某集團使用新型豬藍耳滅活疫苗控制豬藍耳病類NADC30 和類NADC34毒株混合感染案例

賴慶光 ，楊茂春 ，歐偉業 ，衛秀余

（1.浙江美保龍生物技術有限公司，浙江 金華 321016；2.上海市奉賢區獸醫研究所，上海 201400）

1 豬場背景

某養豬集團公司在2021年10—12月期間，有四個生產基地出現母豬流產、死胎增加的現象，保育豬死淘率升高，部分批次可達40%，送檢病料檢測到豬藍耳病病毒核酸陽性。豬藍耳病暴發前一直使用某進口豬藍耳病經典株活疫苗，由于生產不穩定，2021年11月增加了自家組織滅活疫苗和定制五聯苗（豬藍耳、豬圓環病毒病、支原體、鏈球菌、副豬嗜血桿菌滅活疫苗）免疫母豬和仔豬，效果不理想。

美保龍技術服務團隊應約在2021年12月20日過去交流，建議采樣檢測摸底評估和初步確定藍耳滅活疫苗免疫方案，隨后隔離開展駐場服務。

2 現場臨床和解剖情況

2022年1月6日-20日，美保龍技術服務團隊進入HMX 和HMD場，母豬流產、死胎有一定比例。發現保育豬傷亡嚴重，保育期死淘高達20%。臨床表現為：部分仔豬突然倒地、神經癥狀、四肢劃水；部分皮膚發紅，這類豬解剖多數有心內膜炎、心瓣膜和心耳處有大量白色血栓或者混色血栓堵塞，心外膜血管怒張，造成血液循環障礙，肺主要表現間質性肺炎、有的實變嚴重，有出血點，肺門淋巴結和縱隔淋巴結腫大出血，個別脾臟腫大；部分仔豬嚴重消瘦、腹式呼吸、關節腫大，解剖主要是漿膜炎，心包炎、腹膜炎纖維素性滲出，關節有黃色膿性滲出物或者軟組織水腫；有不少豬死后尸僵不全、蒼白、皮下黃染，解剖發現，有的呈現血液凝固不良、皮下脂肪黃染、腹部肌肉滲出血水嚴重、系水力明顯下降；個別仔豬外表看有胃腸鼓氣的，一般皮膚蒼白，解剖結腸、回腸腸道出血嚴重，腸胃脹氣嚴重，肝脾有腫大。當時初步判斷有梭菌和附紅細胞體感染，梭菌造成死后快速脹氣，腸道出血，皮膚蒼白，附紅細胞體造成血液凝固不良，尸僵不全，皮下黃疸。部分剖解圖片如下圖（圖1）。

圖1 保育豬解剖圖

2021年12月20日交流后提出檢測方案和初步免疫建議。了解目前豬藍耳病感染壓力和感染節點。采樣方案如下：采集流產胎兒肺組織，出生仔豬的臍帶血、睪丸液，產房和保育弱死仔豬病料淋巴結、肝脾肺等，20、40、60日齡仔豬血液，檢測藍耳抗原和抗體。同時對保育豬病料進行分離細菌，血液涂片是否有附紅細胞體。

3 豬場現場采樣檢測情況

2021年12月26日到2021年12月29日期間四個豬場隨機采樣檢測，送到華南某第三方檢測機構檢測結果如表1。

表1 樣品PRRSV、PCV2 核酸檢測結果（qPCR）

表1 中H M D、H M X、X L、TE 四個豬場的病原檢測報告，臍帶血、睪丸液、20日齡、40日齡、60日齡、死胎、病豬解剖病料組織基本上藍耳核酸檢測陽性，CT 值非常低。同時HMX 場和TE 場40日齡仔豬血液檢測到PCV2 抗原陽性。

圖2 為XL 場血液檢測豬藍耳N 蛋白抗體結果。

圖2 XL 場藍耳N 蛋白ELISA抗體檢測結果

圖2 是XL 場豬藍耳N 蛋白抗體檢測結果，60日齡抗體全部陰性。整體N 蛋白抗體水平不高，大部分低于1.5，母豬陽性率比較高。反觀表1 XL 場豬藍耳核酸檢測結果：睪丸液豬藍耳抗原陽性率20%、產房斷奶前弱豬藍耳抗原檢測率30%，CT 值分別最低為33.19和32.24，仔豬20日齡血液藍耳核酸陽性率33.3%，CT 值為31.3，此時N 蛋白抗體也不高，S/P 值為0.47，陽性率50%；60日齡血液抗原陽性率為40%，CT 值最低為30.5，但是N 蛋白抗體基本上是陰性，低于0.4，表現出抗原陽性、抗體陰性的結果。但是，當時臨床上4 ～8 周齡保育豬主要是呼吸道相對較多、咳嗽、打噴嚏、個別皮膚發紅，倒地神經癥狀死亡，有些是消瘦、漿膜炎，死淘在12%左右。說明60日齡仔豬目前正在處于感染期，目前N 蛋白抗體陰性，處于感染早期，N 蛋白抗體還不足于檢測到陽性。

