解郁止痛方對偏頭痛—抑郁共病模型大鼠行為學及腦組織中Iba1/RhoA蛋白表達的影響*

申莉鐸，張慧，邵笑笑，蔣若琛，簡芋鑫

（1.陜西中醫藥大學，咸陽 712046；2.陜西中醫藥大學附屬醫院，咸陽 712000）

偏頭痛是一種常見的以單側或雙側搏動性中度或重度為主的原發性頭痛，在現代社會中廣泛存在[1-2]，嚴重影響了人類的生活質量，對人類的健康造成了極大影響。有數據表明，在當今社會，越來越多的人飽受偏頭痛的折磨，偏頭痛的患病率也逐步上升，其在全世界年患病率高達18%，在中國患病比例為9.3%[3-4]。此外，偏頭痛不僅對人體傷害巨大，還可與多種疾病共病，進一步給人體生理、心理帶來極大創傷。抑郁是偏頭痛病程中一種常見的并發疾病[5]，與其他正常人群相比，偏頭痛患病人群抑郁的發病率風險增加（OR=5.8），同時，抑郁患病人群并發偏頭痛的風險也呈增加趨勢（OR=3.4），由此可見，偏頭痛與抑郁共病具有雙向性，兩者常相伴存在，互相影響[6]，對人類的生活質量產生嚴重的影響，進一步對社會生產力造成影響。因此，偏頭痛-抑郁共病的預防與治療尤為重要，現代臨床對于偏頭痛-抑郁共病暫無明確、有效、規范的認識，關于其發病機制的研究也較貧乏，臨床多以西醫治療為主，西藥多副作用大，且癥狀改善不明顯。中醫治療疾病具有個體差異，且多藥聯合可多靶點發揮作用，并可減輕西藥帶來的不良作用，有效防治偏頭痛-抑郁共病對個人及社會的危害，提高社會生產力。有研究表明，偏頭痛與抑郁兩者之間常相伴存在可能與其受相同的腦組織調控有關，偏頭痛-抑郁患者腦組織海馬及杏仁核等均發生了明顯改變[7-8]。疼痛與抑郁有共同的傳導通路，中樞神經系統痛覺信息傳導通路中神經元敏化可產生皮膚異常性疼痛伴隨強烈的負性情緒。小膠質細胞是中樞神經系統中固有的免疫效應細胞，在維持腦內穩態和神經炎癥反應中發揮重要作用。電離鈣結合適應分子1（Iba1）是小膠質細胞分子標記物，激活后表達增加[9]，神經再生抑制因子Ras 同源物基因A（RhoA）與下游Rho 蛋白激酶（ROCK）的相互作用可阻止中樞神經再生，加重神經元受損[10]。解郁止痛方在治療偏頭痛—抑郁共病疾患方面有著顯著療效，但其作用機制尚不明確。相關研究表明，偏頭痛—抑郁共病大鼠模型中大鼠腦組織杏仁核內Iba1 及RhoA蛋白含量均顯著升高[11]，本實驗主要研究偏頭痛—抑郁共病大鼠模型行為學改變及腦組織杏仁核內Iba1/RhoA 蛋白的含量，探究偏頭痛—抑郁共病大鼠的發病機制及解郁止痛方治療偏頭痛—抑郁共病疾患的分子機制，以期為臨床偏頭痛—抑郁共病疾患的防治提供可靠依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康雄性SD 大鼠54 只，體質量（200±20）g，由成都達碩實驗動物有限公司提供。合格證書號：SCXK（川）2022-002。實驗前于陜西中醫藥大學動物實驗中心適應性喂養1 周，實驗中心動物房于8:00-20:00 光照、20:00-8:00 黑暗，實驗室溫度（23±1）℃，濕度（50±5）%，喂養期間自由飲食，飲自來水，食標準顆粒飼料。

1.2 藥物和試劑 解郁止痛方（由川芎12 g，柴胡10 g，合歡皮10 g，全蝎6 g，黃芪10 g 組方），由陜西中醫藥大學校醫院制劑中心提供；硝酸甘油注射液，規格1 mL∶5 mg，山東華信制藥有限公司；國藥準字：H37021469；尼莫地平片，規格：20 mg/片，廣東華南藥業集團有限公司，國藥準字：H44025019。

