腸道菌群移植干預(yù)自閉癥合并胃腸道癥狀患兒的效果評估

【摘要】 目的：探究腸道菌群移植干預(yù)自閉癥合并胃腸道癥狀患兒的臨床效果。方法：招募宜春市人民醫(yī)院2022年1-7月收治的80例自閉癥合并胃腸道癥狀患兒為對象，根據(jù)就診序號按隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對照組，每組40例。對照組接受常規(guī)康復(fù)訓(xùn)練，觀察組在此基礎(chǔ)上接受腸道菌群移植干預(yù)。比較兩組患兒的治療效果、胃腸道癥狀[胃腸道癥狀評定量表（gastrointestinal symptom rating scale，GSRS）]、自閉癥癥狀[兒童孤獨(dú)癥評定量表（childhood autism rating scale，CARS）、自閉癥行為評定量表（autism behavior checklist，ABC）]、腸道菌群狀態(tài)（菌群門水平豐度）和不良反應(yīng)。結(jié)果：觀察組治療1、2、3、6個月的有效率均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。治療1、2、3、6個月，觀察組GSRS、CARS、ABC總分均優(yōu)于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。治療1個月，觀察組厚壁菌門豐度高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05），兩組其他菌門豐度比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。兩組治療6個月內(nèi)不良反應(yīng)發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。結(jié)論：腸道菌群移植干預(yù)自閉癥合并胃腸道癥狀患兒效果明顯，可通過調(diào)節(jié)恢復(fù)腸道微生物平衡，改善患兒自閉癥癥狀及胃腸道癥狀。

【關(guān)鍵詞】 腸道菌群移植 自閉癥 胃腸道癥狀 腸道菌群

Evaluation of Effect of Intestinal Flora Transplantation Intervention on Children with Autism and Gastrointestinal Symptoms/ZENG Kaidan， WEN Xuefeng， WANG Guilian. //Medical Innovation of China， 2023， 20（17）： 00-005

[Abstract] Objective： To explore the clinical efficacy of intestinal flora transplantation intervention on children with autism complicated with gastrointestinal symptoms. Method： A total of 80 children with autism and gastrointestinal symptoms admitted to Yichun People's Hospital from January 2022 to July 2022 were enrolled as the subjects. According to admission sequence， the children were divided into observation group and control group by the random number table method， with 40 cases in each group. The control group received routine rehabilitation training， and the observation group was given intestinal flora transplantation intervention on this basis. The efficacy， gastrointestinal symptoms [gastrointestinal symptom rating scale （GSRS）]， autism symptoms [childhood autism rating scale （CARS）， autism behavior checklist （ABC）]， intestinal flora status （abundance of flora phylum） and adverse reactions were compared between the two groups. Result： The effective rates at 1 month and 2， 3， 6 months in the observation group were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. After 1 month and 2， 3， 6 months of treatment， the total scores of GSRS， CARS and ABC in the observation group were better than those in the control group， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. After 1 month of treatment， the richness of firmicutes in the observation group was higher than that in the control group， with statistical significance （Plt;0.05）， while there were no statistical significance in the abundance of other phyla between the two groups （Pgt;0.05）. There was no significant difference in the incidence of adverse reactions within 6 months between the two groups （Pgt;0.05）. Conclusion： Intestinal flora transplantation intervention has a significant efficacy in the treatment of children with autism and gastrointestinal symptoms. It can improve autism and gastrointestinal symptoms in children by regulating and restoring intestinal microbial balance.

[Key words] Intestinal flora transplantation Autism Gastrointestinal symptoms Intestinal flora

First-author's address： Yichun People's Hospital， Jiangxi Province， Yichun 336000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.17.001

自閉癥是以社會交往、交流障礙和重復(fù)刻板行為、興趣狹窄為核心特征的神經(jīng)發(fā)育障礙[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織披露數(shù)據(jù)，全球范圍內(nèi)約每100名兒童就存在1例自閉癥患兒，保守估計全球自閉癥患者至少7 800萬，是全球患病數(shù)增速最快的疾病之一[2-3]。自閉癥發(fā)病受環(huán)境、遺傳多方面影響，目前成因暫未明晰，但臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)自閉癥患兒常合并腹瀉、便秘等胃腸道癥狀，多項(xiàng)研究提醒腸道微生物菌群異常是自閉癥發(fā)生、發(fā)展的潛在誘因，為自閉癥發(fā)病的菌-腸-腦軸模型提供基礎(chǔ)，同時提醒腸內(nèi)微生物可成為自閉癥患兒治療的靶點(diǎn)[4-5]。基于此，本研究采用腸道菌群移植干預(yù)自閉癥合并胃腸道癥狀患兒，觀察此法對患兒自閉癥癥狀、胃腸道癥狀、腸道菌群等多方面的影響，為開發(fā)有效的治療手段和生物標(biāo)志物提供理論基礎(chǔ)，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 招募宜春市人民醫(yī)院2022年1-7月

