醫院制劑天麻熄風膠囊質量標準研究

丁 輝 賈 倩 朱仁愿 李 堅 吳福祥 丁愛華

蘭州市食品藥品檢驗檢測研究院 國家市場監管食品中農藥獸藥殘留監控重點實驗室甘肅省種植中藥材外源性污染物監測工程研究中心，甘肅蘭州 730050

天麻熄風膠囊是蘭州市某醫院制備的醫院制劑，處方由天麻、膽南星、川貝母、陳皮、天竺黃、僵蠶、人工牛黃、麥冬、茯苓、甘草和石菖蒲十一味藥材加工制成，具熄風定癇、鎮靜安神、清熱祛痰之效；用于癲癇風痰閉阻，癥見神昏抽搐、口吐白沫、小便失禁等。其處方來源于經驗方“天麻熄風湯”，研究顯示，天麻熄風湯結合尼莫地平、奧卡地平等西藥在蛛網膜下腔出血后遲發性腦血管痙攣、短暫性腦缺血等疾病的治療和預防中具有較好的效果[1-3]。該藥方中以天麻、膽南星為君藥，平肝潛陽、燥濕祛痰；以天竺黃、川貝母、僵蠶為臣助君藥，清熱祛痰、熄風止痙；以陳皮、茯苓、麥冬、石菖蒲為佐，祛痰開竅、清心除煩；以甘草為使，調和諸藥。醫者通過總結治療心得，在對隨癥加減的基礎上確立了該醫院制劑，在臨床中取得良好療效。

天麻熄風膠囊為醫院制劑，僅可在院內應用，目前尚無對應的質量標準，為了更全面地控制該制劑的內在質量，本研究通過查閱《中華人民共和國藥典》（2020年版）及相關文獻資料后，描述其性狀特征，觀察石菖蒲、茯苓、膽南星、僵蠶、天竺黃的顯微特征，建立天麻、石菖蒲的薄層色譜鑒別方法，并對水分、裝量差異、崩解時限等常規檢查項目進行檢驗[4-6]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Canon EOS 6D數碼照相機（日本佳能公司）；BX53+DP73正置熒光生物顯微鏡，配有cellSens Entry成像系統（日本奧林巴斯公司）；CAMAG Linomat 5自動點樣儀，配備TLC Visualizer成像系統（瑞士卡瑪公司）；YP502電子天平（上海津平科學儀器有限公司）；DGG-9140B電熱恒溫鼓風干燥箱（上海森信實驗儀器有限公司）；MS105DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器公司）；ZB-1D智能崩解儀（天津精拓儀器科技有限公司）；SBL-10DT超聲清洗儀和SCG-4智能恒溫槽（寧波新芝生物有限公司）。

1.2 試劑試藥

天麻對照藥材（120944-201310）、天麻素對照品（110807-201608）和石菖蒲對照藥材（121098-201406），均購自中國食品藥品檢定研究院。硅膠G薄層板（德國默克公司），水合氯醛、正丁醇、乙醇、甲醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸、石油醚（60℃～90℃）、環己烷、磷鉬酸、碘、大孔吸附樹脂均為分析純，水為純化水。天麻熄風膠囊試制樣品3批，均由蘭州市某醫院制備提供，批號：TMXF-S-1、TMXF-S-2和TMXF-S-3。

2 方法與結果

2.1 性狀特征

利用數碼照相機拍照，記錄天麻熄風膠囊的性狀特征。結果可見：本品為硬膠囊（圖1a），內容物為灰黃色的粉末（圖1b）。取內容物進行口、鼻實驗，可知其氣微香，味淡、微甜。

圖1 天麻熄風膠囊性狀特征

2.2 顯微特征

取天麻熄風膠囊的內容物適量，用研缽研細，置載玻片上，緩慢滴加3～5滴水合氯醛試液，加蓋玻片，在酒精燈上加熱以除去氣泡并透化粉末，室溫放置10 min冷卻后，用生物顯微鏡及數碼成像系統觀察記錄其顯微特征。結果可見：膽南星的糊化淀粉粒團塊基本為無色，草酸鈣針晶成束或散布存在（圖2a～b）。僵蠶的氣管壁碎片略彎曲，具棕色周邊，呈半圓弧狀的螺旋絲（圖2c）。天竺黃的不規則塊片無色透明，邊緣四周多為平角，且有棱角，遇到少量水合氯醛試液會逐漸溶化（圖2d）。石菖蒲的纖維束周圍細胞中富含大量的草酸鈣方晶，形成晶纖維；有大量球形、橢圓形、長卵形的單粒淀粉粒和由2～20分粒組成的復粒淀粉類（圖2e～f）。茯苓的顆粒狀團塊（形態不規則）及枝杈狀團塊常為無色，遇少量水合氯醛溶液漸微微溶化（圖2g）。