TE 場血液抗體檢測結果見圖3。

圖3 TE 場豬藍耳N 蛋白ELISA 抗體檢測結果

圖3 是TE 豬場豬藍耳N 蛋白抗體S/P 值分析。21、40、60日齡陽性率（S/P 值大于0.4）只有10%～30%，21、40、60日齡豬N蛋白抗體陽性率很低，只有10%、10%、30%， 均值為0.26、0.26、0.33，大部分均為陰性，但是離散度非常高，高達80%以上。母豬群體離散度較小，S/P 值大部分在1.12 ～1.35。對應表1 來看，TE場20日齡仔豬抗原陽率為13.3%，CT 值最低是35.2，40日齡仔豬抗原陽性率為73.3%，CT 值最低為28.3，60日齡仔豬抗原陽性率為100%，CT 值最低為30.5。反觀這個時候豬場非常不穩定，斷奶仔豬在30日齡開始出現發病，皮膚發紅、發熱、神經癥狀、突然倒地劃水死亡，或者厭食消瘦，關節炎和漿膜炎嚴重，死淘高。產房母豬分娩仔豬睪丸液陽性率100%，CT值最低為30.1，病弱豬抗原陽性率100%，CT 值最低為26.7，母豬臨床表現為死胎多。說明這些豬采樣時，N 蛋白抗體水平很低，很多陰性，但是核酸檢測卻是陽性，表明這些20 ～60日齡豬剛剛發病，處于病毒血癥，N 蛋白抗體還沒有產生足夠高，很多還是陰性。

圖4 是HMD 和HMX 兩個豬場的豬藍耳N 蛋白抗體檢測分析。僅僅從N 蛋白抗體S/P 值來看，抗體水平不高，大部分低于1.5 以下，離散度最大的是哺乳母豬和20日齡仔豬。這兩個豬場實際上在同一個地方兩條獨立生產線。母豬免疫時間和程序一樣，仔豬免疫程序也是一樣。整體看兩個豬場40日齡仔豬抗體水平不一樣，一個陽性率是90%，但是另外一個是0，全部陰性，S/P 值為1.04 和0.1。哺乳母豬陽性率也是相差很大，陽性率一個是90%，另一個是10%。S/P 均值為0.86和0.09.均相差如此大。

圖4 HMD 和HMX 場豬藍耳N 蛋白ELISA 抗體檢測結果

2022年1月2日根據核酸檢測結果進行測序，測序結果如下，HMD、HMX 測序見圖5 和圖6。

圖5 HMD 和HMX 兩個場PRRSV ORF5 核苷酸遺傳進化樹分析

圖6 HMD 和HMX 兩個場PRRSV ORF5 基因核苷酸同源性分析

HMD 和HMX 兩個場PRRSV ORF5 核苷酸遺傳進化樹分析，測序毒株命名為：HAIMENCHANG、H A I M E N C H A N G 2 、HAIMENCHANG3。

2022年1月2日HMD 和HMX 場測序結果，表明是場內感染豬藍耳類NADC34 毒株。

2022年1月同時對XL 場進行PRRSV ORF5 核苷酸測序，結果見圖7 和圖8：對XL 場PRRSV ORF5核苷酸遺傳進化樹分析結果，測序毒株命名為：XINGLINGCHANG。

圖7 XL 場PRRSVORF5 核苷酸遺傳進化樹分析

圖8 XL 場PRRSVORF5 核苷酸同源性對比

這是XL 場測序結果表明該場也是類NADC34 毒株感染，三個場均為2022年1月2日測序結果，表明該集團公司主要感染類NADC34毒株。

2022年1月中旬，采HMD、HMX、TE 場對應90—120日齡育成豬血樣檢測，豬群血樣可以同時檢測到NADC34 和類NADC30 毒株混合感染。對應毒株名稱為粉色線條，見圖9。

