基于IC與UPLC的石膏-知母組合物指紋圖譜及多指標成分測定△

田甜，徐杰，李美洲，周穎欣，劉權震，鄧成程，劉燎原，沈斌斌

廣東一方制藥有限公司/廣東省中藥配方顆粒企業重點實驗室，廣東 佛山 528244

石膏性大寒，味甘、辛，生用除煩止渴、清熱瀉火力強；知母性寒，味苦、甘，生用滋陰潤燥、清熱瀉火力強[1]。石膏-知母藥對配伍最早源于《傷寒論》的白虎湯，臨床上常相須為用，兩者配伍可增強清熱瀉火、除煩、生津止渴的功效，是治療傷寒陽明病熱癥、氣分熱盛證的常用藥對[2-5]。現代藥理學研究表明，石膏和知母配伍能增強解熱、清胃熱的作用[6-7]。石膏主要成分為含水硫酸鈣（CaSO4·2H2O），也含有Al2O3、CaO、MgO、SiO2、Fe2O3、SO3、K2O等無機成分[8]。知母主要含有皂苷、雙苯吡酮、生物堿、氨基酸、揮發油等類成分[9]。有研究報道，石膏與知母配伍能顯著增加Ca2+濃度，促進新芒果苷的溶出[10-11]。對中藥方劑數據庫[12]所含方劑進行檢索，發現有182個處方中含有石膏-知母藥對，如白虎湯、辛夷清肺飲、化斑湯、玉女煎、清瘟敗毒飲等。藥對作為最簡單的中藥配伍組合，是連接單味藥與經典復方的重要橋梁，在臨床療效上發揮著巨大作用。在現代制劑過程中，通過石膏、知母共煎提取，不僅可以減輕知母噴霧干燥過程中的粘機問題，也可使石膏中的Ca2+、Mg2+、Na+、K+等離子吸附在知母提取物上并轉移至成品中，減少物料流轉過程中固形物的損耗，保證臨床用藥劑量的準確[13-16]。為探究石膏-知母藥對中無機元素及有機化合物的組成情況，本研究采用離子色譜法（IC）、超高效液相色譜-紫外檢測法（UPLC-UV）、超高效液相色譜-蒸發光散射檢測法（UPLC-ELSD）對石膏-知母組合物進行定性和定量分析，以期為石膏-知母藥對的質量評價和物質基礎研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Dionex ICS-6000型離子色譜儀[賽默飛世爾（中國）科技有限公司]；H-Class 型超高液相色譜儀、Arc 型超高液相色譜儀（美國沃特世公司）；Alltech 6000型蒸發光散射檢測器[奧泰科技（中國）有限公司]；ME203E型萬分之一分析天平、XP26型百萬分之一天平（美國Mettler-Toledo 公司）；Milli-Q 型超純水系統（Merck股份有限公司）。

1.2 試藥

對照品芒果苷（批號：111607-201704，純度：98.1%）、知母皂苷BⅡ（批號：111839-202107，純度：95.4%），知母對照藥材（批號：121070-201806）均購自中國食品藥品檢定研究院；對照品新芒果苷（批號：DST201128-017，純度：99.01%，成都樂美天醫藥科技有限公司）；對照品異芒果苷（批號：CFS202002，純度：98%，武漢天植生物技術有限公司）；硫酸鹽（批號：BWZ6783-2016）、鈣單元素溶液標準物質[批號：GBW（E）080118]、鈉單元素溶液標準物質[批號：GBW（E）080526]、鉀單元素溶液標準物質[批號：GBW（E）083296]、鎂單元素溶液標準物質[批號：GBW（E）083298]均購自北京北方偉業計量技術研究院，質量濃度均為1000 μg·mL-1；色譜純甲酸（天津市科密歐化學試劑有限公司）；色譜純甲醇、乙腈（Merck 股份有限公司）；優級純甲烷磺酸、無水碳酸鈉、碳酸氫鈉[阿拉丁試劑（上海）有限公司]；水為自制超純水。