圖2 天麻熄風膠囊內容物的顯微特征

2.3 天麻的薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 隨機取天麻熄風膠囊10粒，倒出內容物，用研缽研細，全部轉移置錐形瓶中，加水飽和的正丁醇30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液用旋轉蒸發儀回收提取溶劑至干，殘渣加5 ml純化水使其溶解，加在內徑為1 cm的 D101型大孔吸附樹脂柱（柱高為16 cm）上，先用15 ml水洗脫，棄去，再用40 ml乙醇水溶液（1∶9）洗脫，收集乙醇水溶液洗脫液，水浴蒸干，殘渣加2 ml甲醇使其溶解。

2.3.2 對照藥材溶液的制備 取0.5 g天麻對照藥材，依照“2.3.1”供試品溶液所述制備方法進行同樣操作。

2.3.3 對照品溶液的制備 取約10 mg天麻素對照品，加10 ml甲醇使溶解，配制成濃度為1 mg/ml的溶液。

用自動點樣儀的微量取樣器分別吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2 μl及對照藥材溶液5 μl，依次點樣于同一塊硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲酸-乙酸乙酯-甲醇（8∶0.1∶1∶3）為展開體系展開，至少8 cm，取出硅膠G薄層板，晾曬至干，噴以磷鉬酸-乙醇（1∶10）溶液，于105℃加熱至少5 min，直到薄層板上可見清晰的斑點。結果顯示，供試品色譜、對照藥材色譜、對照品色譜在相應的位置上，都顯有相同顏色的斑點，見圖3。

圖3 天麻熄風膠囊方中天麻的薄層色譜鑒別圖

2.4 石菖蒲的薄層色譜鑒別

2.4.1 供試品溶液的制備 隨機取天麻熄風膠囊10粒，倒出內容物，用研缽研細，樣品粉末全部轉移置錐形瓶中，加50 ml純化水，沸水浴上回流1 h后，取下錐形瓶，放冷，在3000 r/min離心5 min，取上清液用60～90℃的石油醚先后提取2次，每次使用石油醚20 ml，合并2次的石油醚提取液，沸水浴蒸干，殘渣中加入乙酸乙酯1 ml使其溶解。

2.4.2 對照藥材溶液的制備 取石菖蒲對照藥材1 g，研細，依照“2.4.1”供試品溶液所述制備方法進行操作。

用自動點樣儀的微量取樣器分別吸取上述供試品溶液和對照藥材溶液各5 μl，依次點樣在同一塊硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯（9∶1）為展開體系展至8 cm，取出后，晾曬至干，置于碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰為止，在日光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，可見具有相同顏色的斑點，見圖4a。在通風處放置，將薄層板上吸附的碘揮凈后，置于紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，同樣可見相同顏色的熒光斑點，見圖4b。

圖4 天麻熄風膠囊方中石菖蒲的薄層色譜圖

2.5 常規檢查項

按《中華人民共和國藥典》（2020年版）四部制劑通則收錄的膠囊劑（通則0103）項下有關的規定對水分、裝量差異和崩解時限進行檢驗，為考察天麻熄風膠囊樣品的均勻性以及保證檢驗結果的準確可靠，每批樣品平行進行3組測定[7]。

2.5.1 水分 按照《中華人民共和國藥典》（2020年版）四部通則0832收錄的水分測定法中烘干法進行測定。取天麻熄風膠囊內容物粉末5～10 g，精密稱定，平鋪在扁形稱量瓶中，其中稱量瓶需干燥并且達到恒重的，開啟瓶蓋在108℃干燥至5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在與上述溫度同樣的條件下繼續干燥1 h，室溫下放至冷卻，精密稱重，直至連續兩次對稱量瓶與樣品的稱重差異不超過5 mg即可。根據稱重減少的量，算出天麻熄風膠囊中的含水量，3批次天麻熄風膠囊的水分結果均超出標準規定，見表1。