圖9 PRRSV ORF5 核苷酸遺傳進化樹分析

采血液涂片檢測附紅細胞體陽性，采取發病仔豬的淋巴結、肺、腎、關節液到內部實驗室進行分離到鏈球菌和副豬嗜血桿菌，藥物敏感試驗結果如圖10。

圖10 副豬嗜血桿菌革蘭氏染色圖片

圖11 為副豬嗜血桿菌的PCR鑒定圖片（其目標條帶為821 bp）。

圖11 副豬嗜血桿菌PCR 鑒定圖片

圖12 為鏈球菌革蘭氏染色圖片。

圖12 鏈球菌革蘭氏染色圖片

分離鏈球菌進行12 種抗菌藥物的最小抑菌圈，見表2。

表2 分離鏈球菌藥物敏感試驗

分離的鏈球菌藥物敏感試驗結果，提示阿莫西林、頭孢、青霉素鈉敏感。

對HM 兩個場分離的副豬嗜血桿菌做11 中抗菌藥物的最小抑菌圈，結果如下見表3。

表3 分離副豬嗜血桿菌藥物敏感試驗

分離的四株副豬嗜血桿菌，提示對氟苯尼考高度敏感，對泰妙菌素、多西環素中度敏感。

根據上述情況匯總，基本確診該農場為豬藍耳感染后，繼發鏈球菌、副豬嗜血桿菌，個別豬腸道菌群失調造成豬梭菌發作。

4 防控方案建議

建議該集團兩大片區六個豬場的種豬全部接種一次豬藍耳滅活疫苗2 mL，連續兩次，間隔10 ～14 d。后續間隔三個月一次。產房仔豬1—10日齡接種0.5 mL 豬藍耳滅活疫苗，10日齡以上產房仔豬接種1 mL 滅活疫苗，保育豬接種一次1 mL。這樣普免以后，下一批出生仔豬改為10—14日齡先接種豬藍耳活疫苗，28 ～30日齡注射豬藍耳滅活疫苗、46 ～49日齡保育豬進行第二次豬藍耳滅活疫苗接種。后備母豬入群前全部接種兩次豬藍耳滅活疫苗，每次2 mL，間隔10 ～15 d，經過連續兩次采血和唾液核酸檢測豬藍耳抗原，確?？乖幮赃M入基礎群母豬舍。

根據細菌分離和藥物敏感試驗結果，優化給藥方式。5 ～6 周齡保育豬飲水添加阿莫西林和泰妙菌素飲水，同時在飼料添加多西環素和七星敗毒顆粒。10—12 周育成豬添加阿莫西林、泰妙菌素和七星敗毒顆粒飲水，分開添加到水中進行飲水。同時在斷奶仔豬飼料中適量添加乳清粉、脂肪粉，改善適口性和增加能量攝入量，減少斷奶由于采食量不足造成仔豬營養不足和應激。

加強洗消，降低環境中病毒載量。使用二氧化氯加強水簾消毒、環境帶豬霧化消毒、及時排放豬欄中的水泡糞，減少環境帶毒；空欄期間產房、保育房熏蒸消毒，空欄洗消后使用高錳酸鉀+甲醛熏蒸消毒，目的是降低環境中有害微生物數量。

優化豬群流動和混群，及時處理病弱豬，對閹割小公豬建議斷奶后銷售，降低肥豬和保育豬密度，改善通風量。及時跟蹤晚上保育舍和肥豬舍氨氣濃度和氧氣含量，減少由于大欄缺氧造成下半夜死亡多的現象。

5 后續生產和檢測結果跟蹤情況

這四個豬場按照上述方案接種，母豬流產問題逐漸穩定，產房仔豬生產恢復正常，生產成績好轉，保育豬死淘率快速下降。豬群在1月22日，該集團獸醫主管和各個豬場報上來的數據分析，斷奶仔豬健康度非常好，整個豬群健康度目前恢復很快，死亡率大大降低，母豬不再流產，弱仔胎控制在正常范圍。

2022年2月5日四個豬場開始采樣，每個場采集臍帶血五窩，睪丸液五窩，不同日齡斷奶仔豬血液10 頭，熒光定量PCR 檢測豬藍耳核酸。

2022年2月7日檢測結果見表4。

表4 各牧場豬藍耳核酸檢測結果（qPCR）

核酸檢測結果分析：HMD 場，25 個樣品8 個混樣檢測，均為陰性；TE 場，17 份樣本，6 個混樣后檢測，發現臍帶血還有陽性，CT 值為34.68，睪丸液和斷奶仔豬血液全部陰性；XL 場20 個樣本8 個混樣，睪丸液、臍帶血、血清核酸檢測全部陰性；HMX 場20 個樣本8 個混樣，發現睪丸液、臍帶血全部核酸陰性，但是斷奶仔豬血液還有陽性，一個樣本CT 值為21.55。分析原因，HMX 豬場臍帶血和睪丸液混樣檢測均為核酸陰性，但是斷奶仔豬檢測核酸陽性，說明在保育豬欄內還有豬群攜帶病毒，或者產房和保育房環境帶毒污染導致，也有可能是HMX 豬場接種了活疫苗后采樣的。截止到2022年2月17日，四個豬場反饋，穩定生產，尤其是母豬和產房，非常健康，產仔數和斷奶體重，PSY 均超越以前同期水平。TE場和XL 場出來的保育豬非常健康，68日齡平均體重可以達到27.8 kg，死淘率只有5%。HMD 和HMX 兩個豬場產房死亡率從14.2%下降到6.35%，保育豬死淘率從29.32%下降到9.2%。母豬生產數據情況，兩個片區母豬斷奶發情率從2021年1月的89.4%、79.7% 上升到2022年4月的92.9%，91.5%。115 d 分娩率從84.4%上升到92.2%。母豬分娩障礙明顯下降，窩均健仔提高1.65 頭。