12 批石膏、知母藥材均經廣東一方制藥有限公司孫冬梅主任中藥師鑒定，分別為硫酸鹽類礦物石膏族石膏、百合科植物知母Anemarrhena asphodeloidesBge.的干燥根莖，藥材信息見表1。

表1 石膏、知母樣品信息

2 方法與結果

2.1 樣品制備

2.1.1 組合物制備 取石膏、知母藥材，分別按照《中華人民共和國藥典》2020 年版[1]石膏、知母項下炮制方法炮制，得到石膏飲片、知母飲片。分別稱取石膏飲片、知母飲片（質量比為1∶1）適量，加水煎煮2 次（石膏先煎），濾過，合并2 次煎液，減壓濃縮，干燥，得石膏-知母組合物（編號S1～S12）。

2.1.2 單煎混合樣品 取石膏飲片適量，加水煎煮2 次，濾過，合并煎液，減壓濃縮，干燥，得石膏提取物。取知母飲片適量，加水煎煮2 次，濾過，合并煎液，減壓濃縮，干燥，得知母提取物。按公式（1）計算石膏、知母出膏率。根據出膏率情況，按石膏-知母（1∶1）稱取石膏、知母單煎提取物適量，混勻，得石膏-知母藥對單煎混合樣品。

2.2 指紋圖譜

2.2.1 IC指紋圖譜

2.2.1.1 色譜條件 IonPac CG12A保護柱（50 mm×4 mm，8 μm）、IonPac CS12A 分析柱（250 mm×4 mm，8 μm）；CSRS 4 mm 抑制器，抑制電流為47 mA；淋洗液為20 mmol·L-1甲烷磺酸水溶液，流速為0.8 mL·min-1；電導檢測器，檢測池溫度為35 ℃，檢測器靈敏度為5 μs·cm-1；柱溫為30 ℃；進樣量為5 μL。

2.2.1.2 對照品溶液的制備 分別取鈉、鉀、鎂、鈣單元素溶液標準物質0.15、1.20、0.15、0.30 mg，精密稱定，加入純水30 mL，制成Na+、K+、Mg2+、Ca2+質量濃度為分別5、40、5、10 μg·mL-1的混合對照品溶液，即得。

2.2.1.3 供試品溶液的制備 取石膏-知母組合物，研細，精密稱取約0.15 g，置于塑料量瓶中，精密量取0.54%甲烷磺酸水溶液30 mL 加入量瓶中，用渦旋振蕩儀充分振搖使溶解，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.1.4 方法學考察 精密度試驗：分別精密吸取2.2.1.3 項下S7 供試品溶液，按2.2.1.1 項下色譜條件連續進行6 次樣品測定，選擇K+為參照峰，結果顯示，IC 指紋圖譜中各共有色譜峰相對保留時間的RSD 為0.01%～0.05%，相對峰面積RSD 為0.58%～0.72%，表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取S7供試品6份，分別按2.2.1.3項下制備方法平行制備供試品溶液，按照2.2.1.1項下色譜條件進行樣品檢測，選擇K+作為參照峰，結果顯示，IC 指紋圖譜中各共有色譜峰的相對保留時間的RSD 為0.04%～0.05%，相對峰面積的RSD為0.99%～2.72%，表明該供試品溶液的制備方法重復性良好。

穩定性試驗：取S7供試品溶液，分別按2.2.1.1項下色譜條件，在0、2、4、8、12、24 h 進行供試品檢測，選擇K+作為參照峰，結果顯示，IC指紋圖譜中各共有色譜峰的相對保留時間的RSD為0.02%～0.04%，相對峰面積的RSD 為0.42%～2.57%，表明按照上述方法制得的供試品溶液在24 h 內穩定性良好。