Iba1 抗體，兔克隆抗體，貨號：GTX100042，genetex；RhoA 抗體，鼠克隆抗體，貨號：66733-1-lg，proteintech；β -actin 抗體，兔克隆抗體，貨號：AC026，abclonal；生物素化山羊抗鼠IgG（H+L），貨號：ab6789，英國abcam 艾博抗（上海）貿易有限公司；生物素化山羊抗兔IgG （H+L），貨號：s0001，affinity；1.0 mol/L Tris-HCl（pH=8.8）電泳緩沖液、PBS磷酸鹽緩沖液、RIPA 裂解液（強），貨號：G2002-100 mL，servicebio；BCA 蛋白濃度測定試劑盒，貨號：P0009，beyotime；PAGE 凝膠快速制備試劑盒，貨號：PG112，上海雅酶生物科技有限公司；甘氨酸，貨號：G5010-500 g，servicebio；Tris-base，貨號：1115GR500，Biofroxx；SDS，貨號：1275GR500，Biofroxx；氯化鈉，天津市致遠化學試劑有限公司。

1.3 主要儀器 電子天平（上海民橋公司）；2390系列電子VonFrey 測痛儀（美國ITLife Science 公司）；JY-SCZ4+型垂直電泳槽、JY200C 型電泳儀（北京君意東方電泳設備有限公司）；TY-80A 型水平脫色搖床（江蘇科析儀器有限公司）；5200 型化學發光凝膠成像儀（上海天能科技有限公司）；MK3 型全功能酶標儀（美國ThermoFisher 儀器有限公司）；DW-86L386 型超低溫冰箱（海爾集團）；H2050R 高速低溫離心機（湘儀集團）；優普超純水制造系統（成都超純科技有限公司）；KZ-Ⅲ-F 型高速低溫組織研磨儀（武漢賽維爾生物科技有限公司）；HI1210 型水浴鍋（德國Leica 公司）。

1.4 實驗方法 健康SD 實驗大鼠適應性喂養1 周，1 周后將54 只大鼠隨機分為6 組（空白組、模型組、西藥組、中藥解郁止痛方低、中、高劑量組），每組9 只。實驗開始第1 天，除空白組外，其余5 組復制偏頭痛模型，按照偏頭痛間斷性發作特點，于實驗開始第1、7、14、21 天分別在大鼠頸背部皮下注射硝酸甘油注射液（硝酸甘油注射液用生理鹽水稀釋為10 mg/kg），偏頭痛造模成功的標志為：大鼠頸背部注射硝酸甘油注射液20 min 后，大鼠耳朵發紅，前肢搔頭動作和攀籠次數增多[12]。偏頭痛模型復制成功7 天內，每天對除空白組外其余5 組大鼠進行一種隨機不重復慢性不可預知性刺激誘導偏頭痛-抑郁共病大鼠模型[13]。1）晃籠：200 Hz 10 min。2）夾尾：將大鼠分籠放置，使用夾取力度相同且適中的鼠尾夾，在距大鼠尾巴根部1 cm 處夾緊，時間4 min。3）濕籠：在籠子里撒100 mL 水，至墊料全部濕透，持續24 h。4）冰水游泳：將4 ℃冷水加入水深15 cm的水桶，放入大鼠8 min 后取出，其間保證大鼠的足尖可以碰到水桶的底部但不能越出水桶。5）電擊足底：電壓38 V 每次1 s 間隔2 s 刺激1次持續2 min。6）斜籠：將動物籠傾斜45°放置，持續24 h。7）禁食、禁水：禁食、禁水24 h。通過觀察大鼠搔頭及攀籠次數、礦場實驗、糖水消耗實驗、強迫游泳實驗、新奇抑食實驗等行為學檢測評分判斷偏頭痛-抑郁共病大鼠造模是否成功[13]。實驗開始造模同時予以藥物灌胃干預，空白組以純水灌胃，模型組以0.9% NaCl溶液灌胃，西藥組以尼莫地平尼混懸液6 mg/kg灌胃，中藥低、中、高劑量組分別予以解郁止痛方（0.25 g/100 g、0.5 g/100 g、1.0 g/100 g）灌胃，每日1 次，共21 d。

