1例孕婦Bmh類孟買血型的鑒定與輸血策略

閆玉靜 廣西貴港市人民醫院輸血科 537100

1961年Levine發現了類孟買血型,類孟買血型為非常罕見的紅細胞血型,屬于Hh血型系統,是除了ABO和Rh血型系統之外的一個重要血型系統, 主要是由α-1,2巖藻糖基轉移酶FUT1基因突變引起的。血清學特點是紅細胞完全缺乏H抗原或僅有少量的H抗原存在,通過吸收放散試驗可檢測到紅細胞上弱表達的A、B、H抗原,也可能檢測不出。在日常輸血檢驗工作中常因正反定型不一致、交叉配血試驗不合而被發現,進一步進行血清學檢測基本能初步判斷為類孟買血型,基因檢測技術可最終鑒定類孟買血型。自從1979年張工梁等在我國發現第1例類孟買血型以來,國內越來越多的類孟買血型被發現并報道。現對我市發現的首例Bmh類孟買血型的血清學檢測進行分析,并探討Bmh類孟買血型孕婦的輸血策略,報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 孕婦,29歲,孕38周+2d,無輸血史,無孕產史,2020年10月26日因破羊水1h余來我院待產,常規檢查血型,發現正反定型不一致,增加H抗原檢測試驗、吸收放散試驗、不規則抗體篩查和鑒定試驗等血清學試驗后,發現患者血型疑似類孟買血型。經患者本人及其家屬知情同意后,采集患者EDTA抗凝靜脈血和唾液標本送往上級輸血研究室做進一步鑒定。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 試劑:單克隆抗A抗B血型定型試劑、單克隆抗H試劑、人ABO血型反定型用紅細胞試劑,均由上海血液生物醫藥有限責任公司提供。單克隆抗AB試劑,由法國Diagast公司提供。不規則抗體檢測試劑盒(人紅細胞),由長春博德生物技術有限責任公司提供。抗-Lea、抗-Leb試劑,由荷蘭Sanquin公司提供。O型新鮮臍帶血細胞,由實驗室自制。進口微柱凝膠血型卡,由DiaMed GmbH達亞美有限責任公司提供的達亞美血型卡。抗人球蛋白檢測卡、抗體鑒定細胞(11個譜細胞),均由長春博迅生物技術有限責任公司提供。Puregene DNA Purification Kit(美國Qiagen公司)、RBC-Ready Gene ABO試劑盒(德國Inno-train)。

1.2.2 儀器:廠商提供的配套離心機和孵育器;顯微鏡,由日本Olympus公司提供,PCR擴增儀(Gene Amp9700,美國ABI公司)。

1.3 方法

1.3.1 ABO正反定型檢測:進口微柱凝膠卡式法:將被測血標本采用低離子介質(達亞美2號稀釋液)配制成1%的紅細胞懸液,微柱凝膠卡正定型孔和ctl孔各加入50μl。反定型孔加入1%反定型細胞50μl,再加入患者血漿50μl,放置于專用離心機離心觀察結果。試管法復核嚴格按照《全國臨床檢驗操作規程》[1]進行操作。

1.3.2 H抗原檢測:采用鹽水介質試管法,患者3%的紅細胞懸液與單克隆抗-H試劑反應,標準B、O型紅細胞與單克隆抗-H試劑反應作為對照,離心后判讀結果。

1.3.3 吸收放散試驗:取1ml被檢紅細胞,用生理鹽水洗滌4次,最后一次移除所有上清液,留壓積紅細胞;加入1ml單克隆抗-B血清到洗滌好的紅細胞中,混合紅細胞和抗體,在4℃孵育2h,其間不時搖晃混勻,離心取上清液與吸收前抗B血清進行對照,倍比稀釋后加入B型標準紅細胞,離心后觀察單克隆抗-B吸收前后的效價有無變化,間接證實是否存在B抗原。使用大量的低溫生理鹽水(4℃,10ml)洗滌吸收后的壓積紅細胞多次,留取部分最后一次的洗滌上清液作為平行對照,使用3%B型標準紅細胞檢測上清液是否殘留抗B,如果有應繼續洗滌,直到沒有抗B存在。56℃熱放散10min,離心后放散液和B型標準紅細胞反應,離心后觀察有無凝集,確認是否存在B抗原。

1.3.4 不規則抗體篩查與鑒定(血清中抗H和抗HI抗體檢測): 采用鹽水介質試管法和微柱凝膠抗人球蛋白法,患者血漿分別與抗篩細胞(3個譜細胞)和抗體鑒定細胞(11個譜細胞)反應,確定血漿中是否存在不規則抗體,若不規則抗體疑為抗H或抗HI抗體時,加做新鮮O型臍帶血紅細胞反應,用以判斷血漿中的抗體,若不凝集為抗HI抗體,否則為抗H抗體。

1.3.5 紅細胞Lea、Leb抗原檢測:采用鹽水介質試管法,患者紅細胞懸液分別與抗-Lea、抗-Leb試劑反應,離心后判讀結果。

1.3.6 唾液中血型物質檢測:取適量患者的唾液,離心后取上清液,在沸水浴中靜置8～10min以去除唾液中的酶,再次離心收集清澈或輕微乳濁液。單克隆抗-A、抗-B和抗-H血清倍比稀釋,以出現“2+”凝集塊的最高稀釋度為最適稀釋度備用。用標化血清和處理后的唾液做中和抑制試驗,以檢測患者唾液中的血型物質。

1.3.7 基因檢測及FUT1基因測序:使用Puregene DNA Purification Kit提取標本DNA,嚴格按照試劑說明書的步驟進行操作。采用RBC-Ready Gene ABO試劑盒對標本進行ABO基因分型檢測。PCR擴增儀擴增,擴增條件:95℃變性5min;95℃30s,65℃30s,72℃90s,循環30次;72℃延伸7min后冷卻至12℃,完成PCR擴增,對PCR純化產物進行FUT1基因測序。

