大理煙區西花薊馬種群動態變化及藍板誘集效率分析

曹 旎，楊志娟，胡軍和，鐘 杰，陳 錦，蘇家恩

（1.湖南人文科技學院 農業與生物技術學院，湖南 婁底 417000；2.云南省煙草公司大理市公司，云南 大理 671000；3.湖南農業大學 植物保護學院，湖南 長沙 410128；4.湖南省農業環境生態研究所，湖南 長沙 410125）

煙草是云南省的重要經濟作物，種植面積和總產量均位于全國第一，而煙草病毒病的大幅發生嚴重影響了煙草的產量和質量，造成了嚴重的經濟損失[1-2]。目前在云南地區已經發現的煙草病毒病主要有煙草黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）、煙草蝕紋病毒（Tobacco etch virus，TEV）、煙草叢矮病毒（Tobacco bushy stunt virus，TBSV）、煙草馬鈴薯Y 病毒 （Potato virus y，PVY）、煙草環斑病毒 （Tobacco ringspot virus，TRSV）和煙草條紋病毒（Tobacco streak virus，TSV）等[3]，這些病毒病均可由傳毒昆蟲例如薊馬等介導傳播。

薊馬（Thripidae）是昆蟲綱纓翅目（Thysanoptera）的一種銼吸式害蟲，其若蟲和成蟲均可以取食葉片、吸食汁液而直接危害烤煙，同時該昆蟲還可以傳播各種病毒導致煙葉卷曲壞死、煙株矮化、頂芽萎垂等癥狀，影響煙葉的品質，使其失去烘烤價值，且這種間接危害會給煙草生產帶來更為嚴重的損失[4-6]。例如西花薊馬（Frankliniella occidentalis）是番茄斑萎病毒的主要傳播媒介，感染該病毒后通常會導致作物減產30%～50%，嚴重時可減產70%，甚至絕收[7-8]。據報道，1996—2006 年西花薊馬曾導致美國煙草產業損失近140 萬美元[9]。

藍色粘蟲板（即藍板）對小型昆蟲成蟲如薊馬、蠅等有良好的誘殺效果，在我國廣泛應用于蔬菜、果樹害蟲的防治。為了了解大理煙區西花薊馬的種群數量動態變化，項目組從烤煙不同生育時期西花薊馬種群數量、健康煙株與感病煙株西花薊馬數量的差異以及藍板懸掛高度對西花薊馬的誘集效果3個方面分析了大理煙區西花薊馬的種群數量動態變化，以期優化煙田藍板布局，為煙草薊馬的綜合防治，特別是其傳播煙草病毒病的防控提供參考，為煙草產業健康發展保駕護航。

1 材料與方法

1.1 西花薊馬種群動態調查

2022 年5—6 月，在大理白族自治州大理市彎橋鎮種植云煙87 的田塊設置10 塊藍板（40 cm×25 cm），采用棋盤式分布，密度為30 塊/667m2，懸掛高度與煙株頂端持平并根據煙株長勢適時調整。以6 d 為1 個時間段回收藍板，隨機抽取藍板樣品，共檢測了10 個時間點的10 批藍板樣品，記錄藍板是來自健康煙株還是感病煙株。在藍板上通過五點取樣法獲得檢測樣品，每個取樣點面積為4 cm×2.5 cm，將其中所有薊馬以單頭蟲分別收集后進行西花薊馬檢測。

1.2 藍板懸掛高度試驗

為了確定藍板放置高度對西花薊馬誘集效果的影響，設計了3 個藍板懸掛高度，分別為55 cm、85 cm 以及隨著煙株生長適時調整藍板高度使其始終與煙株頂端齊平，棋盤式分布，每個處理設置10 個籃板，密度為30 塊/667m2，檢測不同放置高度對西花薊馬誘集效果的影響，從5 月5 日到6 月25 日共收集6 次，每次相隔10 d，隨機抽取藍板樣品進行西花薊馬檢測。藍板樣品獲取方法同上。

1.3 西花薊馬的分子生物學檢測

（1）DNA 的提取。參考張鄧壯等[10]的方法， 使 用KAPA DNA 快 速 提 取 試 劑 盒（Kapa Biosystems）提取單頭薊馬基因組DNA。具體操作如下：樣本速凍勻漿后，75℃下水浴10 min 進行裂解，然后于95℃水浴5 min 使蛋白失活。所得 基 因 組DNA 于－ 20 ℃保 存 備 用。（2）COI序列擴增與測序。參考湯云霞等[11]的方法，利用西花薊馬mtDNACOI基因設計引物（JM-F：5′–ATAATTCGGTAGTAACAGCCC–3′；JM-R：5′–GCTCCTGCTAAAACTGGTAACG–3′），以 提 取 的DNA 樣品為模板進行PCR 擴增。PCR 反應體系：1 μL 模板DNA（100 ng/μL），1 μL JM-F（2 μmol/L），1 μL JM-R（2 μmol/L），12.5 μL 2×Es Taq Master Mix，加入ddH2O 補足至25 μL。PCR 反應程序：95℃預變性3 min；95℃變性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸1 min，35 個循環；72℃延伸10 min，4℃保存。擴增產物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

