硬膜外鎮(zhèn)痛對(duì)重癥急性胰腺炎炎癥因子表達(dá)的影響

【摘要】目的 針對(duì)硬膜外鎮(zhèn)痛對(duì)重癥急性胰腺炎中炎癥因子表達(dá)的影響進(jìn)行研究。方法 運(yùn)用4%牛磺膽酸鈉溶液逆行注入大鼠胰膽管制作重癥急性胰腺炎模型，實(shí)驗(yàn)分3組：假手術(shù)組、模型組、模型+利多卡因組，各組分別測(cè)試大鼠的心電圖、心率、血壓。取假手術(shù)組、模型組大鼠胰腺組織石蠟切片進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）檢測(cè)血清淀粉酶（AMS）的表達(dá)。收集血清標(biāo)本，ELISA檢測(cè)炎癥因子的表達(dá)變化。結(jié)果 假手術(shù)組胰腺結(jié)構(gòu)清晰，排列整齊；模型組跟假手術(shù)組相比結(jié)構(gòu)紊亂，血管增生，胰島細(xì)胞纖維化，部分胰腺疏散水腫，實(shí)質(zhì)出血，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，出現(xiàn)病灶。ELISA檢測(cè)模型組與假手術(shù)組，結(jié)果顯示AMS值存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Plt;0.05），提示模型驗(yàn)證成功；模型組炎癥因子上升高于假手術(shù)組，利多卡因治療后明顯下降（均Plt;0.05）。結(jié)論 硬膜外鎮(zhèn)痛對(duì)重癥急性胰腺炎有一定的治療效果。

【關(guān)鍵詞】硬膜外鎮(zhèn)痛；重癥胰腺炎；利多卡因

中圖分類(lèi)號(hào)：R657.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2096-2665.2023.8.00.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2023.08.016

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是一種伴有全身?yè)p傷的潛在致命疾病，約20%的患者會(huì)發(fā)展為中度或重度急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP），具有病情復(fù)雜、進(jìn)展快、并發(fā)癥多、死亡率高等特點(diǎn)[1]。據(jù)全球估計(jì)，每年AP的發(fā)病率約為33.74例（95%的可信區(qū)間：23.33～48.81）/（每10萬(wàn)人·年）[2]。當(dāng)伴有胰腺或胰腺周?chē)M織壞死或器官衰竭時(shí)，SAP死亡率可達(dá)20%～40%[3-5]。根據(jù)修訂后的亞特蘭大分級(jí)，AP的嚴(yán)重程度根據(jù)是否存在器官衰竭和局部或全身并發(fā)癥分為輕度、中度和重度[6]。利多卡因是硬膜外鎮(zhèn)痛最常用的麻醉劑，其特點(diǎn)是起效快，脫敏效果好。由于利多卡因術(shù)后鎮(zhèn)痛時(shí)間較短，手術(shù)時(shí)間較長(zhǎng)需要重新給藥。局部麻醉藥與鎮(zhèn)靜劑或阿片類(lèi)藥物聯(lián)合使用可延長(zhǎng)鎮(zhèn)痛時(shí)間，減少藥物使用劑量和不良作用[7-9]。采用阿片類(lèi)藥物可提高鎮(zhèn)痛效果，延長(zhǎng)鎮(zhèn)痛持續(xù)時(shí)間，加快鎮(zhèn)痛起效時(shí)間，延長(zhǎng)弛緩性麻痹和鎮(zhèn)痛持續(xù)時(shí)間[10]。使用利多卡因進(jìn)行硬膜外鎮(zhèn)痛對(duì)治療重癥急性胰腺炎的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠，雄性，230～270 g。許可證號(hào)：SCXK（豫）2019-0004，廠家：河南斯貝克斯生物科技股份有限公司。所有大鼠飼養(yǎng)于貴州省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，統(tǒng)一進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化喂養(yǎng)和處理。溫度20～26 ℃，濕度40%～70% RH。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 牛磺膽酸鈉（上海源葉生物科技有限公司，CAS：145-42-6）；利多卡因（湖北天藥藥業(yè)股份有限公司，CAS：D32005071）；手術(shù)顯微鏡（北京天諾翔科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：02-dw-078）；生物機(jī)能系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司，型號(hào)：TM211-2003-004-200-026）；心電圖檢測(cè)儀（深圳市凱沃爾電子有限公司，型號(hào)：20030848）；切片機(jī)（北京榮興光恒科技有限公司，型號(hào)：RM2235）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司，型號(hào)：HGZF-101-1）；伊紅染色（北京索萊寶科技有限公司，CAS：G1100）；蘇木素染液（北京中杉金橋生物科技有限公司，CAS：ZLI-9610）；白光顯微鏡（上海賴(lài)氏電子科技有限公司，型號(hào)：CX41）。

