血液中乙醇檢測(cè)方法的校正測(cè)量分析

潘 宇，董彥杰

(安徽宜凱司法鑒定所，安徽 安慶 246000)

飲酒后駕駛機(jī)動(dòng)車(chē)，對(duì)行人及財(cái)產(chǎn)都會(huì)產(chǎn)生重大安全隱患。世衛(wèi)組織提出，酒駕是交通事故發(fā)生的最主要因素[1]。因此，我國(guó)制定了嚴(yán)格的酒駕處罰標(biāo)準(zhǔn)。 最近幾年，在機(jī)動(dòng)車(chē)數(shù)量增加的同時(shí)酒駕發(fā)生率也有增無(wú)減[2]。駕駛員是否酒駕，將依據(jù)駕駛員體內(nèi)血液中乙醇含量進(jìn)行判斷[3]，但是，血液中乙醇含量測(cè)定[4-7]存在一定的誤差。頂空氣相色譜法用來(lái)檢測(cè)血液中乙醇含量，分離效果好、準(zhǔn)確度高[8]。按現(xiàn)行中華人民共和國(guó)公共安全行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GA/T 1073-2013《生物樣品血液、尿液中乙醇 、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇的頂空-氣相色譜檢驗(yàn)方法》規(guī)定，兩份樣品的相對(duì)相差不超過(guò)10%(有凝血塊的血樣不得超過(guò)15%)，定量數(shù)據(jù)可靠，結(jié)果按兩份樣品的平均值計(jì)算，否則需要重新進(jìn)行測(cè)定[9]。就氣相色譜儀每天的校正值，在什么樣的范圍內(nèi)才能滿足檢測(cè)要求，本文對(duì)此進(jìn)行分析。

1 理論分析

根據(jù)有限數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，儀器測(cè)試方法是否可用，可用t檢驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)[10]。

(1)

在標(biāo)準(zhǔn)GA/T 1073-2013中，實(shí)驗(yàn)對(duì)同一樣品，平行測(cè)定兩次，會(huì)得到兩個(gè)數(shù)據(jù)。那么(1)式就可轉(zhuǎn)化為：

(2)

因?yàn)橹挥袃蓚€(gè)數(shù)據(jù)x1和x2，所以

(3)

(4)

將(3)式代入(4)式可得：

(5)

式中，D=|x1-x2|，為兩次測(cè)定值的極差或相差。

將(5)式代入(2)式，可得：

(6)

若計(jì)算得到的t值小于一定置信度和自由度下的tP，f值(tP，f值表(雙邊)[10])，說(shuō)明此方法不存在顯著性差異，方法可靠。若計(jì)算得到的t值大于一定置信度和自由度下的tP，f值(tP，f值表(雙邊))，說(shuō)明此方法存在顯著性差異，此方法不能使用。

從tP，f值表(雙邊)數(shù)據(jù)表可得，若P=0.95時(shí)，兩次測(cè)定的t0.95，1=12.71。若用標(biāo)準(zhǔn)樣品實(shí)驗(yàn)，平行測(cè)定同一樣品兩次，可得x1和x2，用(6)式計(jì)算得到t值小于12.71，說(shuō)明此法可靠，可以使用。由此可得：

(7)

若P=0.90時(shí)，兩次測(cè)定的t0.95，1=6.31。若用標(biāo)準(zhǔn)樣品實(shí)驗(yàn)，平行測(cè)定同一樣品兩次，可得x1和x2，用(6)式計(jì)算得到t值小于6.31，說(shuō)明此法可靠，可以使用。由此可得：

(8)

2 儀器和試劑

2.1 儀器

氣相色譜儀 GC9720Plus(浙江福立分析儀器股份有限公司，中國(guó))，全自動(dòng)頂空進(jìn)樣器APL(奧普樂(lè)科技集團(tuán)(成都)有限公司，中國(guó))，普力菲爾超純水機(jī)(上海富詩(shī)特環(huán)保科技有限公司，中國(guó))，渦旋混合器(海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司，中國(guó))。

