缺血性腦卒中合并2 型糖尿病的危險因素及與CYP2C19＊2、CYP2C19＊3 位點的關系分析

劉安琪 衛詠怡 李蘭珍 莊曉旭 張菀愉

缺血性腦卒中是一條或多條血管出現局灶性閉塞或狹窄引起的腦血管疾病, 發病原因主要有動脈粥樣硬化［1］、心源性栓塞［2］、小血管疾病［3］等。有研究顯示糖尿病患者患腦卒中的風險比健康人高［4］, 也有研究表明血脂代謝水平［5］、Hcy 水平［6］、吸煙、高血壓［7］、酗酒［8］與缺血性腦卒中有重要聯系。此外基因組學證明腦卒中具有遺傳傾向［9］, 同時發現這些基因區域與某些抗血栓藥物代謝基因有關。氯吡格雷是缺血性腦卒中的二級預防藥物, 是一種無活性的前體藥物, 需要在肝臟經細胞色素P450 酶代謝為活性產物才能發揮抗血小板作用。CYP2C19 基因是細胞色素P450(CYP450)家族中重要的藥物代謝基因, 編碼一個約490-aa 的重要肝酶［10］, 是氯吡格雷的主要代謝基因。其中CYP2C19*2(681G＞A)和CYP2C19*3(636G＞A)是最常見的功能缺失等位基因［11］, 因此其基因多態性檢測受到臨床重視。研究顯示, CYP2C19 A 等位基因可能與腦動脈硬化的形成有關, 進而導致缺血性腦卒中發病率增加［12］；對于腦卒中合并2 型糖尿病患者來說, CYP2C19 基因慢代謝型患者的血糖更難控制［13］。CYP2C19 AA、AG 基因型(即CYP2C19 突變基因型)產生的氯吡格雷抵抗(CR), 因此會影響缺血性腦卒中患者抗血小板聚集的療效［14］。嚴峻等［12］的研究也顯示,CYP2C19*2(681G＞A)AA 型基因和CYP2C19*3(636G＞A)AA、AG 型基因是老年缺血性卒中發病的易感基因。CYP2C19 基因多態性與糖尿病有一定關聯, 有研究證實, 對于急性冠狀動脈綜合征(acute coronary syndrome,ACS)合并2 型糖尿病患者來說, CYP2C19 基因多態性影響糖化血紅蛋白(HbA1c)控制水平情況［13］。本研究分析CYP2C19*2、CYP2C19*3 位點與缺血性腦卒中合并2 型糖尿病的相關性和可能的危險因素, 為科學預防缺血性腦卒中合并2 型糖尿病提供一定的參考依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2021 年9 月～2022 年3 月在廣州醫科大學附屬第五醫院神經內科收治的159 例缺血性腦卒中患者, 其中67 例(男41 例, 女26 例)缺血性腦卒中合并2 型糖尿病患者作為實驗組, 92 例(男60 例、女32 例)缺血性腦卒中不合并2 型糖尿病患者作為對照組。缺血性腦卒中患者納入標準：符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》中傷情嚴重度評分(ISS)診斷標準［15］, 并經磁共振成像(MRI)或頭顱電子計算機斷層掃描(CT)確診。排除標準：短暫性腦缺血發作、出血性腦卒中、惡性腫瘤、心血管畸形、外周動脈閉塞性疾病、外傷、濫用藥物、血液病的患者。

1.2 主要試劑與儀器 核酸提取試劑盒為上海之江生物科技股份有限公司生產, CYP2C19 基因分型檢測試劑盒為武漢友芝友醫療科技股份有限公司生產, 掌上離心機為濟南泰醫生物技術有限公司生產, 核酸提取儀為上海之江生物科技股份有限公司生產, Roche Cobas Z480 實時熒光定量PCR 儀為瑞士羅氏公司生產。

