復合微生態制劑對公犢牛腎陽虛功能性腹瀉療效觀察

馬尚杰，馬 強，張 晉

（甘肅省家畜繁育改良管理站，甘肅武威 733000）

21 世紀以來，微生態制劑研發一直是行業內的研究熱點。眾多研究表明微生態制劑可以提高飼料轉化率并提升動物免疫力，但其對幼齡家畜消化道疾病的預防、治療方面臨床應用甚少[1,2]。微生態制劑具有無毒、不產生耐藥性，長期存活于消化道等優點，在疾病診療中是最理想的抗生素替代品，因此利用微生態制劑治療疾病具有一定科研價值[3,4]。腎陽虛是最為常見的犢牛腹瀉病類型，且公犢牛臨床癥狀表征突出，以公犢牛腎陽虛功能性腹瀉病癥為基礎研究微生態制劑對消化系統的干預作用最具代表性。本文旨在建立腎陽虛功能性腹瀉公牛犢模型，并用復合微生態制劑對其進行治療，為復合微生態制劑的科研提供藥理學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 微生態制

復合微生態制劑配方：枯草芽孢桿菌+植物乳桿菌+低聚果糖。單一微生態制劑配方：枯草芽抱桿菌制劑（活菌數109CFU/g）。

1.1.2 試驗動物

雄性3 月齡內公犢牛72 頭（中國農業科學院蘭州獸醫研究所提供），體重(100±20)kg，飼養于武威市牛樂有限責任公司養殖場，自由飲水和采食。

1.1.3 試驗器材

采血針、手術刀、醫用手套、一次性注射器、電子體溫計、真空采血管、電子天平、冷凝回流裝置、實驗室專用超純水機CREAT、SHZ循環水真空泵、恒溫箱和電冰箱等。

1.1.4 主要試劑

75%酒精（批號201910087）購自于甘肅蘭州生工生物技術有限公司生產；甲醛（批號20190106）購自北京化工廠生產；水合氯醛（批號20190620）購自于北京北方生物技術有限公司生產。

1.2 試驗方法

1.2.1 預試驗

選西門塔爾公犢牛12 頭，隨機分為3 組，分別為：對照組、模型組、復合微生態制劑組。除腎陽虛功能性腹瀉模型組采取肌肉注射氫化可的松以外，其余均進行灌服給藥，給藥前后測體溫、體重，預試驗為期7d。

1.2.2 正式試驗

挑選72 頭公牛犢，隨機分為6 組，對照組、復合微生態制劑高、中、低劑量組、單一組和腎陽虛模型組，各組處理方式見表1。各組公犢牛體重進行t 檢驗，P=0.378＞0.05，差異不顯著，說明各組之間犢牛體質量差別不會對試驗結果造成影響。犢牛分群飼養，接受自然光照，可自由飲水和采食。公犢牛基礎日糧與飼養管理按《實驗動物 中國地鼠飼養管理》（DB14/T 1945—2019）標準執行。正式試驗于2023 年6 月15 日至8 月3 日進行，共計50d。

表1 各試驗組處理劑量

1.2.3 公犢牛臨床癥狀觀察

造模和給藥前對72 頭公犢牛進行體溫和體重的測量，觀察并記錄其精神狀態，采食量，飲水量，體毛光澤度和是否有蜷縮，弓背姿態等一般臨床癥狀。給藥和造模1h 后，再測量體重和體溫，觀察是否出現蜷縮弓背姿態等一般理指標。

1.2.4 公犢牛的剖檢和采樣

試驗第25、50 天觀察犢牛腹瀉情況，用羅馬Ⅳ標準診斷，計算腹瀉發病率。給藥共計50d，第50 天給藥結束后，注射水合氯醛麻醉公犢牛后頸靜脈采血，以4000r/min 離心15min 分離血清；處死公犢牛后，每組選4 頭體重差異較小公犢牛，取腎臟、睪丸、丘腦、垂體、下丘腦稱重并采樣于甲醛溶液中固定。