收治的80例自閉癥合并胃腸道癥狀患兒為對象，根據(jù)就診序號按隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對照組，每組40例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡3～10歲；（2）符合《美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊（第五版）》中自閉癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，兒童孤獨(dú)癥評定量表（childhood autism rating scale，CARS）總分≥30分，自閉癥行為評定量表（autism behavior checklist，ABC）總分≥67分，臨床診斷為自閉癥；（3）合并便秘、腹瀉等胃腸道癥狀；（4）同意采集糞便樣本，可規(guī)律返院隨診。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并瑞特氏綜合征、22q13缺失綜合征等影響發(fā)育的遺傳?。唬?）既往腦外傷、腦癱、腦炎等腦部器質(zhì)性疾病病史；（3）家屬既往嚴(yán)重精神疾病、藥物濫用史；

（4）入組前3個月內(nèi)使用益生菌、抗生素、抑酸劑等影響腸道菌群；（5）合并先天性巨結(jié)腸、腸套疊、腸梗阻等腸道器質(zhì)性病變；（6）發(fā)育商（developmental quotient，DQ）得分lt;35分。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)，監(jiān)護(hù)人簽署研究知情同意書。

1.2 方法 對照組接受常規(guī)康復(fù)訓(xùn)練，包括使用量表對患兒進(jìn)行專業(yè)評估，根據(jù)實(shí)際情況安排語言訓(xùn)練、運(yùn)動訓(xùn)練、認(rèn)知訓(xùn)練、社交訓(xùn)練等內(nèi)容，指導(dǎo)患兒家屬準(zhǔn)備膳食均衡的飲食，康復(fù)訓(xùn)練強(qiáng)度4 h/d，5～6 d/周，持續(xù)6個月。觀察組在此基礎(chǔ)上接受腸道菌群移植干預(yù)，具體操作：招募非親屬的健康人作為倡導(dǎo)菌群供體，招募標(biāo)準(zhǔn)包括：非妊娠期、哺乳期；年齡18～50歲；具有健康生活方式及良好飲食習(xí)慣；3個月內(nèi)無服用抗生素、益生菌及其他微生態(tài)制劑史[7]。通過智能腸菌處理系統(tǒng)制成菌群液或菌群膠囊（含活菌量gt;2.5×1012 CFU）。對依從性較好，可吞服膠囊患兒采用菌群膠囊口服治療，1次/d，20 g/次，連續(xù)3 d。對依從性差，無法配合或無法吞咽膠囊的患兒，使用鼻腸管或結(jié)腸鏡輸注菌群液，治療劑量及方法同上。