1.5 檢測指標與方法

1.5.1 行為學評分 于實驗造模前第0 天、造模治療中第10 天、造模治療后第21 天分別測量實驗各組大鼠以下行為學。

1.5.1.1 體質量 分別測量各組大鼠體質量并記錄。

1.5.1.2 曠場試驗 準備長、寬各100 cm，高50 cm的敞口紙箱，并將其內壁四面均勻涂黑，內底等分為25 個正方形。將大鼠沿一側內壁放置于紙箱中，適應2 min 后觀察4 min 內其爬過的方塊數量（四肢同時經過）及直立次數（雙側前肢離開地面或爬于側壁）評分[14]。各組大鼠依次檢測，檢測過程中盡量保持安靜以確保實驗準確性，并用視頻記錄檢測結果，每次檢測前保證紙箱干凈無排泄物。分析各組大鼠曠場水平及垂直運動評分之間的差異。

1.5.1.3 糖水消耗實驗 實驗前準備兩只500 mL水瓶，一只瓶身標注糖水，另一只標注純水。每次評估前24 h 對大鼠實行糖水攝入適應性訓練，即每籠同時放2 個瓶內均裝有1%蔗糖水500 mL 的水瓶。24 h 后，一只瓶內仍裝1%蔗糖水500 mL、另一只瓶內裝純水500 mL。24 h 后，取走水瓶，分別記錄每只大鼠的總液體攝入量、糖水攝入量、純水攝入量。計算其糖水偏好百分率（糖水偏好百分率＝糖水攝入量/總液體攝入量×100%）[14]。比較各組大鼠糖水偏好差異。

1.5.1.4 強迫游泳實驗 檢測前準備一長方形塑料桶（桶長100 cm 寬50 cm 高50 cm），桶內放置高40 cm 23～25 ℃的水。將同組大鼠依次放入水中，強迫其游泳8 min，大鼠被動漂浮在水中，將其在水中停止掙扎3 s 以上規定為不動狀態，記錄大鼠不動時間[14]，分析各組之間的差異。

1.5.1.5 新奇抑食實驗 實驗前大鼠禁食1 d，不禁水，準備1 個50 cm×40 cm 的箱子，在箱子中央放置數枚大小相似的食標準顆粒飼料，每次從箱子的同一個角放入大鼠，記錄大鼠第一次咬食的時間[15]。分析各組大鼠新奇抑食-潛伏時間之間的差異。

1.5.2 機械痛閾的測定 實驗開始第1、7、14、21 天復制偏頭痛模型前測量各組實驗大鼠的機械痛閾值。機械痛閾的測定：將各組大鼠依次放置于底部具有網狀金屬孔格的透明測試籠中，適應5 min，待大鼠趨于安靜后用Vonfrey 纖維絲緩慢輕柔地刺激大鼠左后肢足底中部，持續幾秒，觀察大鼠縮足反應，記錄引起爪子回縮的最小閾值，機械痛閾值均每只測量3 次，每次測量應間隔5 min，取其均值[15]。

1.5.3 Western blot 檢測各組大鼠模型腦組織杏仁核中Iba1 及RhoA 蛋白的含量 實驗第21 天造模治療結束后，腹腔注射麻藥麻醉大鼠，腹主動脈采血約4 mL，室溫凝固20 min，離心機3 000 g 離心20 min，ep 管收集離心后血清進行分裝，置于-80 ℃冰箱保存。取血后大鼠用0.9%Nacl 心臟灌注以置換出全身血液，隨后進行斷頭取腦，取出的腦組織在-20 ℃冰箱加以凝固后依照大鼠腦解剖圖譜將杏仁核取出并稱質量，放于2 mL 離心管中液氮速凍后轉-80 ℃冰箱保存。于WB 檢測時將樣本取出放入2 mL 研磨管中，向每管加入3 mm 鋼珠及RIPA 裂解液（按照質量比樣本：裂解液=1∶10），置于高速低溫組織研磨儀內（溫度-20 ℃，研磨4 次，每次60 s）；取出放4 ℃冰箱30 min 進行裂解，30 min 后取出放入離心機（4 ℃、12 000 g 離心、10 min）；離心完后取上清液，通過BCA 蛋白定量試劑盒進行分析、蛋白變性、上樣、電泳、轉膜、封閉、孵育抗體、顯影定影等步驟以檢測大鼠腦組織杏仁核中Iba1 及RhoA蛋白的水平。