2.2.1.5 指紋圖譜的建立 取12 批石膏-知母組合物樣品，按2.2.1.3 項下方法制備供試品溶液，按照2.2.1.1 項下色譜條件進行測定，記錄得到IC 色譜圖。運用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”（2012 版），以S1 供試品色譜圖為參照圖譜，選擇中位數法分別生成對照圖譜，時間窗寬度設置為0.1 min，采用多點校正法進行Mark 峰匹配，建立12 批石膏-知母組合物的IC 疊加指紋圖譜，生成對應的IC 對照指紋圖譜R1（圖1）。IC 指紋圖譜中共標定5 個共有峰（圖2），經與對照品溶液比對，確定1 號峰為Na+、3 號峰為K+、4 號峰為Mg2+、5 號峰為Ca2+。以K+為指紋圖譜參照峰，計算各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，結果見表2、表3。結果顯示，12 批石膏-知母組合物樣品IC 指紋圖譜各色譜峰相對保留時間RSD 為0～0.56%，表明各色譜峰出峰時間穩定，IC 指紋圖譜重復性好，但各色譜峰相對峰面積RSD 存在較大差異，表明不同批次石膏-知母組合物所含離子含量存在一定差異。

圖1 12 批石膏-知母組合物樣品IC 指紋圖譜及對照指紋圖譜

圖2 石膏-知母組合物樣品IC指紋圖譜

表2 石膏-知母組合物樣品IC 指紋圖譜色譜峰相對保留時間

表3 石膏-知母組合物樣品IC指紋圖譜各色譜峰相對峰面積

2.2.1.6 指紋圖譜相似度評價 采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”（2012 版），以對照指紋圖譜R1 為參照，對12 批石膏-知母組合物指紋圖譜進行整體相似度評價。結果顯示，12批石膏-知母組合物供試品的IC 指紋圖譜相似度均為1.000，大于0.963，與對照圖譜具有較好的一致性，表明石膏-知母組合物各批間質量均一穩定。

2.2.2 UPLC指紋圖譜

2.2.2.1 色譜條件 Waters HSS T3色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動相為0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈∶甲醇（3∶1，B）；梯度洗脫（0～3 min，0%B；3～7 min，0%～4%B；7～14 min，4%～7%B；14～20 min，7%～13%B；20～27 min，13%～16%B；27～28 min，16%～20%B；28～34 min，20%～25%B；34～42 min，25%～32%B；42～44 min，32%～60%B；44～54 min，60%～70%B；54～57 min，70%～90%B；57～59 min，90%～0%B；59～65 min，0%B）；柱溫為30 ℃；流速為0.25 mL·min-1；檢測波長為275 nm；進樣量為1 μL。

2.2.2.2 對照品溶液的制備 分別稱取新芒果苷、芒果苷、異芒果苷對照品約5、10、1 mg，精密稱定，精密加入70%甲醇25 mL，制成質量濃度為199.010、392.989、41.895 μg·mL-1的混合對照品溶液，即得。

2.2.2.3 供試品溶液的制備 取石膏-知母組合物，研細，精密稱取約1.0 g，置于具塞錐形瓶中，精密量取70%甲醇50 mL 置于錐形瓶中，稱定質量，密塞，超聲處理60 min，取出，放涼至室溫，再稱定質量，用溶解溶劑補足損失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.2.4 方法學考察 精密度試驗：分別精密吸取2.2.2.3 項下S7 供試品溶液，按2.2.2.1 項下色譜條件連續進行6 次樣品測定，選擇芒果苷作為參照峰，結果顯示，UPLC指紋圖譜中各共有色譜峰的相對保留時間RSD為0.02%～0.14%，相對峰面積RSD為0.16%～3.17%，表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取S7供試品6份，分別按2.2.2.3項下方法平行制備供試品溶液，按照2.2.2.1項下色譜條件進行樣品檢測，選擇芒果苷作為參照峰，結果顯示，UPLC指紋圖譜中共有色譜峰的相對保留時間的RSD 為0.01%～0.17%，相對峰面積的RSD 為1.02%～3.41%，表明該供試品溶液的制備方法重復性良好。