1.3 觀察指標(biāo)與評價標(biāo)準(zhǔn) （1）胃腸道癥狀。治療前和治療1、2、3、6個月，采用胃腸道癥狀評定量表（gastrointestinal symptom rating scale，GSRS）判斷患兒胃腸道癥狀，該量表包含腹痛、反流、消化不良、腹瀉和便秘5個維度，共15個項(xiàng)目，每項(xiàng)共7個選項(xiàng)，根據(jù)癥狀嚴(yán)重程度記1～7分，總分為各項(xiàng)目得分之和，總分范圍15～105分，總分越高患兒胃腸道癥狀越嚴(yán)重[8]。（2）自閉癥癥狀。治療前和治療1、2、3、6個月，采用CARS和ABC判斷患兒自閉癥癥狀，①CARS：該量表包含人際關(guān)系、模仿、情感反應(yīng)、軀體運(yùn)用能力、視覺反應(yīng)等15個項(xiàng)目，每項(xiàng)均包含“與年齡相當(dāng)”“輕度異?！薄爸卸犬惓！薄皣?yán)重異常”4個選項(xiàng)，分別對應(yīng)1～4分，總分為各項(xiàng)目得分之和，總分越高患兒自閉癥癥狀越嚴(yán)重。②ABC：該量表包含感覺、交往、軀體運(yùn)動、語言、生活自理5個因子，共57個項(xiàng)目，每項(xiàng)均包含“是”“否”2個選項(xiàng)，其中選項(xiàng)“否”均記0分，選項(xiàng)“是”根據(jù)不同項(xiàng)目記1～4分，總分為各因子得分之和，總分越高患兒自閉癥癥狀越嚴(yán)重[9]。（3）療效評估。治療1、2、3、6個月，參考文獻(xiàn)[10]評估患兒療效，分為臨床治愈、臨床改善及無變化，臨床治愈：治療患兒CARS總分lt;30分、ABC總分lt;67分、GSRS各項(xiàng)得分均lt;2分；臨床改善：治療患兒CARS總分、ABC總分、GSRS總分均較治療前改善，但未達(dá)臨床治愈標(biāo)準(zhǔn)；無變化：治療患兒CARS總分、ABC總分、GSRS總分較治療前無明顯改善或加重。治療有效率=（臨床治愈例數(shù)+臨床改善例數(shù)）/總例數(shù)×100%。（4）腸道菌群狀態(tài)：治療前、治療1個月，使用16S rDNA高通量測序技術(shù)觀察患兒菌群多樣性，具體操作：清晨使用無菌糞便采樣管收集患兒3～5 g糞便樣本，采集后30～60 min內(nèi)置于-80 ℃冰箱保存。使用糞便基因組DNA提取試劑盒提取總DNA，通過瓊脂糖凝膠電泳、紫外分光光度計進(jìn)行DNA定量分析。通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）對16S rDNA的V3～V4區(qū)序列擴(kuò)增，使用Illumina Miseq PE 300測序。使用Qiime 2軟件分析數(shù)據(jù)，去噪后97%的相似度下被劃分?jǐn)U增特征序列（OTU），使用Mothur軟件作OTU的α指數(shù)分析，評價微生物豐度。（5）不良反應(yīng)：統(tǒng)計治療6個月內(nèi)的患兒不良反應(yīng)，包括腹部不適、惡心嘔吐、短暫發(fā)熱、腹瀉、呼吸道不適。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 本研究使用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，對于符合正態(tài)分布的計量資料以（x±s）表示，兩組間多時間點(diǎn)比較采用重復(fù)測量方差分析，同時間點(diǎn)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；對于不符合正態(tài)分布的計量資料以[M（P25，P75）]表示，組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。以Plt;0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 觀察組，男25例，女15例；年齡3～10歲，平均（6.41±1.47）歲；胃腸道癥狀：便秘27例，腹瀉13例。對照組，男29例，女11例；年齡4～10歲，平均（6.75±1.24）歲；胃腸道癥狀：便秘29例，腹瀉11例。兩組性別、年齡、胃腸道癥狀比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05），具有可比性。

2.2 兩組胃腸道癥狀比較 治療前，兩組GSRS總分比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）；治療1、2、3、6個月，觀察組GSRS總分均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。見表1。

2.3 兩組自閉癥癥狀比較 治療前，兩組CARS、ABC總分比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）；治療1、2、3、6個月，觀察組CARS、ABC總分均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。見表2。

2.4 兩組療效比較 觀察組治療1、2、3、6個月的有效率均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05），見表3。

2.5 兩組腸道菌群狀態(tài)比較 兩組共有5種菌門：厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門、放線菌門、梭桿菌門。兩組治療前共有菌門水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）；治療1個月，觀察組厚壁菌門豐度高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05），兩組其他菌門豐度比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。見表4。

2.6 兩組不良反應(yīng)比較 治療6個月內(nèi)，對照組未出現(xiàn)不良反應(yīng)，觀察組出現(xiàn)2例惡心嘔吐，1例腹部不適，發(fā)生率為7.50%（3/40），兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（字2=3.117，P=0.077）。

3 討論

腸道菌群移植是將健康人糞便中的功能菌群通過分離純化的方式移植到患者體內(nèi)，以改善菌群失調(diào)，恢復(fù)正常胃腸道功能的治療方法[11]。此法近年來在臨床多消化系統(tǒng)疾病治療中廣泛應(yīng)用，郭世強(qiáng)等[12]將其用于中度潰瘍性結(jié)腸炎患者中顯示存在較好療效，能降低患者炎癥水平，改善腸道黏膜功能。臨床研究顯示，多數(shù)自閉癥患兒合并胃腸道癥狀，約有1/4的患兒伴有腹瀉，1/4伴有便秘，其他的患兒可能出現(xiàn)腹脹、胃腸道炎癥、胃食管反流等多種消化系統(tǒng)異常，不僅影響患兒日常生活，而且胃腸道癥狀可導(dǎo)致患兒焦慮、抑郁，對其睡眠、語言、社交能力均有影響，提醒腸道生態(tài)系統(tǒng)失調(diào)參與自閉癥發(fā)生發(fā)展，同時指明改善自閉癥患兒腸道菌群環(huán)境可能緩解其自閉癥及胃腸道癥狀[13-14]?；诖?，本研究采用腸道菌群移植干預(yù)自閉癥合并胃腸道癥狀患者，結(jié)果顯示較單純康復(fù)治療、飲食干預(yù)的患兒，聯(lián)合腸道菌群移植干預(yù)存在更好療效，能有效緩解胃腸道及自閉癥癥狀，說明此法的治療有效性。

