接種密度對牛顆粒細胞形態及相關基因表達的影響

摘要：牛卵巢顆粒細胞是雌激素（Estrogen，E2）合成的主要來源，具有E2恬性的牛顆粒細胞體外模型的建立是研究E2合成與分泌過程中潛在調控機制的重要工具，該細胞模型的建立可為E2合成分子調控機制及牛卵巢卵泡發育機制的研究提供理論與技術支持。細胞接種密度是顆粒細胞體外培養模型的關鍵因素，高密度可引起細胞生理及分子的顯著變化。研究通過不同接種密度下的形態變化和基因表達篩選牛顆粒細胞體外培養最優接種密度，采用長期無血清法培養牛原代顆粒細胞，培養液中添加FSH及IGF-l以誘導E2的合成。培養7 d后，采集6孔板中高（3.0×10個細胞／孔）、中（2.O×10個細胞／孔）、低（1.0×10個細胞／孔）3種不同接種密度的細胞圖像進行觀測，并利用qRT-PCR技術檢測3種不同接種密度中相關基因的表達情況。結果表明，低密度（1.0×10個細胞／孔）接種細胞呈現成纖維細胞樣外觀，細腮無聚集傾向；中密度組（2.0×10個細胞／孔）可觀察到少量聚集的細胞團，高密度（3.0×10個細胞／孔）培養條件下，大多數細胞聚集成細胞團。低密度組（1.0×10個細胞／孔）中，CYP19A1及FSHR高表達，RGS2及VNN2低表達；高密度組（3.0×10個細胞／孔）表達量則相反。綜上所述，低密度組（10×10個細胞／孔）細胞可作為具有E2活性的牛顆粒細胞體外模型。

關鍵詞：牛；顆粒細胞，接種密度；無血清培養；細胞培養模型

中圖分類號：S823.148 文獻標識碼：A 文章編號：1002-2481（2024）03-0147-06