2.2 試劑

100 mg/dL、80 mg/dL、50 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品(Supelco分析標(biāo)準(zhǔn)品，USA)，叔丁醇(HPLC測(cè)定w>99.5%) (Shanhai Macklin Biochemical Co.，Ltd.)。

3 實(shí)驗(yàn)方法

取 100 mg/dL 或 80 mg/dL 或 50 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品 100 μL，加入 4.0 mg/dL 的叔丁醇內(nèi)標(biāo)物液 500 μL，密封加熱 10 min，全自動(dòng)頂空進(jìn)樣檢驗(yàn)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程(線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9998)，得出檢測(cè)結(jié)果。

4 檢測(cè)實(shí)例分析

按實(shí)驗(yàn)方法，用 80 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品，一周校準(zhǔn)儀器測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表1；用 100 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品，一周校準(zhǔn)儀器測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表2；用 50 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品，一周校準(zhǔn)儀器測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。從表1 、表2和表3可知，測(cè)量數(shù)據(jù)的D值均不大于0.5，且都滿足一定置信度和自由度下的顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明此方法安全可靠。

表1 一周校準(zhǔn)測(cè)定血液中乙醇含量分析測(cè)定結(jié)果(每天一次，80 mg/dL)

表2 一周校準(zhǔn)測(cè)定血液中乙醇含量分析測(cè)定結(jié)果(每天一次，100 mg/dL)

表3 一周校準(zhǔn)測(cè)定血液中乙醇含量分析測(cè)定結(jié)果(每天一次，50 mg/dL)

用 80 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品，一周的平均相對(duì)誤差為0.05%。

用 100 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品，一周的平均相對(duì)誤差為0.04%。

用 50 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品，一周的平均相對(duì)誤差為0.08%。

5 不同乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液校正儀器的誤差分析

不同質(zhì)量濃度乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，在不同置信度下，一周的測(cè)定的平均值見(jiàn)表4。從表4看出，隨乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度的增大，測(cè)量的相對(duì)誤差減小。我們選用 80 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，主要原因?yàn)椋很?chē)輛駕駛?cè)藛T血液中乙醇含量如果大于或者等于 80 mg/dL 的行為即屬于醉酒駕駛，且使用 80 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品校正時(shí)相對(duì)誤差較小(0.05%)。

表4 一周不同質(zhì)量濃度乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定結(jié)果的平均值

6 結(jié)果與討論

與上述處理方法相同，若用 100 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品進(jìn)行儀器校準(zhǔn)時(shí)，置信度P=0.95，測(cè)定值在97.0～103.0 mg/dL 的范圍內(nèi)，此方法可用于未知樣品中乙醇含量的測(cè)定；置信度P=0.90，測(cè)定值在99.0～101.0 mg/dL 的范圍內(nèi)，此方法可用于未知樣品中乙醇含量的測(cè)定，且測(cè)定的相對(duì)誤差較小。若用 50 mg/dL 標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品進(jìn)行儀器校準(zhǔn)時(shí)，置信度P=0.95，測(cè)定值在47.0～53.0 mg/dL 的范圍內(nèi)，此方法可用于未知樣品中乙醇含量的測(cè)定；置信度P=0.90，測(cè)定值在49.0～51.0 mg/dL 的范圍內(nèi)，此方法可用于未知樣品中乙醇含量的測(cè)定，但測(cè)定的相對(duì)誤差較大。

我們建議使用P=0.90、80 mg/dL 的標(biāo)準(zhǔn)乙醇樣品進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。若超出此范圍，則說(shuō)明儀器條件、試劑純度、標(biāo)準(zhǔn)曲線可能出現(xiàn)問(wèn)題，需要仔細(xì)檢查儀器各項(xiàng)指標(biāo)與溫度條件是否正常，氣路是否仍然密封完好，電路檢測(cè)系統(tǒng)或色譜工作站是否運(yùn)行良好，所用試劑的純度、容量是否依舊保持相對(duì)穩(wěn)定；再次進(jìn)行儀器校正，若仍無(wú)法達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，便需要考慮重新測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線。直到問(wèn)題解決，乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢測(cè)值相對(duì)誤差在正常范圍之內(nèi)，才能正常使用儀器用于檢測(cè)血液中乙醇含量。