1.3 重癥急性胰腺炎造模（模型由中洪博元構(gòu)建） 大鼠在術(shù)前禁食12 h，可自由飲水。手術(shù)前大鼠腹腔注射1%苯巴比妥鈉注射液1 mL/100 g，麻醉起效后固定大鼠四肢，常規(guī)消毒、腹部鋪洞巾，經(jīng)上腹部正中切口。找出胰膽管，進(jìn)行逆行胰膽管插管，插管深度約為2 cm，用顯微血管夾夾閉膽總管，用微量注射泵注射4%牛磺膽酸鈉溶液1 mL/kg（0.1 mL/min），留針5 min后肉眼可見(jiàn)胰腺充血水腫現(xiàn)象時(shí)就可取針縫合了。假手術(shù)組模擬造模，進(jìn)行胰膽管穿刺，不予以藥物注射。

1.4 脊髓硬膜外給藥 將17只大鼠分為假手術(shù)組

（4例）、模型組（5例）、模型+利多卡因組（8例）。造模12 h后，大鼠麻醉進(jìn)行脊髓硬膜外給藥。從大鼠第5～6腰椎間隙鉆小洞，從小孔處往上插管至第10胸椎處，利多卡因組緩慢注射0.24 mL 2%的利多卡因注射液，其他組注射生理鹽水。

1.5 蘇木精-伊紅染色 胰腺組織經(jīng)固定后，常規(guī)石蠟包埋，切片；HE染色具體步驟參考HE染色試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。鏡檢（物鏡100倍，目鏡10倍）。

1.6 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）檢測(cè) 血清炎癥因子[白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）]及淀粉酶（AMS）含量檢測(cè)均采用雙抗體夾心法，具體步驟參考相應(yīng)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，連續(xù)變量采用（x±s）表示，兩組之間定量數(shù)值比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，3組之間連續(xù)變量數(shù)值比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05， Plt;0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 模型驗(yàn)證 HE染色顯示：假手術(shù)組胰腺結(jié)構(gòu)清晰，排列整齊；與假手術(shù)組相比，模型組胰腺結(jié)構(gòu)紊亂，血管增生，可見(jiàn)纖維化，部分胰腺組織疏散水腫，實(shí)質(zhì)出血，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；與假手術(shù)組相比，模型組ELISA檢測(cè)AMS值升高（圖1B），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），提示造模成功，見(jiàn)圖1。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法結(jié)果 與假手術(shù)組相比，模型組血清中IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)升高；與模型組相比，模型+利多卡因組治療后IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05），見(jiàn)圖2。

3 討論

近年來(lái)隨著相關(guān)臨床醫(yī)療技術(shù)的快速發(fā)展與進(jìn)步，已證明使用胸段硬膜外鎮(zhèn)痛藥可改善急性胰腺炎患者的預(yù)后[11-12]。胸段硬膜外麻醉鎮(zhèn)痛治療方法越來(lái)越廣泛地應(yīng)用于急性胰腺炎鎮(zhèn)痛的治療中[13-14]。有報(bào)道稱(chēng)，急性重癥胰腺炎患者血清中TNF-α、IL-1β等炎癥因子水平明顯高于輕度胰腺炎患者。TNF-α、IL-1β在急性胰腺炎發(fā)病時(shí)和發(fā)病過(guò)程中均有升高。TNF-α和IL-1β被認(rèn)為在急性胰腺炎中發(fā)揮重要作用。在誘導(dǎo)胰腺炎前或誘導(dǎo)后阻斷TNF-α和IL-1β受體可降低胰腺炎嚴(yán)重程度，減少胰腺損傷[15-16]。

有研究發(fā)現(xiàn)，相比于對(duì)照組，急性胰腺炎組中炎癥因子IL-6，IL-1β的mRNA和蛋白水平顯著升高[17]。TNF-α等炎癥因子，在炎癥反應(yīng)中，起到了橋梁作用，炎癥因子的釋放量過(guò)多，會(huì)使胰腺微循環(huán)出現(xiàn)障礙，血管通透性明顯提升，導(dǎo)致胰腺壞死，產(chǎn)生大量?jī)?nèi)毒素，內(nèi)毒素進(jìn)入外周血液循環(huán)中，又能刺激釋放出大量的炎癥因子，從而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)[18]。而本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與單純的胰腺炎模型組相比，在給予利多卡因經(jīng)硬膜外治療后，胰腺炎大鼠血清中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平明顯下降。因此，本研究表明，硬膜外給予利多卡因?qū)χ匕Y胰腺炎有治療作用，其作用途徑是降低重癥胰腺炎的炎癥因子水平。本研究亦存在一定的局限性。第一，本研究只檢測(cè)了3項(xiàng)炎癥指標(biāo)；第二，本研究?jī)H檢測(cè)了血液樣本中的炎癥因子水平，并未檢測(cè)胰腺組織中的上述指標(biāo)的水平；第三，本研究?jī)H在野生型大鼠中觀察到胸段硬膜外給予利多卡因可降低急性胰腺炎大鼠血液循環(huán)中的炎癥因子水平，后續(xù)研究可使用IL-1β、IL-6、TNF-α的基因修飾鼠，進(jìn)一步證明利多卡因治療胰腺炎的作用機(jī)制是否是下調(diào)前述炎癥因子的水平。

綜前所述，本研究通過(guò)動(dòng)物模型證實(shí)經(jīng)胸段硬膜外給予利多卡因?qū)毙砸认傺子兄委熥饔茫唧w機(jī)制有待進(jìn)一步探究。

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