腸道微生物環(huán)境與全身多器官組織功能密切關(guān)聯(lián)，其中與中樞神經(jīng)系統(tǒng)聯(lián)系尤為密切。此前已有多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)腸道微生物環(huán)境異常可導(dǎo)致下丘腦-垂體-腎上腺（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）軸激活，進(jìn)而誘導(dǎo)抑郁癥發(fā)病[15]。該理論近年來在自閉癥研究中同樣受到廣泛關(guān)注，Courtemanche等[16]分析存在自傷行為的自閉癥患兒皮質(zhì)醇水平更高，考慮嚴(yán)重和頻繁的自傷行為與患兒HPA活動改變有關(guān)。Ram等[17]認(rèn)為胎兒皮質(zhì)醇暴露可提高自閉癥發(fā)生風(fēng)險，可作為自閉癥預(yù)測因子。無一不指向HPA軸失調(diào)參與自閉癥發(fā)生發(fā)展，而腸道微生物作為該過程的主要參與者，首先可通過腸道神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行雙向調(diào)節(jié)，一方面大腦可釋放信號抑制腸道蠕動消化液分泌，另一方面腸道微生物環(huán)境變化，釋放的代謝物可穿過血腦屏障，刺激HPA軸過度激活，進(jìn)而釋放大量皮質(zhì)醇及促炎細(xì)胞因子，加重腸道炎癥水平，在此過程中破壞腸道上皮細(xì)胞，增加腸道通透性，可加劇腸道微生物有害代謝物、生物毒素擴(kuò)散從而影響神經(jīng)功能[18]。

目前治療腸道菌群失調(diào)最常見的方式為口服益生菌，但是其藥物所謂單一菌種或二聯(lián)、三聯(lián)菌種，多樣性較低難以有效定植患兒腸道，基于此菌群移植技術(shù)發(fā)展而來。該技術(shù)將健康人體內(nèi)多樣性菌群移植到患兒腸道，使其長久發(fā)揮重建腸道微生物穩(wěn)態(tài)的作用。臨床研究發(fā)現(xiàn)自閉癥患兒體內(nèi)菌群與健康人有所差異，Zou等[19]調(diào)查顯示自閉癥患兒體內(nèi)厚壁菌門、變形桿菌門微生物數(shù)量減少，同時擬桿菌門菌群富集。本研究在門水平觀察菌種豐度，結(jié)果顯示治療1個月觀察組患兒厚壁菌門豐度明顯上升高于對照組，說明腸道菌群移植能明顯改善患兒群內(nèi)菌群狀態(tài)。厚壁菌門、擬桿菌門是腸道主要菌群，前者包含乳酸桿菌等在內(nèi)的多種有益菌群，后者有脆弱擬桿菌屬此類致感染常見菌群，健康人體內(nèi)厚壁菌門、擬桿菌門維持相對穩(wěn)定水平，擬桿菌門/厚壁菌門升高可增加腸道通透性，加劇腸道炎癥，存在更高神經(jīng)損傷風(fēng)險[20]。觀察本研究治療過程中的不良反應(yīng)，接受移植患兒常見惡心嘔吐，全身癥狀較少，未見患兒嚴(yán)重不良反應(yīng)需要特殊干預(yù)，可見此法較為安全?；純撼霈F(xiàn)的惡心嘔吐考慮來自鼻腸管操作過程中摩擦導(dǎo)致，臨床實(shí)踐過程中應(yīng)注意加強(qiáng)操作優(yōu)化，提高患兒依從性。

綜上所述，對于自閉癥合并胃腸道癥狀患兒在常規(guī)康復(fù)治療基礎(chǔ)上聯(lián)合腸道菌群移植干預(yù)可改善其腸道菌群紊亂，改善自閉癥癥狀及胃腸道癥狀，治療過程中不良反應(yīng)較少。

參考文獻(xiàn)

[1]謝點(diǎn)，孔令志.基于腦磁圖的自閉癥譜系障礙早期篩查和診斷指標(biāo)[J].中國聽力語言康復(fù)科學(xué)雜志，2021，19（3）：232-237.