穩定性試驗：取S7供試品溶液，分別按2.2.2.1項下色譜條件在0、2、4、8、12、24 h 進行供試品檢測，選擇芒果苷作為UPLC 指紋圖譜的參照峰，結果顯示，UPLC指紋圖譜中各共有色譜峰的相對保留時間的RSD為0.01%～0.11%，相對峰面積的RSD為0.59%～2.46%，表明按照上述方法制得的供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.2.2.5 UPLC指紋圖譜的建立 取12批石膏-知母組合物樣品，分別按2.2.2.3項下方法制備供試品溶液，按2.2.2.1項下色譜條件進行供試品測定，得到UPLC 色譜圖。運用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”（2012 版），以S1 供試品色譜圖為參照圖譜，選擇中位數法分別生成對照圖譜，時間窗寬度設置為0.1 min，采用多點校正法進行Mark 峰匹配，建立12 批石膏-知母組合物的UPLC 疊加指紋圖譜，生成對應的UPLC對照指紋圖譜R2（圖3）。UPLC指紋圖譜中共標定15個共有峰（圖4），經與對照品溶液比對，確定7 號峰為新芒果苷、10號峰為芒果苷、11號峰為異芒果苷。以芒果苷為指紋圖譜參照峰，計算各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，結果見表4、表5。結果顯示，12批石膏-知母組合物樣品各色譜峰相對保留時間RSD 為0～1.54%，表明各色譜峰出峰時間穩定，UPLC指紋圖譜重復性好，但各色譜峰相對峰面積RSD 存在較大差異，表明不同批次石膏-知母組合物所含化學成分存在一定差異。

圖3 12批石膏-知母組合物樣品UPLC指紋圖譜及對照指紋圖譜

圖4 石膏-知母組合物樣品UPLC指紋圖譜

表4 石膏-知母組合物樣品UPLC指紋圖譜各色譜峰相對保留時間

表5 石膏-知母組合物樣品UPLC指紋圖譜各色譜峰相對峰面積

2.2.2.6 指紋圖譜相似度評價 采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”（2012 版），分別以對照指紋圖譜R2為參照，對12批石膏-知母組合物指紋圖譜進行整體相似度評價。結果顯示，12批石膏-知母組合物供試品UPLC 指紋圖譜相似度依次為0.997、0.998、0.997、0.999、0.999、0.963、0.974、0.995、0.999、0.999、0.986、0.999，均大于0.963，與對照圖譜具有較好的一致性，表明石膏-知母組合物各批間質量均一穩定。

2.2.3 聚類分析 將12 批石膏-知母組合物IC、UPLC指紋圖譜共有峰面積作為變量，導入SPSS 20.0軟件，進行Z得分標準化處理。以標準處理后的數據作為變量，選擇組間連接法，以平方歐氏距離為測量區間，對樣品進行聚類分析（圖5）。當平方歐氏距離為22.5時，12批石膏-知母組合物大致可分為2類，S1～S6、S8～S12聚為第1類，S7聚為第2類。當平方歐氏距離為15 時，大致可分為3 類，S1～S5、S8～S12聚為第1類，S6聚為第2類，S7聚為第3類。

圖5 石膏-知母組合物樣品聚類分析

2.2.4 主成分分析 將IC、UPLC 指紋圖譜標準化處理后得到的數據導入SPSS 20.0 軟件進行主成分分析，以特征值>1為指標，從20個變量成分中提取得到5 個變量成分，累積方差貢獻率>89.052%，見表6。同時將數據導入SIMCA 14.1 軟件中，以提取得到的5 個主成分繪制主成分得分圖，見圖6。結果表明，S6、S7 與其余批次樣品差異較大，這與聚類分析結果基本一致。

圖6 石膏-知母組合物樣品主成分分析

表6 石膏-知母藥對主成分特征值及方差貢獻率

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件 Ca2+色譜條件：同2.2.1.1 項下IC指紋圖譜色譜條件。