2 結果

血清學檢測結果為ABO血型正反定型不符,正定型表現為O型,反定型B型;H抗原檢測結果為陰性,提示紅細胞上未檢出H抗原;吸收放散試驗結果顯示,抗B血清吸收前后效價基本無變化,放散液與B細胞呈陰性反應,證實紅細胞表面未檢出B抗原。不規則抗體篩查與鑒定試驗結果為血漿與抗體篩選細胞、抗體鑒定細胞反應均為陽性,且強度一致,提示血漿中含有抗H或者抗HI;和O型臍帶血細胞反應,結果陰性,表明血漿中含有IgM類抗HI抗體。Lewis血型為Le(a-b+),證實為分泌型個體。唾液中血型物質檢測結果顯示抗-A(++++),抗-B(-),抗-H(++),表明唾液中有B物質和H物質。基因檢測結果為Bmh類孟買血型,ABO基因分型為BB,FUT1基因測序結果為h3h3突變。

3 討論

根據實驗室檢測結果,本例患者FUT1基因突變,為分泌型Bmh類孟買血型。類孟買血型極其罕見,在醫學中的意義和價值尤其重大。隨著實驗室檢測技術水平的發展,類孟買血型的檢出率越來越高,相關的文獻報道也越來越多。常見的類孟買型有Omh、Amh、Bmh等,AB類孟買型的報道較少見[2]。

類孟買血型的頻率在不同人群中存在差異,孟買型在印度孟買附近的馬哈拉施特拉邦人中大約為1∶7 600,泰國為1∶5 000,而在歐洲人的頻率很低,只有1∶312 081左右。孟買型在中國極少見,相對較多的是類孟買型,類孟買血型在我國的報道主要見于南方,臺灣地區類孟買型的比例大約為1∶8 000,香港地區為1∶15 620,大陸目前還沒有進行大量樣本的調查,僅在某些地區和民族較高,如福建地區頻率約為1∶8 500,與臺灣地區相似,都具有較高的類孟買型頻率。而云南少數民族拉祜族中的頻率高達2.2%,其他省份大規模篩查的數據尚未見到。經調查,本例患者的祖籍為福建莆田,屬于類孟買型頻率高發地區。孕婦自述其家庭成員目前暫未發現血型異常和配血困難的情況,但是未經過專業機構的相關實驗室檢測,其家庭成員的ABO血型結果并不能最終確定。由于條件受限,本例Bmh未能取得家庭成員的血液樣本和唾液標本進行檢測供家系分析。

日常檢驗工作中常規檢測血型時一般只做ABO正反定型,未常規做H抗原檢測,導致類孟買血型很容易漏檢。類孟買血型人群的血漿中通常含有抗-H或抗-HI,抗-H一般出現在H缺乏的非分泌型個體血清中,如孟買型、Ah、Bh、Oh。抗-HI則出現在分泌型的類孟買型,會影響類孟買血型的反定型鑒定,以及鹽水法的不規則抗體篩查和交叉配血[3],因此類孟買血型也極易誤定為O型。建議常規檢測 ABO血型時增加H抗原檢測,可避免罕見的類孟買血型的漏檢。血清學檢測聯合分子生物學檢測才能準確鑒定血型,從而更好地指導臨床輸血[4-5]。

類孟買型患者若需輸血,輸同型血無疑是最理想的選擇。但是此血型非常罕見,血源的獲得十分困難。針對該類血型患者的輸血策略研究,相關的文獻報道層出不窮[6-8]。筆者認為,一是建議擇期手術患者可進行自體輸血,可將紅細胞冰凍保存,急需時解凍即可使用。二是因為類孟買型人群具有家族性遺傳特點,家屬進行血型檢測有助于發現有無同種血型,緊急需要時可互助使用。三是血液中心應建立類孟買型稀有血型庫,鼓勵這類群體互助獻血。四是對于緊急情況如車禍、急診手術、大出血等需要緊急輸血時或者無法尋找到同型血液的患者來說,可篩選37℃無反應活性或者最低反應活性的供者輸注,輸注過程中密切觀察患者是否發生輸血不良反應,充分保證患者的輸血安全、有效。

H抗體的典型特征是能與O型臍帶血細胞反應(比成人O細胞的反應弱),反之則稱為抗-HI抗體。根據不規則抗體篩查和鑒定的結果,證實該患者血漿中含有抗-HI。抗-HI活性一般較弱,在37℃常無反應。本例患者為即將生產的孕婦,性質較特殊,考慮到該孕婦在生產過程中可能需要輸血,聯系血站后并無此類型的供者,短時間內也無法調到同型血,因此可以選擇O型相容(在抗人球蛋白卡中交叉配血無反應)的紅細胞給患者輸注。該孕婦分娩過程中和分娩后出血均不多,生命體征正常,不需要輸血。作為一個負責提供臨床醫療用血的科室,無論患者輸血與否,都要做好稀有血型患者輸血的應急預案,為未來可能會出現的稀有血型患者輸血工作做好充分的準備。隨著三胎政策的放開,孕產婦的數量越來越多,應重視產前檢查,尤其是血型鑒定,抗H抗體容易致敏,應盡量避免輸血。另外,提醒此類稀有血型的群眾出行須更加注意安全,減少外傷,減少不必要的輸血。

本例類孟買血型患者的發現,填補了我市類孟買血型檢測的空白,同時,在類孟買血型的血型鑒定、交叉配血試驗、輸血策略方面也積累了一定的經驗,從而可以更好地保障類孟買血型患者的生命安全。