1.6 統計學處理 實驗數據均采用SPSS 22.0 軟件進行統計學分析。計量數據均符合正態分布，將其按均數±標準差（±s）表示，組間比較采用One－Way ANOVA 單因素方差分析，P＜0.05 則有統計學意義，差異顯著。

2 結果

2.1 大鼠體質量比較 在造模治療前（第0 天）各組大鼠體質量均差異無統計學意義（P＞0.05）。在造模治療第10 天、21 天，與空白組相比，模型組大鼠體質量明顯下降（P＜0.01）；與模型組相比，中藥低劑量組大鼠體質量增加（P＜0.05），西藥組、中藥中劑量及高劑量組大鼠體質量顯著升高（P<0.01）。見表1。

表1 大鼠體質量比較（±s） g

表1 大鼠體質量比較（±s） g

注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 數量（n） 第0 天 第10 天 第21 天空白組 7 234.84±18.23 263.84±19.18 277.25±22.77模型組 7 239.40±10.17 221.56± 9.98## 229.16±17.16##西藥組 7 227.67±12.64 242.75±13.88** 251.17±14.02**中藥低劑量組 7 234.13± 8.91 229.11±10.79* 233.27±15.09*中藥中劑量組 7 239.52± 9.88 250.11±13.95** 254.94±18.94**中藥高劑量組 7 235.21±10.38 256.04±16.86** 268.43±22.43**

2.2 大鼠曠場實驗評分比較 造模治療前（第0 天），各組大鼠曠場實驗的水平及垂直運動評分均無統計學的差異（P＞0.05）。造模治療第10 天、21 天，與空白組相比，模型組大鼠水平及垂直運動評分均下降（P<0.01）；與模型組相比，西藥組及中藥各劑量組大鼠水平及垂直運動評分均顯著升高（P<0.01）。見表2，表3。

表2 大鼠礦場實驗水平運動評分比較（±s） 次

表2 大鼠礦場實驗水平運動評分比較（±s） 次

注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 第0 天 第10 天 第21 天空白組 7 74.92±10.35 70.75±10.82 71.33±12.07模型組 7 77.50± 8.15 18.26± 3.54## 26.83± 6.19##西藥組 7 71.25± 9.11 50.92±10.93** 53.00± 7.02**中藥低劑量組 7 72.67±12.14 39.05± 7.79** 42.73± 9.15**中藥中劑量組 7 70.66± 9.70 46.36±10.91** 48.50± 8.41**中藥高劑量組 7 72.92±11.14 63.62± 8.37** 65.18±10.35**

表3 大鼠礦場實驗垂直運動評分比較（±s） 次

表3 大鼠礦場實驗垂直運動評分比較（±s） 次

注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 第0 天 第10 天 第21 天空白組 7 16.33±4.55 18.42±3.82 19.00±3.21模型組 7 18.92±3.33 3.58±3.10## 5.67±2.80##西藥組 7 17.00±4.31 10.18±2.35** 12.50±3.40**中藥低劑量組 7 18.41±4.69 9.43±2.93** 11.44±3.65**中藥中劑量組 7 18.13±3.81 10.36±3.05** 12.67±2.99**中藥高劑量組 7 17.92±3.38 12.78±3.36** 13.41±3.05**

2.3 大鼠糖水偏好百分率比較 造模治療前（第0 天）各組大鼠的糖水偏好百分率均無統計學差異（P>0.05）。造模治療第10 天，與空白組相比，模型組大鼠糖水偏好百分率降低（P<0.01）；與模型組相比，西藥組及中藥各劑量組大鼠糖水偏好百分率均顯著升高（P<0.01）。造模治療第21 天，與空白組相比，模型組大鼠糖水偏好百分率降低（P<0.01）；與模型組相比，中藥低劑量組大鼠糖水偏好百分率升高（P<0.05），西藥組、中藥中劑量及高劑量組大鼠糖水偏好百分率均顯著升高（P<0.01）。見表4。