1.3 CYP2C19 基因型檢測 抽取患者清晨空腹靜脈血2 ml 置于EDTA 抗凝管中。標本采集后2 h 內完成檢測, 或4℃冰箱保存24 h 內檢測。按照核酸提取試劑盒說明書提取DNA。按照CYP2C19 基因分型檢測試劑盒說明書, 使用Roche Cobas Z480 實時熒光定量PCR 儀進行PCR 擴增反應。

1.4 生化指標檢測 抽取患者空腹靜脈血5 ml 置于真空管中, 3000 r/min 離心10 min 以分離血清, 檢測TG、TC、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB、Hcy、GLU。抽取患者空腹靜脈血2 ml 置于EDTA 抗凝管,檢測HbA1c。

1.5 觀察指標 首先分析CYP2C19*2、CYP2C19*3基因型Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗, 其次分析兩組患者CYP2C19*2、CYP2C19*3 基因分型頻數分布,比較兩組患者一般資料及生化資料, 包括性別、年齡、合并高血壓情況、合并高血脂癥情況、TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoA1、ApoB、Hcy, 分析缺血性腦卒中合并2 型糖尿病的危險因素。

1.6 統計學方法 采用SPSS25.0 統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差( x-±s)表示, 采用t 檢驗；非正態性分布資料采用Mann-Whitney U 檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗；各基因型分布頻率采用Hardy-Weinberg 遺傳平衡驗證, 危險因素采用Logistic 回歸分析。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CYP2C19*2、CYP2C19*3 基因型遺傳平衡檢驗結果分析 CYP2C19*2 (681G＞A)和CYP2C19*3(636G＞A)的3 種基因型分布頻率經統計檢驗, 患者所有基因型均符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律, 表明所選取樣本具有群體代表性。見表1。

表1 CYP2C19*2、CYP2C19*3 基因型遺傳平衡檢驗結果分析

2.2 兩組患者CYP2C19*2、CYP2C19*3 基因分型頻數分布情況比較 兩組患者CYP2C19*2(681G＞A)、CYP2C19*3(636G＞A)基因分型頻數分布情況比較, 差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 兩組患者CYP2C19*2、CYP2C19*3 基因分型頻數分布情況比較［n(%)］

2.3 兩組患者一般資料及生化資料比較 實驗組患者的TG 1.71(1.14, 2.70)mmol/L、合并高脂血癥占比37.3%(25/67)、ApoB 1.01(0.79, 1.25)g/L 高于對照組的1.27(0.90, 1.67)mmol/L、21.7%(20/92)、0.91(0.77,1.14)g/L, HDL-C 1.00(0.91, 1.15)mmol/L 低于對照組的1.19(0.99, 1.44)mmol/L, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。而兩組性別、年齡、合并高血壓情況、TC、LDL-C、ApoA1、Hcy 水平比較, 差異無統計學意義(P＞0.05)。見表3。

表3 兩組患者一般資料及生化資料比較［n, ±s, M(Q1, Q3)］

表3 兩組患者一般資料及生化資料比較［n, ±s, M(Q1, Q3)］

注：與對照組比較, aP＜0.05

指標對照組(n=92)實驗組(n=67)性別(男/女)60/3241/26年齡(歲)66.92±12.7468.84±11.68合并高血壓6749合并高脂血癥20 25a TG(mmol/L)1.27(0.90, 1.67)1.71(1.14, 2.70)a TC(mmol/L)4.64(3.85, 5.31)4.55(3.67, 5.46)LDL-C(mmol/L)2.76(2.08, 3.42)2.54(2.02, 3.45)HDL-C(mmol/L)1.19(0.99, 1.44)1.00(0.91, 1.15)a ApoA1(g/L)1.36(1.14, 1.61)1.29(1.11, 1.52)ApoB(g/L)0.91(0.77, 1.14)1.01(0.79, 1.25)a Hcy(μmol/L)13.2(10.35, 16.70)12.5(10.15, 17.05)

2.4 缺血性腦卒中合并2 型糖尿病的危險因素分析多因素Logistic 回歸分析顯示, 合并高脂血癥、高TG水平、高ApoB 水平為缺血性腦卒中合并2 型糖尿病的危險因素(P＜0.05)。見表4。