SO42-色譜條件：色譜柱選擇IonPac AG14 保護柱（50 mm×4 mm，9 μm）、IonPac AS14 分析柱（250 mm×4 mm，9 μm）；ASRS 4 mm 抑制器，抑制電流為31 mA；淋洗液為4.5 mmol·L-1碳酸鈉與1.4 mmol·L-1碳酸氫鈉均勻混合的溶液，流速為1.2 mL·min-1；電導檢測器，檢測池溫度為35 ℃，檢測器靈敏度為5 μs·cm-1；柱溫為30 ℃；進樣量為5 μL。

芒果苷、新芒果苷、異芒果苷色譜條件：同2.2.2.1項下UPLC 指紋圖譜色譜條件，檢測波長為258 nm。

知母皂苷BⅡ色譜條件：選擇Agilent ZORBAX StableBond C8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-水（25∶75）為流動相；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；蒸發光散射檢測器檢測，漂移管溫度104 ℃；載氣流速為2.9 mL·min-1；進樣量為5～10 μL。

2.3.2 對照品溶液的制備 Ca2+、SO42-對照品溶液的制備：分別稱取鈣單元素溶液標準物質、硫酸鹽溶液標準物質約3、5 mg，精密稱定質量，精密加入純水30 mL，分別制成Ca2+、SO42-質量濃度為100.055、166.682 μg·mL-1的溶液，即得。

芒果苷、新芒果苷、異芒果苷對照品溶液的制備：同2.2.2.2 項下UPLC 指紋圖譜對照品溶液。

知母皂苷BⅡ對照品溶液的制備：稱取知母皂苷BⅡ對照品約23 mg，精密稱定，精密加入30%丙酮水溶液25 mL，制成質量濃度為889.471 μg·mL-1的對照品溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 Ca2+、SO42-供試品溶液的制備：精密吸取2.2.1.3 項下IC 指紋圖譜供試品溶液0.6 mL，加水稀釋至30 mL，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

芒果苷、新芒果苷、異芒果苷供試品溶液的制備：同2.2.2.3 項下UPLC 指紋圖譜供試品溶液制備方法。

知母皂苷BⅡ供試品溶液的制備：取石膏-知母組合物樣品，研細，精密稱取樣品約0.2 g，置于具塞錐形瓶中，精密量取30%丙酮水溶液25 mL置于錐形瓶中，稱定質量，密塞，超聲溶解30 min，取出，放涼至室溫，再稱定質量，用溶解溶劑補足損失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3.4 方法學考察 標準曲線繪制：精密吸取2.3.2 項下各成分對照品溶液，分別制成各成分的系列對照品溶液，分別按照2.3.1 項下色譜條件進行對照品測定，以各成分對照品溶液的質量濃度（或質量濃度對數值）為橫坐標（X），對應的峰面積（或峰面積對數值）為縱坐標（Y），繪制標準曲線，得到線性回歸方程，見表7。

表7 石膏-知母組合物各指標線性關系考察結果

精密度試驗：精密吸取2.3.2 項下各成分對照品溶液少許，分別按照2.3.1 項下色譜條件連續進行樣品測定6 次，得到各成分的色譜峰面積。結果表明，Ca2+、SO42-、新芒果苷、芒果苷、異芒果苷、知母皂苷BⅡ 6 個指標色譜峰面積的RSD 為0.73%、1.54%、0.22%、0.23%、0.95%、0.83%，表明該儀器精密度良好。

穩定性試驗：取S7 供試品，分別按2.3.3 項下方法制備3 份供試品溶液，分別按2.3.1 項下色譜條件，在0、2、4、8、12、24 h 內進行樣品檢測，得到各成分的色譜峰面積。結果表明，Ca2+、SO42-、新芒果苷、芒果苷、異芒果苷、知母皂苷BⅡ 6個指標峰面積的RSD分別為1.36%、3.02%、0.46%、0.48%、0.52%、2.61%，表明按照上述方法制得的供試品溶液在24 h 內穩定性良好。

