藏藥綠蘿花中銀椴苷的提取工藝研究

王潔雪，周 頁(yè)，姚 莎，劉玉容

成都師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，四川 成都 611130

藏藥綠蘿花是瑞香科結(jié)香屬植物滇結(jié)香（Edgeworthia gardneri（Wall.）Meisn.）的干燥花蕾[1]，主要分布于西藏寒冷地帶，對(duì)糖尿病、高血脂等疾病具有良好的預(yù)防和治療效果[1-2]。綠蘿花中含有黃酮、香豆素、多糖、三萜等主要活性物質(zhì)[3]，其中，銀椴苷在綠蘿花中的含量較高[4]，可作為其指標(biāo)性成分，但由于當(dāng)前缺乏對(duì)此活性成分的富集純化研究，故而本實(shí)驗(yàn)為這一寶貴的民間植物資源的大規(guī)模開發(fā)提供了參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

Waters 2695 型高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；色譜乙腈，色譜甲醇（費(fèi)頓控股有限公司）；其他試劑（市售分析純）；綠蘿花（成都荷花池中藥材市場(chǎng)）；銀椴苷，HPLC＞98%（成都康邦生物科技有限公司）；大孔樹脂AB-8、NKA-9、X-5、D101 和NKA-Ⅱ（天津允開樹脂科技有限公司）。

1.2 綠蘿花提取液的制備

取綠蘿花干燥花蕾10 g，粉碎后向其中加入120 mL 無(wú)水乙醇，回流提取兩次，每次1.5 h，濃縮后得到綠蘿花提取液。

1.3 銀椴苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取銀椴苷對(duì)照品1.08 mg，加入甲醇定容，配制成質(zhì)量濃度為0.108 mg/mL 的銀椴苷標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 色譜條件

色譜柱：Agilent Extend-C184.6×250 mm，5 μm；檢測(cè)波長(zhǎng)：313 nm；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：乙腈（B）-0.1%磷酸水溶液（A）為（32：68）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL。

1.5 藏藥綠蘿花提取液中銀椴苷含量的測(cè)定

取5 mL 綠蘿花提取液，加乙醇稀釋定容至100 mL，按1.4 項(xiàng)色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算銀椴苷的含量。經(jīng)測(cè)定綠蘿花中銀椴苷含量為2.52 mg/mL 。

1.6 大孔樹脂的選擇及預(yù)處理

選取5 種不同型號(hào)的大孔吸附樹脂（AB-8、NKA-9、X-5、D101、NKA-Ⅱ），將其分別浸泡在95%乙醇中24 h 后濕法裝柱，先后用95%乙醇和蒸餾水沖洗，至無(wú)醇味。然后分別用4%氫氧化鈉溶液和5%鹽酸溶液浸泡，后沖洗至中性即可，備用。

1.7 靜態(tài)吸附與解吸能力考察

分別稱取5 種已處理好的大孔吸附樹脂各2.5 g，向其中加入20 mL 綠蘿花提取液，振搖。2 h 后抽濾至干，即得到吸附液。再向吸附后的大孔樹脂中加入87%的乙醇20 mL 對(duì)其進(jìn)行解吸，抽濾后得到解吸液。將得到的吸附液和解吸液依照1.4 項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣檢測(cè)，并計(jì)算吸附量、吸附率、解吸量、解吸率（公式如下）。篩選出最適合提取銀椴苷的樹脂。

式中：X 表示吸附量，mg/g；W 表示吸附率，mg/g；Y表示解吸量，mg/g；Z 表示解吸率，%；a 表示吸附前銀椴苷的質(zhì)量濃度，mg/mL；b 表示吸附后溶液中銀椴苷的質(zhì)量濃度，mg/mL；v 表示上樣液體積，mL；c表示解吸液中銀椴苷的質(zhì)量濃度，mg/mL；V 表示解吸液體積，mL；m 表示樹脂質(zhì)量，g。

1.8 動(dòng)態(tài)吸附考察

1.8.1 上樣液質(zhì)量濃度考察

取樣品溶液配成質(zhì)量濃度依次為2.5、2、1.5、1 mg/mL 的溶液，稱取4 份已處理好的樹脂10 g 濕法裝柱，分別將上述溶液以1 mL/min 的速度上樣，收集過(guò)柱液，依照1.4 項(xiàng)色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，精選最佳上樣液質(zhì)量濃度。

