乳沒活絡散微生物限度檢查方法適用性分析

金蓀青

廣東省輕工業技師學院，廣東 廣州 510000

乳沒活絡散具有促進血液流通、消腫止痛的功效，民間多用此藥對骨折疾病或扭傷疾病等進行干預，能取得理想化成效[1]。由于乳沒活絡散本質上是由藥材原粉制得的一種藥物制劑，使用過程中能夠與機體創面直接接觸，因此提升其微生物限度的檢查質量是關鍵，該藥物應用的安全性一定程度上受微生物污染程度影響[2]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與樣品的選取

超凈工作臺（蘇州蘇潔凈化設備企業），高壓蒸汽滅菌器（上海博迅實業企業），乳沒活絡散（思南天使民族醫院）。

1.1.2 培養基和稀釋劑

稀釋劑是pH 為7.0 的氯化鈉-蛋白胨緩沖液；培養基中含有沙氏葡萄糖瓊脂、溴化十六烷基三甲胺瓊脂、甘露醇氯化鈉瓊脂等，來源于北京三藥科技企業[3]。

1.1.3 菌株

金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉、銅綠假單胞等，來源于北京三藥科技企業，本質上是第4代菌種。

1.2 方法

基于《中國藥典》對微生物限度檢查方式的應用要求進行檢查，參照非無菌產品的微生物計數法統計微生物計數情況，系統性地檢查控制菌。

第一，準備菌液。將無菌氯化鈉緩沖液置于西林瓶中，靜置0.5 min，然后將其渦旋振蕩10 s。將9 mL 無菌氯化鈉緩沖液與已經溶解的1 mL 菌液混合[4]，再從稀釋菌液內取出1 mL 菌液，與9 mL 無菌氯化鈉緩沖液混合，最終完成菌液的配制。

第二，準備供試液。將10 g 樣品與100 mL 無菌氯化鈉緩沖液混合，按照1∶10 的比例配制相應溶液。分析滅菌之前的供試品滅菌情況，將10 g 樣品與100 mL 無菌氯化鈉緩沖液混合搖勻，即得到按照1∶10 比例處理的供試液。再取出1∶10 的供試液10 mL，將其與100 mL 無菌氯化鈉緩沖液混合，制得供試液（1∶100）。取10 g 經過輻照滅菌加工的供試品放入100 mL 無菌氯化鈉緩沖液中，制得供試液（1∶10），備用[5]。

第三，實施計數試驗。測定胰酪大豆胨瓊脂培養基中銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌的氧菌總數，然后測定沙氏葡萄糖瓊脂培養基中酵母菌、霉菌的數量，包括黑曲霉、白色念珠菌等。對于任何實驗菌的培養，都需要采用2 個平皿進行平行制備，并評估其平均指數。將無菌氯化鈉緩沖液作為稀釋液，研究組將100 μL 試驗菌液添加到9.9 mL 供試液（1∶10、1∶100）中，每毫升供試液的含菌量應控制在一定范圍，即100 CFU 之內。得到1 mL 試驗菌液，利用細菌培養皿進行培養，輕輕晃蕩平皿使其充分混勻。供試品基礎組按照1∶10、1∶100 的比例制備供試液，借助稀釋液對菌液進行取替，操作過程與研究組相同。菌液基礎組要準備9.9 mL 稀釋液，與研究組均實施微生物回收檢驗的相同操作[4]。

第四,控制菌實用性檢驗。對金黃色葡萄糖菌進行檢查，即陽性基礎組準備10 mL 供試液（1∶10），將100 μL 菌液在胰酪大豆胨液體培養基中進行培養，在32 ℃條件下培養20 h。并將無菌氯化鈉緩沖液倒入胰酪大豆胨液體培養基的容器中，前者劑量是10.1 mL、后者劑量是100 mL，在32 ℃條件下培養20 h，將其納入陰性基礎組。

2 結果

2.1 乳沒活絡散相關微生物計數

輻照結束后，開始對供試品（1∶10）進行微生物計數分析。由于未經輻照的供試品沒有達到標準要求，所以要開展1∶100 稀釋劑研究，結果表明，輻照之前基礎組菌落對應的回收率可以達到70%，供試品從1∶100 的比例入手開展后階段微生物計數，具體情況如表1、表2 所示。

表1 輻照不同批次菌落回收情況

表2 尚未輻照不同批次供試品回收情況單位：%

2.2 適用性檢驗

基礎檢測可以用于金黃色葡萄球菌適用性檢驗、銅綠假單胞菌適用性檢驗，如表3 所示。

表3 檢驗情況

3 討論

輻照之前，供試品濃度較高，不適合用于計數，所以要將供試品按照1∶100 的比例進行稀釋。限度實驗表明，乳沒活絡散對多個菌種無抑制作用，表明平皿法適用于乳沒活絡散的檢查。運用基礎方式對基礎組的菌種進行檢驗，發現輻照之前與輻照之后的結果之間存在顯著差異，即輻照之前樣品的菌群與檢驗過程都沒有達到標準要求，而輻照結束后限度檢查均符合標準要求，即輻照工藝具有科學性、規范性。

基于此，乳沒活絡散的工藝加工要通過輻照的形式進行，輻照介入的微生物限度檢查過程能夠使用平皿法針對性地進行霉菌計數、酵母菌計數、氧菌計數，基于基礎檢驗模式取得理想的效果。