重復性試驗：取S7 供試品6 份，按2.3.3 項下方法平行制備各成分供試品溶液，按2.3.1 項下色譜條件進行樣品檢測，得到各成分的色譜峰面積，按照標準曲線回歸方程計算各成分含量。結果表明，Ca2+、SO42-、新芒果苷、芒果苷、異芒果苷、知母皂苷B Ⅱ 6 個指標質量分數的RSD分別為2.94%、2.72%、2.62%、2.92%、3.28%、1.08%，表明該供試品溶液的制備方法重復性良好。

加樣回收率試驗：按2.3.3 項下各成分制備方法，分別平行精密稱取已知成分含量的石膏-知母組合物樣品（S7）9 份，按供試品中待測成分含量的50%、100%、150%原則，精密加入上述6 個待測指標的對照品，按2.3.3 項下制備方法分別制備各儀器的供試品溶液，按2.3.1 項下色譜條件進行樣品檢測，按照標準曲線回歸方程計算各指標的含量，得到Ca2+、SO42-、新芒果苷、芒果苷、異芒果苷、知母皂苷BⅡ的加樣回收率均值分別為102.06%、97.59%、101.13%、102.01%、91.29%、100.08%，RSD 分別為1.57%、0.93%、1.33%、1.53%、1.32%、1.68%，均在限度要求范圍內，表明本方法回收率良好。

2.3.5 樣品含量測定 取12 批石膏-知母組合物樣品，分別按2.3.3項下方法制備供試品溶液，按2.3.1項下色譜條件進行樣品檢測，見表8。結果表明，Ca2+和SO42-質量分數分別為58.35～100.56、127.85～223.13 mg·g-1；新芒果苷、芒果苷、異芒果苷、知母皂苷B Ⅱ質量分數分別為0.52～5.91、5.10～8.20、0.51～0.78、21.14～38.35 mg·g-1。

表8 石膏-知母組合物各指標質量分數 mg·g-1

2.4 石膏-知母合煎樣品與單煎合用樣品指紋圖譜及含量測定

取石膏-知母合煎組合物、石膏-知母單煎混合樣品，分別按照指紋圖譜方法、含量測定方法，平行測定3份。將測定數據導入SPSS 20.0統計分析軟件，采用獨立樣本t檢驗對樣品進行分析，見表9、表10。結果表明，與單煎合用樣品比較，合煎樣品中Na+，K+，Mg2+，UPLC 峰1、峰2、峰3、峰6、峰9、峰12、峰13、新芒果苷、芒果苷峰面積與稱樣量的比值，以及新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BⅡ含量差異有統計學意義（P<0.05）；Na+，IC 峰2，K+，Mg2+，新芒果苷，UPLC峰4、峰14、峰15 峰面積與稱樣量的比值，以及新芒果苷、知母皂苷BⅡ含量明顯增大，表明石膏與知母合煎可有效促進化學成分的溶出。

表9 石膏-知母合煎組合物與單煎混合樣品指紋圖譜檢測數據（,n=3）

表9 石膏-知母合煎組合物與單煎混合樣品指紋圖譜檢測數據（,n=3）

注：與單煎合用樣品比較，*P<0.05；表10同。

表10 石膏-知母合煎組合物與單煎混合樣品指標質量分數（,n=3） mg·g-1

表10 石膏-知母合煎組合物與單煎混合樣品指標質量分數（,n=3） mg·g-1

3 討論

3.1 色譜條件選擇

IC 指紋圖譜考察了0.8、1.0、1.2 mL·min-13個流速，發現三者色譜峰信息完整、分離度較好，但流速為0.8 mL·min-1時各色譜峰的出峰時間居中，利于后期分析，最終確定流速為0.8 mL·min-1。淋洗液考察了18、20、22 mmol·L-13 種不同濃度的甲烷磺酸水溶液，發現3 種不同濃度淋洗液對色譜圖影響較小，僅影響各色譜峰的出峰時間，為節省時間，確定淋洗液為20 mmol·L-1甲烷磺酸水溶液。