2 結果與分析

2.1 利用西花薊馬特異性引物進行PCR 擴增的結果

由圖1 可知，利用西花薊馬特異性引物進行PCR 擴增，可以獲得預期大小的目的條帶，說明樣品中含有西花薊馬（陰性則不能檢測到），由此證明通過收集單頭蟲提取DNA 可進行西花薊馬的檢測。

圖1 部分PCR 擴增產物的電泳檢測結果

2.2 不同時期西花薊馬種群數量比較

如圖2 所示，檢測時間段內各批次藍板樣品均能檢測到西花薊馬，西花薊馬檢出率最高的為5月24 日的第4 批次樣品，達到（20.79±0.12）%，檢出率最低的為6 月30 日的第10 批次樣品，為（4.22±0.16）%。總的來說，5—6 月收集的藍板上西花薊馬檢出率呈先增加后下降的趨勢，5 月中下旬達到高峰。

圖2 大理煙區2022 年5—6 月10 批次藍板樣品中西花薊馬的檢出率

調查還發現，5 月在樣品中共檢出西花薊馬71頭，占檢測總數的16.75%，明顯高于6 月的8.33%（表1），說明5 月田間西花薊馬種群數量較多，危害相對較重。

表1 大理煙區2022 年5 和6 月藍板誘集的西花薊馬數量比較

2.3 健康煙株與感病煙株西花薊馬數量的比較

已有研究表明，西花薊馬的流行與煙草病毒病流行具有一定的相關關系，筆者收集了5 月下旬的藍板樣品，統計樣品來自健康煙株還是感病煙株，比較了二者西花薊馬的檢出率，結果如圖3 所示，健康煙株藍板上的西花薊馬檢測率極顯著低于感病煙株，表明了西花薊馬的數量與番茄斑萎病的發生流行可能存在一定的相關性。

圖3 健康煙株與感病煙株西花薊馬數量的比較

2.4 藍板放置高度對西花薊馬誘集效果的影響

由圖4 可知，當藍板懸掛高度始終為55 cm 時，各時間段的西花薊馬檢出率均是3 個處理中最低的；烤煙生長發育前期（5 月5 日和5 月15 日）煙株較矮小，藍板高度為55 cm 的處理未檢測到西花薊馬，而與煙株頂端齊平的處理西花薊馬檢出率最高；5月25 日以后，藍板高度為85 cm 的處理西花薊馬檢出率最高，其次是與煙株頂端齊平的處理。這說明應該根據烤煙的生長狀況適時調節藍板的懸掛高度從而得到更好的誘集效果，在生長發育前期可以采取與煙株頂端齊平的懸掛高度，5 月下旬以后可以采取85 cm 的懸掛高度。

圖4 不同懸掛高度處理的西花薊馬檢出率比較

3 結論與討論

薊馬等煙田害蟲是番茄斑萎病病毒的主要傳播媒介[12]，煙草育苗棚內及周邊懸掛藍色或黃色粘蟲板，可對薊馬進行有效的監測和防治，對番茄斑萎病具有明顯的防效。薊馬的發生，易造成煙苗大量死亡以及后期大田煙株感染病毒病，在今后的烤煙病蟲害防治工作中應引起重視。2022 年5—6 月，試驗區域各批次藍板上均能檢測到西花薊馬，西花薊馬檢出率最高的是5 月24 日的第4 批次樣品，檢出率為（20.79±0.12）%，最低的是6 月30 日的第10批次樣品，檢出率為（4.22±0.16）%。從10 批次藍板樣品中西花薊馬的檢出率可以看出，5—6 月田間西花薊馬種群數量呈先增加后下降的趨勢，5 月中下旬達到高峰，該時期是防治西花薊馬的關鍵時期。對比5 月和6 月藍板誘集的西花薊馬檢出率也表明西花薊馬在5 月的危害較嚴重，可在5 月上旬加強對其成蟲的防治。

利用昆蟲對顏色的趨向性，人類很早就開始用色板誘殺害蟲。由于薊馬在田間呈聚集分布[13]，因此同一種植區不同煙田煙株受害率可能有所差異。試驗結果顯示，健康煙株藍板誘集的西花薊馬檢出率極顯著低于感病煙株的檢出率，由此推測西花薊馬的數量與番茄斑萎病的發生流行可能存在一定的相關性。因此，防控西花薊馬種群數量成為減輕煙田病毒病發生的有效舉措。

研究還對藍板適宜懸掛高度進行了探索，結果表明在煙株生長過程中，應該根據煙草的生長狀況適時調節藍板的懸掛高度，從而得到更好的誘集效果。在生長發育前期可以采取與煙株頂端齊平的懸掛高度，5 月下旬以后可以采取85 cm 的懸掛高度。當然，該研究只監測了一片煙田的西花薊馬田間發生種群動態，其結果有一定的偶然性，因此還需要進一步擴大監測的時間和地域范圍，并結合田間調查綜合分析。