1.8.2 上樣液體積考察

考察上述得到的最佳質(zhì)量濃度溶液的上樣體積，方法同1.8.1，每10 mL 收集一管流出液，測(cè)定每管中銀椴苷的質(zhì)量濃度，以流出液含量達(dá)到上樣液中銀椴苷含量的20%作為泄漏點(diǎn)，精選出最佳上樣體積。

1.8.3 乙醇洗脫液體積分?jǐn)?shù)的考察

分別采用30%、50%、70%、95%的乙醇洗脫，對(duì)流出液進(jìn)行檢測(cè)后，精選出最佳乙醇洗脫液的體積分?jǐn)?shù)。

1.8.4 洗脫體積的考察

按照從上述實(shí)驗(yàn)得到的最優(yōu)上樣條件上樣，每10 mL 收集一管洗脫液，檢測(cè)后，精選出最佳乙醇洗脫體積。

2 結(jié)果與分析

2.1 樹脂篩選

AB-8、D101、X-5、NKA-9、NKA-Ⅱ5 種大孔樹脂對(duì)藏藥綠蘿花中銀鍛苷的吸附率、解吸率及解吸量如表1 所示，結(jié)果表明5 種大孔吸附樹脂對(duì)銀椴苷的吸附率均較高，吸附能力很強(qiáng)，其中AB-8 樹脂的吸附效果最好。故優(yōu)選AB-8 型吸附樹脂作為最佳吸附樹脂。

表1 不同樹脂靜態(tài)吸附與解吸能力比較

2.2 上樣濃度對(duì)吸附效果的影響

由圖1 可知，隨著藏藥綠蘿花的上樣濃度逐漸增大，銀椴苷的吸附量也在增加。在上樣質(zhì)量濃度達(dá)到2 mg/mL 時(shí)，吸附量的增加開始趨于平緩。因此選擇最佳上樣液的質(zhì)量濃度為2 mg/mL。

圖1 上樣濃度對(duì)吸附效果的影響

2.3 吸附泄漏曲線

圖2 顯示，當(dāng)上樣體積達(dá)到30 mL 時(shí)開始發(fā)生泄漏，130 mL 后銀椴苷的質(zhì)量濃度接近2 mg/mL，可知樹脂柱已達(dá)到飽和狀態(tài)。當(dāng)上樣體積達(dá)到60 mL 時(shí)，流出液中銀椴苷的質(zhì)量濃度接近原上樣液的20%。由此確定最佳上樣體積為60 mL。

圖2 吸附泄露曲線

2.4 乙醇洗脫液體積分?jǐn)?shù)對(duì)解吸效果的影響

由圖3 可知，隨著乙醇洗脫液體積分?jǐn)?shù)的增大，其解吸效果也在相應(yīng)地提高。但當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)大于70%時(shí)，銀椴苷解吸率提高得較為緩慢，同時(shí)洗脫液中溶于乙醇的雜質(zhì)也在增加，致使銀椴苷的純度下降。因此，選擇70%的乙醇作為洗脫劑。

圖3 乙醇洗脫液體積分?jǐn)?shù)對(duì)解吸效果的影響

2.5 乙醇洗脫體積對(duì)洗脫效果的影響

由圖4 可知，當(dāng)乙醇洗脫劑體積為20 mL 時(shí)，洗脫下來(lái)的銀椴苷的濃度達(dá)到最高，當(dāng)乙醇洗脫劑的體積達(dá)到40～50 mL 時(shí)，銀椴苷的濃度波動(dòng)不大，開始趨于平緩，故確定最佳的乙醇洗脫體積為50 mL。

圖4 乙醇洗脫體積對(duì)解吸效果的影響

3 結(jié)論

本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)AB-8 型樹脂對(duì)銀椴苷的吸附率最高、解吸量最大。確定上樣液質(zhì)量濃度為2 mg/mL、上樣液體積為60 mL、洗脫液體積分?jǐn)?shù)為70%、洗脫體積為50 mL 作為最佳上樣及洗脫條件。該研究為銀椴苷的富集純化提供了可靠的依據(jù)，也為藏藥綠蘿花的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了一定的理論參考。