表4 大鼠糖水偏好百分率比較（±s） %

表4 大鼠糖水偏好百分率比較（±s） %

注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 第0 天 第10 天 第21 天空白組 7 80.79±5.11 82.21± 5.28 82.03±5.30模型組 7 79.90±4.37 48.10± 5.03## 50.91±4.43##西藥組 7 77.82±4.89 66.62± 6.21** 73.22±5.26**中藥低劑量組 7 78.70±4.93 67.51± 7.13** 70.14±7.45*中藥中劑量組 7 78.10±6.15 69.35±11.10** 75.00±9.20**中藥高劑量組 7 77.92±6.32 71.20± 7.24** 74.09±6.11**

2.4 大鼠強迫游泳實驗比較 造模治療前（第0 天）各組大鼠的強迫游泳實驗均差異無統計學意義（P>0.05）。造模治療第10 天，與空白組相比，模型組大鼠游泳不動時間延長（P<0.01）；與模型組相比，西藥組及中藥各劑量組大鼠游泳不動時間均顯著縮短（P<0.01）。造模治療第21 天，與空白組相比，模型組大鼠游泳不動時間延長（P<0.01）；與模型組相比，中藥低劑量組大鼠游泳不動時間縮短（P<0.05），西藥組、中藥中劑量及高劑量組大鼠游泳不動時間均顯著縮短（P<0.01）。見表5。

表5 大鼠游泳不動時間比較（±s） s

表5 大鼠游泳不動時間比較（±s） s

注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 第0 天 第10 天 第21 天空白組 7 77.75±10.21 76.90±13.08 74.31±12.78模型組 7 76.10±13.63 113.12±12.56## 110.23±17.31##西藥組 7 79.41±11.12 96.23±11.21** 94.92±13.20**中藥低劑量組 7 70.55±15.00 102.91± 9.87** 99.24±11.49*中藥中劑量組 7 72.30±12.64 98.45±18.07** 96.33±18.01**中藥高劑量組 7 74.34±14.48 96.17±12.49** 92.12± 9.93**

2.5 大鼠新奇抑制攝食-潛伏時間比較 造模治療前（第0 天）各組大鼠的潛伏時間均差異無統計學意義（P>0.05）。造模治療第10 天，與空白組相比，模型組大鼠新奇抑食-潛伏時間延長（P<0.01）；與模型組相比，西藥組及中藥各劑量組大鼠新奇抑食-潛伏時間均顯著縮短（P<0.01）。造模治療第21 天，與空白組相比，模型組大鼠新奇抑食-潛伏時間延長（P<0.01）；與模型組相比，中藥低劑量組大鼠新奇抑食-潛伏時間縮短（P<0.05），西藥組、中藥中劑量及高劑量組大鼠新奇抑食-潛伏時間均明顯縮短（P<0.01）。見表6。

表6 大鼠抑制攝食-潛伏時間比較（±s） s

表6 大鼠抑制攝食-潛伏時間比較（±s） s

注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 第0 天 第10 天 第21 天空白組 7 36.83±11.63 37.23±13.08 39.11±12.88模型組 7 31.16± 7.24 49.01±12.56## 47.20± 7.35##西藥組 7 35.42± 9.36 38.49±15.11** 37.09± 8.26**中藥低劑量組 7 37.19± 8.06 39.64±11.88** 38.34±13.23*中藥中劑量組 7 34.99±14.91 35.42±14.26** 34.75±15.01**中藥高劑量組 7 32.77±12.40 33.66± 8.63** 31.27± 9.80**

2.6 大鼠機械痛閾值比較 造模治療第1 天，各組大鼠的機械痛閾值比較均差異無統計學意義（P>0.05）。造模治療第7 天，與空白組相比，模型組大鼠機械痛閾值明顯降低（P<0.01）；與模型組比較，西藥組及中藥各劑量組大鼠機械痛閾值明顯升高（P<0.01）。造模治療第14 天，與空白組相比，模型組大鼠機械痛閾值顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，西藥及中藥高劑量組大鼠機械痛閾值升高（P<0.05），中藥低、中劑量組大鼠機械痛閾值明顯升高（P<0.01）。造模治療第21 天，與空白組相比，模型組大鼠機械痛閾值明顯下降（P<0.01）；與模型組比較，西藥及中藥低劑量組大鼠機械痛閾值升高（P<0.05），中藥中、高劑量組大鼠機械痛閾值顯著升高（P<0.01）。見表7。

