

2.2.1 專屬性考察

（1）供試品溶液的制備 稱取顆粒劑粉末1 g，加甲醇15 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，取濾液作為供試品溶液。

（2）對照品溶液的制備 精密稱取蒙花苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。

（3）對照藥材溶液的制備 稱取野菊花對照藥材0.3 g，按照“2.2.1”項下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。

（4）陰性對照品溶液的制備 稱取除野菊花外的處方量藥材按照顆粒劑制備方法制成陰性顆粒，粉碎過篩，按照“2.2.1”項下供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

（5）鑒別方法照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述三種溶液各3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，展開劑用乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水（15:15:6:4:1），展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，熱風吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視[4]。

（6）結果供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，結果如圖1-B所示。

2.2.2 耐用性考察 考察了三青島海浪硅膠干燥劑有限公司、南京全隆生物技術有限公司和青島海灣精細化工有限公司個不同廠家的薄層G板，0℃、15℃和35℃三個不同的溫度，以及20%和75%兩個不同的濕度，樣品與對照品和對照藥材在相應的位置出現顏色相同的斑點，陰性無干擾。

2.3 紫花地丁薄層鑒別

2.3.1 專屬性考察

（1）供試品溶液的制備 稱取顆粒劑粉末2 g，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加熱水10 ml，攪拌使溶解，濾過，濾液回收溶劑至干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。

（2）對照品溶液的制備 精密稱取秦皮乙素對照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液作為對照品溶液。

（3）對照藥材溶液的制備 稱取紫花地丁對照藥材2 g，按照“2.3.1”項下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。

（4）陰性對照品溶液的制備 稱取除紫花地丁外的處方量藥材按照顆粒劑制備方法制成陰性顆粒，粉碎過篩，按照“2.3.1”項下供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

（5）鑒別方法照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取供試品溶液5-10 μL、對照藥材溶液5 μL、對照品溶液5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:3:1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視[1]。

（6）結果供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，結果如圖1-C所示。

2.3.2 耐用性考察 考察了三青島海浪硅膠干燥劑有限公司、南京全隆生物技術有限公司和青島海灣精細化工有限公司個不同廠家的薄層G板，0℃、15℃和35℃三個不同的溫度，以及20%和75%兩個不同的濕度，樣品與對照品和對照藥材在相應的位置出現顏色相同的斑點，陰性無干擾。

2.4 木瓜薄層鑒別

2.4.1 專屬性考察

（1）供試品溶液的制備 取顆粒劑3 g，加三氯甲烷20 ml，超聲處理1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇-三氯甲烷（1:3）混合溶液2 ml使溶解，作為供試品溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點和熒光斑點；

（2）對照品溶液的制備 精密稱取熊果酸對照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

（3）對照藥材溶液的制備 稱取木瓜對照藥材1 g，按照“2.4.1”項下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。

（4）陰性對照品溶液的制備 稱取除木瓜外的處方量藥材按照顆粒劑制備方法制成陰性顆粒，粉碎過篩，按照“2.4.1”項下供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

（5）鑒別方法 照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述三種溶液各1-2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸（6:0.5:1:0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視[1]。

（6）結果 在與對照品色譜相應的位置上，顯相同橙黃色熒光斑點，結果如圖2-D所示。

圖2 薄層色譜圖Fig2 Chromatogram of HPLC

2.4.2 耐用性考察 考察了三青島海浪硅膠干燥劑有限公司、南京全隆生物技術有限公司和青島海灣精細化工有限公司個不同廠家的薄層G板，0 ℃、15 ℃和35 ℃三個不同的溫度，以及20%和75%兩個不同的濕度，樣品與對照品和對照藥材在相應的位置出現顏色相同的斑點，陰性無干擾。

2.5 川牛膝薄層鑒別

2.5.1 專屬性考察

（1）供試品溶液的制備 稱取本品粉末2 g，加甲醇50 ml，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，然后加30 mL熱水制成供試品溶液。

（2）對照品溶液的制備 稱取杯莧甾酮對照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

（3）對照藥材溶液的制備 稱取川牛膝對照藥材2 g，按照“2.5.1”項下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。

（4）陰性對照品溶液的制備 稱取除川牛膝皮外的處方量藥材按照顆粒劑制備方法制成陰性顆粒，粉碎過篩，按照“2.5.1”項下供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

（5）鑒別方法 照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取供試品溶液5-10 μL、對照藥材溶液和對照品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（7:5:0.5:0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視[5]。

（6）結果 供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，結果如圖2-E所示。

2.5.2 耐用性考察 考察了三青島海浪硅膠干燥劑有限公司、南京全隆生物技術有限公司和青島海灣精細化工有限公司個不同廠家的薄層G板，0 ℃、15 ℃和35 ℃三個不同的溫度，以及20%和75%兩個不同的濕度，樣品與對照品和對照藥材在相應的位置出現顏色相同的斑點，陰性無干擾。

2.6 牡丹皮薄層鑒別

2.6.1 專屬性考察

（1）供試品溶液的制備 稱取顆粒劑粉末3 g，加乙醚10 mL，密塞，振搖20 min，濾過，濾液揮干，殘渣加丙酮2 ml使溶解，作為供試品溶液。

（2）對照品溶液的制備 精密稱取丹皮酚對照品，加丙酮制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。

（3）陰性對照品溶液的制備 稱取除牡丹皮外的處方量藥材按照顆粒劑制備方法制成陰性顆粒，粉碎過篩，按照“2.6.1”項下供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

（4）鑒別方法 照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（4:1:0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸乙醇溶液（1→10），在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。

（5）結果 供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，結果如圖2-F所示。

2.6.2 耐用性考察 考察了三青島海浪硅膠干燥劑有限公司、南京全隆生物技術有限公司和青島海灣精細化工有限公司個不同廠家的薄層G板，0 ℃、15 ℃和35 ℃三個不同的溫度，以及20%和75%兩個不同的濕度，樣品與對照品在相應的位置出現顏色相同的斑點，陰性無干擾。

3 討論

由于顆粒劑制備相對繁瑣，煎煮后復方成分復雜，對其質量影響難以預測，為了有效控制和保證其質量，因此需要選擇合理的簡便的質量評價方法[6]，結合藥典及相關文獻，通過實驗一系列考察，最終確定了顆粒中黃柏、野菊花、紫花地丁、木瓜、川牛膝和牡丹皮七味藥材的定性鑒定方法，考察了不同廠家及溫濕度，其形成的斑點清晰，重現性好，特征性強，結果準確可靠，操作方法簡單易行，為本顆粒劑的定性鑒別提供科學依據[7]。