1.2.5 數據分析

上述記錄的數據錄入Excel 2010，由他人核查數據，保證數據的高度精確后，導入SPSS 21.0 進 行t 檢 驗，P＜0.05 表示差異顯著。試驗數據用“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 預試驗結果

由表2 可知，灌服后腎陽虛功能性腹瀉模型組、微生態組與對照組相比，體溫、體重顯著降低（P＜0.05），說明微生態制劑可能對公犢牛體溫、體重具有一定影響。

表2 預試驗用藥前后平均體重和平均溫度

2.2 正式試驗結果

2.2.1 一般臨床癥狀

對照組公犢牛在試驗流程中被毛光滑潔白、活動性高、食欲飲水良好；模型組漸漸出現精神萎靡、倦怠少動、弓背豎毛、體溫與體重度降低等癥狀，伴隨給藥天數的延長，上述癥狀日益明顯，且出現不同程度的腹瀉，表明模型建立成功；復合微生態制劑組與單一組無肉眼可見臨床癥狀變化。

2.2.2 用藥后對公犢牛體重、體溫、腹瀉率和臟器系數的影響

由表3 可知，模型組與空白組相比體重顯著降低（P＜0.05），表明腎陽虛功能性腹瀉證公犢牛體重增長緩慢；高劑量組與單一組相比，體重顯著升高（P＜0.05），表明復合微生態制劑與單一促進腎陽虛功能性腹瀉公犢牛體重增長，而且復合微生態制劑的促進效果隨用藥劑量升高而提升。

表3 用藥后公犢牛體重、體溫、腹瀉率和臟器系數對比

模型組與空白組相比體溫差顯著降低（P＜0.05），與腎陽虛功能性腹瀉臨床癥狀畏寒肢冷是相互一致的，證明本試驗模型建立成功；復合微生態制劑低劑量組、高劑量組與模型組體溫相比顯著升高（P＜0.05），表明復合微生態制劑與單一均能促進公犢牛產熱致使體溫升高，且復合微生態制劑明顯優于單一微生態制劑。

模型組下丘腦和垂體臟器系數均高于對照組（P＜0.05），表明腎陽虛功能性腹瀉損傷公犢牛下丘腦-腺垂體系統功能，抑制神經、體液性聯系；復合微生態制劑高劑量組與模型組相比，下丘腦和垂體臟器系數明顯偏高（P＜0.05），表明復合微生態制劑對下丘腦與垂體作用效果明顯，能調節腎陽虛模型公犢牛下丘腦與垂體的機能。

模型組與空白組相比，睪丸指數顯著降低（P＜0.05），且均低于其他組，表明腎陽虛證引起睪丸萎縮，降低睪丸質量。單一組、復合微生態制劑與對照組相比，睪丸質量無顯著差異（P＞0.05），表明單一微生態制劑與復合微生態制劑對腎陽虛證引起的睪丸萎縮均有療效。

腎陽虛模型組腹瀉率最高（44.81%），證明公犢牛腎陽虛癥狀常伴隨腹瀉的出現；復合微生態制劑組和單一組腹瀉率明顯低于模型組，證明微生態制能降低腹瀉的發生。第50 天時復合微生態制中劑量試驗組與對照組相比，腹瀉率降低，但低劑量、高劑量組高于對照組，低于單一組和模型組，證明微生態制劑對腎陽虛功能性腹瀉有一定治療作用。

3 結論

復合微生態制劑與單一枯草芽抱桿菌制劑均能改善公犢牛腎陽虛功能性腹瀉臨床癥狀，增加公犢牛體重、下丘腦和垂體指數，提升公犢牛體溫，改善機體下丘腦—垂體—睪丸軸的功能，從而降低腹瀉的發生。在體溫調節方面，復合微生態制劑療效整體優于單一枯草芽抱桿菌制劑。復合微生態制劑給藥量10.2g/(kg·d)時治療腎陽虛功能性腹瀉效果最佳。