表7 大鼠機械痛閾值比較（±s） g

表7 大鼠機械痛閾值比較（±s） g

注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 第1 天 第7 天 第14 天 第21 天空白組 7 43.75±5.32 42.65±2.53 41.17±4.72 41.98±3.99模型組 7 40.12±5.11 21.03±3.34## 22.75±3.64## 19.22±3.13##西藥組 7 38.22±6.15 37.44±4.11** 33.21±5.44* 31.15±4.32*中藥低劑量組 7 42.68±4.29 36.10±5.73** 35.14±6.19** 33.74±4.85*中藥中劑量組 7 39.97±6.42 38.50±6.31** 37.84±7.21** 35.95±6.37**中藥高劑量組 7 41.32±4.03 37.21±5.45** 33.50±5.03* 31.91±4.36**

2.7 大鼠杏仁核組織Iba1 及RhoA 蛋白表達結果 造模治療結束后，檢測大鼠杏仁核組織Iba1 蛋白的表達水平，與空白組相比，模型組大鼠杏仁核組織中的Iba1 升高，但差異無統計學意義（P>0.05）；與模型組相比，西藥組及中藥各劑量組大鼠杏仁核組織中的Iba1 蛋白表達呈下降趨勢，但差異無統計學意義（P>0.05）。檢測大鼠杏仁核組織RhoA蛋白表達水平，與空白組相比，模型組大鼠杏仁核中的RhoA 蛋白表達顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，中藥低劑量組大鼠杏仁核組織中的RhoA 蛋白表達無明顯差異（P>0.05），中藥中劑量組大鼠杏仁核組織中的RhoA 蛋白表達降低（P<0.05），西藥組及中藥高劑量組大鼠杏仁核組織中的RhoA 蛋白表達顯著降低（P<0.01）。見表8，圖1。

圖1 大鼠杏仁核組織中Iba1 及RhoA 蛋白的表達水平

表8 大鼠杏仁核中Iba1 及RhoA 蛋白表達比較（±s）

表8 大鼠杏仁核中Iba1 及RhoA 蛋白表達比較（±s）

注：與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

RhoA 蛋白相對表達空白組 3 1.075 7±0.131 1 0.887 0±0.195 7模型組 3 2.793 6±0.696 3 4.921 0±0.951 3##西藥組 3 1.459 0±0.271 1 2.203 9±0.484 4**中藥低劑量組 3 2.037 0±0.525 7 4.171 1±1.011 3中藥中劑量組 3 1.968 2±0.331 2 3.521 7±0.775 6*中藥高劑量組 3 1.569 7±0.094 3 1.681 6±0.178 2**組別 n Iba1 蛋白相對表達

3 討論

偏頭痛是臨床上常見的致殘性疾病之一。隨著現代社會壓力的增加，偏頭痛的患病人數逐年增加并趨于年輕化，偏頭痛反復頻繁發作且嚴重時使人喪失生活能力[16]。久而久之，患者產生負面情緒，影響患者的身心健康，致使很大一部分患者產生抑郁，進而導致偏頭痛與抑郁共病疾患，使其喪失勞動生產力，減少了社會生產率，對社會經濟造成極大影響。因此，應盡早對偏頭痛-抑郁共病進行普及與預防，重視中醫藥治療。