連續對睪丸液、斷奶仔豬血液、5 ～8 周仔豬唾液，13 周齡、20 周育肥豬血液和唾液檢測豬藍耳抗原變化，發現母豬在第二次免疫以后，出生仔豬睪丸液、斷奶仔豬血液豬藍耳抗原檢測率直線下降，睪丸液檢測豬藍耳核酸從開始22%～30%陽性率下降到3%，母豬在4月初第三次免疫后，睪丸液和24日齡斷奶仔豬檢測不到豬藍耳抗原。5 ～8 周仔豬豬藍耳抗原變化，XL 場、TE 場、HMD 檢出率從陽性率30%～100%，降到10% 以內，HMX 從100% 豬藍耳抗原陽性率下降到18%。

6 防控效果與討論分析

加強后備豬入群管理，豬群合理混群和流動。本案例中集團公司雖然沒有從外面引入種豬，但是內部種豬群調動未遵循嚴格的檢測規定，不同區域調運豬只和混群，由于疫苗免疫程序和個別疫苗廠家不一樣，加上豬群流動和混群不合理，造成豬藍耳病NADC34 和NADC30混合感染，造成母豬流產等繁殖障礙，保育豬發病死淘嚴重。經過筆者團隊不斷建議，改善豬群流動，及時銷售閹割公豬，不同來源的斷奶仔豬和保育豬盡量不混群，減少混群帶來的不穩定，優化豬群流動，做好后備豬藍耳必須抗原陰性入群。

利用新型豬藍耳病滅活疫苗和中藥來降低母豬體內豬藍耳病病毒載量，減少垂直傳播，控制傳染源，這樣可以減少斷奶仔豬和保育豬帶毒，減少群體感染壓力。通過不斷減低母豬垂直傳播，逐步生產出出生仔豬豬藍耳抗原陰性的群體，減少斷奶仔豬豬藍耳病攜帶野毒，減少散毒。

另外一方面，該兩個區域豬場，由于排污不及時，水泡糞液面過高，加上濕度大，造成環境病毒載量高，多次檢測環境樣本均帶毒嚴重。通過洗消豬欄、加大水泡糞的排出、加強帶豬空氣消毒和水簾、風機外面氣溶膠消毒，使得豬場周邊氣溶膠傳播減少，加強監測，降低環境病毒載量后，明顯可以降低水平傳播能力和降低豬群循環感染壓力。

細菌分離和藥物篩選對控制保育豬細菌感染是非常有意義的。之前該豬場一直使用替米考星或者泰萬菌素、阿莫西林等效果不理想，后來優化藥物濃度和給藥方式，篩選不同企業生產的阿莫西林，很快減低了細菌感染造成的死淘。

新型豬藍耳病滅活疫苗有快速啟動細胞免疫作用，通過自噬小體抑制病毒在體內復制，所以不僅可以快速降低體內病毒載量，多次免疫后可以達到體內抗原陰性，同時由于沒有藍耳病毒在體內復制，N蛋白抗體水平自然下降，可以通過血液檢測發現，血液中N 蛋白抗體水平逐步下降，尤其在3 ～5 周齡仔豬可以發現大量豬藍耳雙陰仔豬。說明通過新型豬藍耳滅活疫苗免疫，可以減少豬群傳染源，減少豬藍耳病毒在豬體內復制，提高易感豬群的感染閾值。本案例也說明新型豬藍耳滅活疫苗不僅可以有效預防豬藍耳病發生，也可以緊急預防與治療豬藍耳病。因為逐步降低豬群藍耳病毒載量，就可以降低感染壓力，進一步預防豬藍耳病的發生；在豬群暴發豬藍耳病時，通過快速降低病毒載量，降低豬藍耳病感染排毒和散毒，可以讓發病豬群快速穩定下來，給臨床防控豬藍耳病提供了新的思路和方法。

團隊2022年到目前發稿前，在濰坊、齊齊哈爾、漳州、吉安等多個集團規模場均類似豬藍耳2 個毒株以上混合感染，造成母豬流產，保育豬繼發細菌感染造成大量死亡的防控案例，證明確實有效。