[2] ZEIDAN J，F(xiàn)OMBONNE E，SCORAH J，et al.Global prevalence of autism： a systematic review update[J].Autism Res，2022，15（5）：778-790.

[3]中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會發(fā)育行為學(xué)組，中國醫(yī)師協(xié)會兒科分會兒童保健學(xué)組.中國低齡兒童孤獨(dú)癥譜系障礙早期診斷專家共識[J].中華兒科雜志，2022，60（7）：640-646.

[4]王芳，楊廣學(xué)，郭德華.自閉癥譜系障礙成因的菌腸腦軸模型研究新進(jìn)展[J].中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2018，33（5）：598-603.

[5]成霞，袁伯穩(wěn).自閉癥患兒腸道菌群變化及其與自閉癥分級的關(guān)系[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2021，33（5）：560-563.

[6] DOERNBERG E，HOLLANDER E.Neurodevelopmental disorders （ASD and ADHD）：DSM-5， ICD-10， and ICD-11[J].CNS Spectr，2016，21（4）：295-299.

[7]李寧，田宏亮，馬春聯(lián)，等.菌群移植治療腸道疾病406例療效分析[J].中華胃腸外科雜志，2017，20（1）：40-46.

[8] KULICH K R，MADISCH A，PACINI F，et al.Reliability and validity of the gastrointestinal symptom rating scale （GSRS） and quality of life in reflux and dyspepsia （QOLRAD） questionnaire in dyspepsia： a six-country study[J].Health Qual Life Outcomes，2008，6：12.

[9]李洪華，溫和花，楊麗娟，等.不同性別和年齡孤獨(dú)癥譜系障礙兒童癥狀嚴(yán)重程度及發(fā)育水平的差異分析[J].中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志，2021，30（1）：27-32.

[10]李寧，田宏亮，陳啟儀，等.菌群移植治療腸道疾病2010例療效分析[J].中華胃腸外科雜志，2019，22（9）：861-868.

[11]李有宸，高海女，李蘭娟.從糞菌移植到下一代益生菌：挑戰(zhàn)與進(jìn)展[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2022，34（2）：223-227.

[12]郭世強(qiáng)，劉春林，張曉檳，等.腸道菌群移植聯(lián)合美沙拉嗪對中度潰瘍性結(jié)腸炎患者炎癥因子及腸道屏障功能的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2022，30（4）：259-262.

[13] RISTORI M V，QUAGLIARIELLO A，REDDEL S，et al.

Autism， gastrointestinal symptoms and modulation of gut microbiota by nutritional interventions[J].Nutrients，2019，11（11）：2812.

[14] DE MAGISTRIS L，F(xiàn)AMILIARI V，PASCOTTO A，et al.

Alterations of the intestinal barrier in patients with autism spectrum disorders and in their first-degree relatives[J].J Pediatr Gastroenterol Nutr，2010，51（4）：418-424.

[15] DU Y，GAO X R，PENG L，et al.Crosstalk between the microbiota-gut-brain axis and depression[J/OL].Heliyon，2020，6（6）：e04097.https：//www.cell.com/heliyon/fulltext/S2405-8440（20）30941-5.

[16] COURTEMANCHE A B，BLACK W R，MEYER J S.Hair cortisol and self-injurious behavior among children with autism spectrum disorder[J].Am J Intellect Dev Disabil，2021，126（2）：158-166.

[17] RAM S，HOWLAND M A，SANDMAN C A，et al.Prenatal risk for ASD： fetal cortisol exposure predicts child autism-spectrum disorder symptoms[J].Clin Psychol Sci，2019，7（2）：349-361.

[18] DAN Z，MAO X，LIU Q，et al.Altered gut microbial profile is associated with abnormal metabolism activity of autism spectrum disorder[J].Gut Microbes，2020，11（5）：1246-1267.

[19] ZOU R，XU F，WANG Y，et al.Changes in the gut microbiota of children with autism spectrum disorder[J].Autism Res，2020，13（9）：1614-1625.

[20] LI J，LV J L，CAO X Y，et al.Gut microbiota dysbiosis as an inflammaging condition that regulates obesity-related retinopathy and nephropathy[J].Front Microbiol，2022，13：1040846.

（收稿日期：2023-04-17） （本文編輯：張爽）