表4 缺血性腦卒中合并2 型糖尿病的危險因素分析

3 討論

近年我國腦卒中人數呈增長趨勢［16-18］, 腦卒中與糖代謝異常關系密切［19］, 高血糖增加血管內皮損傷,使小血管疾病發生風險增加, 同時高血糖促使血小板聚集性和粘附性增強, 加重脂代謝異常, 容易引起動脈粥樣硬化從而造成缺血性腦卒中。本研究發現, 實驗組患者的TG 1.71(1.14, 2.70)mmol/L、合并高脂血癥占比37.3%(25/67)、ApoB 1.01(0.79, 1.25)g/L 高于對照組的1.27(0.90, 1.67)mmol/L、21.7%(20/92)、0.91(0.77, 1.14)g/L,HDL-C 1.00(0.91, 1.15)mmol/L 低于對照組的1.19(0.99,1.44)mmol/L, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。多因素Logistic 回歸分析顯示, 合并高脂血癥、高TG 水平、高ApoB 水平為缺血性腦卒中合并2 型糖尿病的危險因素(P＜0.05)。有研究指出缺血性腦卒中合并糖尿病與脂代謝異常有關, 缺血性腦卒中合并糖尿病患者的血脂水平比缺血性腦卒中不合并糖尿病患者高, 高TG、ApoB 水平與頸動脈斑塊呈正相關［20］, 這與本實驗得出的結論相符。本實驗得出其他血脂指標(TC、LDL-C、HDL-C、ApoA1)不是合并2 型糖尿病的危險因素, 與過往研究結論稍有差異。有研究表明, 不同亞型的缺血性腦卒中的危險因素不同, CISS 分型根據病因及發病機制將缺血性腦卒中主要分為5 類, 分別為大動脈粥樣硬化性卒中、心源性腦卒中、穿支動脈疾病、其他原因所致卒中或病因不明。TG、LDL-C 是大動脈粥樣硬化型卒中的危險因素；冠心病是心源性腦卒中的危險因素, 且TC 水平比其他四種亞型低［21］。猜想本研究由于沒有對急性腦卒中細分亞型, 因此血脂指標與過往研究有差異。

既往研究［12］顯示, CYP2C19*2(681G＞A)AA 型基因和CYP2C19*3(636G＞A) AA、AG 型基因是老年缺血性腦卒中發病的易感基因。但是關于缺血性腦卒中合并2 型糖尿病人群研究較少, CYP2C19 基因多態性與合并糖尿病有無直接關聯也無明確說法。本實驗結果得出CYP2C19*2、CYP2C19*3 位點與缺血性腦卒中合并2 型糖尿病無直接關系。有研究［22］表明, ApoE 基因不是缺血性腦卒中合并2 型糖尿病的危險因素, CYP2C19*2、CYP2C19*3 位點突變是缺血性腦卒中合并2 型糖尿病患者產生氯吡格雷抵抗的危險因素, 但考慮到氯吡格雷抵抗的原因主要包括糖尿 病、CYP2C19*2 或CYP2C19*3 等, CYP2C19* 2、CYP2C19*3 位點突變并不是氯吡格雷抵抗的唯一危險因素［23］, 因此CYP2C19*2、CYP2C19*3 位點突變與氯吡格雷抵抗現象不能直接等同, 與本實驗得出結論相符。有研究［24］表明, 進行降脂治療時選用抗血小板藥物,適當推廣氯吡格雷和阿司匹 林抵抗篩查, 從而達到精準血小板藥物治療, 出院后加強院外隨訪, 謹防出血事件。

綜上所述, 缺血性腦卒中合并2 型糖尿病與CYP2C19*2、CYP2C19*3 位點無直接關系, 合并高脂血癥、高TG 水平、高ApoB 水平是缺血性腦卒中合并2 型糖尿病的危險因素。