中醫認為肝主疏泄、主藏血。肝臟疏泄功能失調，影響人體氣機，使情志產生變化。肝疏泄失調，氣行不順，致使體內肝氣瘀滯，使人出現情緒低落、喜嘆氣、胸脅兩肋脹痛等癥狀；情志不舒，氣郁于內，進而化火，肝火上炎出現面紅耳赤、耳鳴、頭脹頭痛等。肝藏血功能受損，肝血不足，可出現頭暈目眩、心煩意亂等；肝氣血不足，周身氣血運行不暢，日久損傷正氣，出現濕氣、痰濁、內熱、淤血等病理產物[17]，發為頭痛抑郁共病。解郁止痛方是治療偏頭痛—抑郁共病效果顯著的驗方。該方以川芎、柴胡共同組成君藥，川芎辛溫升散功用活血行氣、祛風止痛，《醫學啟源》有“頭痛需用川芎”之說，酒制川芎，可增強其止痛之功?，F代醫學研究表明；川芎中含有的阿魏酸鈉及川芎嗪可明顯抑制偏頭痛活性[18]。此外，川芎嗪還有抗炎、防止細胞老化及營養神經等功能[19-21]。柴胡可疏肝解郁，疏散退熱，其性升散，古有“柴胡劫肝陰”之說；現代藥理學研究表明：柴胡含有的皂苷、多糖、黃酮等具有抗炎、抗抑郁及保護心、肝、腎臟器的作用[22-24]。兩者共用疏肝調肝止痛功用更甚。合歡皮為臣，歸心、肝、肺經，功用解郁安神活血，提取物合歡皮總皂苷可鎮靜寧心安神，對于郁癥引起的心神不寧、失眠多夢效果甚佳。黃芪可益氣生津養血，含有的黃芪多糖等對機體免疫、造血功能及心腦血管系統等均具有良好的保護作用，偏頭痛—抑郁病癥纏綿難愈，久病易耗傷元氣，而《本草綱目》言黃芪“耄，長也，黃耄色黃，為補藥之長”，故黃芪可扶正氣以驅邪。全蝎歸肝經，功用息風鎮痙、通絡止痛，可應用于風濕頑痹及偏正頭痛，其含有的三甲胺、甜菜堿及?；撬岬瓤涉傡o安神、抗驚厥、抗血栓及鎮痛等。全方中諸藥和用共奏疏肝活血、理氣補氣之功。

偏頭痛所表現出來的疼痛是發作性的鈍痛，其嚴重程度可能與患者負面情緒密切相關[25]。研究表明，疼痛和抑郁疾患均與杏仁核之間有不可分割的關系，杏仁核不僅可參與疼痛及抑郁的生理過程，還能調控情緒并記錄與儲存所發生的情感事件[26]。因此，它參與對疼痛刺激的編碼和調節，從而在痛與鎮痛中均起重要作用。

現代醫學對于偏頭痛-抑郁共病疾患的病理機制尚不完全清楚。有研究發現，偏頭痛的發病機制與小膠質細胞活化有很大關系。小膠質細胞占據神經膠質細胞的5%-20%，小膠質細胞被激活后，會產生大量的神經遞質（腦源性神經營養因子、腫瘤壞死因子、白細胞介素等）提高神經興奮作用，神經興奮性增強導致痛覺過敏進而產生偏頭痛[27]。Iba1被認為是小膠質細胞激活的標志，它是結合特殊信號傳遞的信號分子，是一種特異性的鈣結合蛋白，可捆綁肌動蛋白活性、參與小膠質細胞的重塑并在激活的小膠質細胞中調控細胞的遷移、膜褶皺及吞噬。RhoA 是一種小分子G 蛋白，在活性（GTP 結合）和非活性（GDP 結合）形式之間循環。GTP-RhoA 通過與下游Rho 蛋白激酶ROCK 的相互作用參與調控細胞功能。Rho 蛋白激酶ROCK 抑制劑可改變小膠質細胞極化、增強小膠質細胞吞噬能力，降低神經病理學疼痛的發生，表明ROCK 介導偏頭痛的病理作用，但對于RhoA 參與偏頭痛的發生無明確研究。因此本實驗通過硝酸甘油注射液及不同刺激誘導偏頭痛—抑郁共病大鼠模型，予以中醫藥的治療來研究偏頭痛—抑郁共病大鼠行為學及腦組織杏仁核內Iba1 及RhoA 蛋白含量的變化。

本實驗研究結果顯示：解郁止痛方能明顯改善偏頭痛—抑郁共病模型大鼠體質量、曠場實驗水平和垂直運動評分、糖水偏好程度，降低強迫游泳不動時間及新奇抑食—潛伏時間，減少偏頭痛發作時的撓頭、攀籠次數，降低機械痛閾值。偏頭痛—抑郁共病模型組大鼠腦組織杏仁核內Iba1 及RhoA 蛋白表達水平明顯升高，表明兩者共病可能由發生中樞敏化激活小膠質細胞介導Iba1/RhoA/ROCK 信號通路引發，而解郁止痛方能夠有效降低本實驗模型大鼠腦組織杏仁核內Iba1 及RhoA 的蛋白表達水平，推測解郁止痛方可能通過抑制Iba1/RhoA/ROCK 信號通路激活，減少中樞敏化，從而抑制小膠質細胞活化，減少炎癥反應，從而減少偏頭痛-抑郁共病的發生。