UPLC 指紋圖譜考察了乙腈-0.1%甲酸水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液、乙腈∶甲醇（3∶1）-0.1%甲酸水溶液3種不同流動相，發現乙腈∶甲醇（3∶1）-0.1%甲酸水溶液的色譜圖基線噪音小，色譜峰峰形最佳，各峰之間分離度達到1.5 以上，出峰時間適宜，滿足指紋圖譜對色譜峰的要求。同時，考察了258、275、310 nm 3個波長，發現258 nm下芒果苷、新芒果苷、異芒果苷的響應值最高，275 nm 下色譜峰數目最多，因此確定258 nm 為含量測定波長，275 nm為圖譜測定波長。

3.2 指紋圖譜結果分析

12 批石膏-知母組合物IC 指紋圖譜、UPLC 指紋圖譜與對照圖譜的相似度均大于0.9，具有較好的一致性。聚類分析和主成分分析均能將12批石膏-知母組合物分為3 類，表明產地、加工方式、組合方式、生產工藝等因素均可影響石膏-知母組合物的質量，由此可側面突出建立IC 指紋圖譜、UPLC 指紋圖譜的重要性，可全面反映石膏-知母組合物的整體化學信息[17]。

3.3 石膏-知母合煎組合物與石膏、知母單煎混合樣品的比較分析

IC 指紋圖譜中，石膏-知母合煎組合物中峰2 明顯高于知母提取物以及單煎合用樣品。此外，石膏提取物中未檢測到峰2，說明峰2 主要來源于知母，且與石膏合煎能促進知母中峰2 所表征化合物的溶出。離子色譜常見的無機陽離子出峰順序為Li+、Na+、NH4+、K+、Mg2+、Ca2+。峰2 的保留時間在峰1（Na+）和峰3（K+）之間。雖然本研究沒有進行峰2的指認，但可推測其為NH4+離子。目前，暫未見有關石膏-知母中NH4+離子作用的相關文獻報道，有待繼續深入研究。

石膏-知母合煎組合物中Na+、K+、Mg2+峰面積/稱樣量明顯大于單煎混合樣品（P<0.05），這存在2種可能：1）2 味藥物的煎煮出膏率并無明顯變化，則表明合煎可明顯促進Na+、K+、Mg2+溶出；2）石膏-知母合煎時可增強石膏細粉的保留，實際合煎石膏出膏率有增加，并減少石膏生產過程固形物的損耗[18]，導致這3種離子的量增多。就結果而言，合煎組合物樣品確比單煎混合的樣品Na+、K+、Mg2+量高，制劑過程不可不考慮。

UPLC指紋圖譜中，石膏-知母合煎組合物中峰1、峰2、峰3、峰6、新芒果苷、峰9、芒果苷、峰12、峰13峰面積/稱樣量與單煎混合樣品的差異有統計學意義，其中組合物中僅有新芒果苷峰面積/稱樣量大于單煎混合樣品。同時，新芒果苷、知母皂苷BⅡ含量明顯高于單煎混合樣品（P<0.05），說明合煎能提高新芒果苷、知母皂苷BⅡ的溶出，這與文獻報道結果一致[11,19]。綜上所述，合煎與單煎有顯著區別的成分可考慮納入石膏-知母制劑質量研究的重點關注對象，本研究建立的方法可為石膏-知母組合物的質量研究提供有效的方法支持。

藥對通常有2 味藥組成，療效確切，具備了復方的基本主治功能和療效，是聯系眾多中藥復方的紐帶。本研究采用IC 和UPLC 探究了石膏-知母藥對組合物中無機元素及有機化合物的組成情況，可為石膏-知母藥對及白虎湯等經典方劑的質量評價及物質基礎研究提供一定理論指導和技術支持。