表1 水分檢查結果（%）

2.5.2 裝量差異 隨機取10粒天麻熄風膠囊，分別精密稱定其重量，然后倒出里面的內容物，并且用小刷把膠囊殼擦拭干凈，再分別精密稱定膠囊殼的重量，根據減失的重量計算出每粒天麻熄風膠囊的內容物重量，見表2。本品規格為0.4500 g/粒，根據《中華人民共和國藥典》（2020年版）標準規定，每粒裝量與標示裝量比較，超出藥典標準規定的裝量差異限度的膠囊應不得多于2粒，并應不得有1粒超出限度1倍，其中裝量差異限度為標示值的±10%，即限度范圍為0.4050～0.4950 g/粒，1倍限度范圍為0.3600～0.5400 g/粒。結果顯示：TMXF-S-1的第2組裝量差異均在限度范圍內，第1組和第3組分別有2粒和1粒樣品的裝量差異超出限度范圍，但未超出限度的1倍，故均符合規定；TMXF-S-2的第1組有2粒樣品超出限度范圍，且其中有1粒超出限度1倍，第2組和第3組分別有3粒和1粒樣品的裝量差異超出限度范圍，但未超出限度的1倍，綜合判斷，不符合規定；TMXF-S-3的第1組和第3組樣品裝量差異均在限度范圍內，第2組有1粒樣品的裝量差異超出了標準規定的限度范圍，但未超出限度的1倍，故符合規定。

表2 裝量差異檢查結果（g/粒）

2.5.3 崩解時限 按照《中華人民共和國藥典》（2020年版）四部通則0921所收錄崩解時限的檢查法進行測定。取天麻熄風膠囊6粒，分別放入崩解儀吊籃上的6根玻璃細管中，放上擋板，浸入盛有水的燒杯中，設定溫度為37℃，記錄膠囊全部崩解的時間。標準規定膠囊應在30 min內完全崩解，3批次天麻熄風膠囊的崩解時限結果均符合標準規定，見表3。

表3 崩解時限檢驗結果（min）

3 討論

3.1 顯微特征

由于天麻熄風膠囊處方藥味較多，顯微鏡下觀察到同時存在淀粉粒（單粒及復粒）、糊化淀粉粒團塊、顆粒狀團塊（形態不具規則）及枝杈狀團塊，無法準確地進行定性鑒別，因此加入碘試液，碘試液可以使不同的組織顯示不同的顏色，從而進行區分。加入碘試液后，顯微鏡下所觀察到淀粉粒顯藍色，糊化的淀粉粒團塊顯黃棕色或淡黃色，未完全糊化淀粉粒團塊同時會顯藍紫色、黃棕色兩個不同的顏色，而不規則顆粒狀團塊和分枝狀團塊則為無色[8-9]。

3.2 薄層色譜

天麻的薄層色譜鑒別中，考察了三種前處理方法，分別為：①加70%甲醇超聲處理提取；②加乙醇振蕩提取；③加水飽和的正丁醇超聲處理后在D101型大孔吸附樹脂柱上洗脫提取。考察了三種展開體系，分別為：①乙酸乙酯-甲醇-水（9∶1∶0.2）；②三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（9∶1∶3）；③三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（8∶1∶3∶0.1）。經對比分析，最終確定采用前處理方法③和展開體系③的組合，其結果準確可靠，操作性強，且斑點清晰、分離度好。本實驗還考察了不同顯色情況，結果發現，噴以磷鉬酸-乙醇（1∶10）溶液，在105～110℃，加熱至少5 min，斑點可達最佳清晰度。梯度點樣對比后，確定供試品溶液、對照品溶液和對照藥材溶液的點樣量分別為2、2、5 μl即可[10-11]。

石菖蒲的薄層色譜中，考察了兩種前處理方法，分別為：①加60～90℃石油醚，水浴加熱后回流提取；②加水加熱回流后上清液用石油醚（60～90℃）振搖提取。考察了兩種展開體系，分別為：①石油醚-乙酸乙酯（4∶1）；②環己烷-乙酸乙酯（9∶1）。比較了兩種顯色后檢視條件，分別為：①噴以香草醛-硫酸（5∶95）溶液；②置碘蒸氣中熏后，然后在日光燈下、紫外光燈（365 nm）下分別檢視。結果顯示，水加熱回流之后用石油醚萃取比石油醚直接加熱回流提取效果好，展開劑以體系②具有更好的分離效果，碘熏蒸后紫外光下檢視斑點更加明顯。梯度點樣確定供試品溶液和對照藥材的點樣量均為5 μl時，斑點即可清晰觀察[12-13]。

3.3 檢查

按照《中華人民共和國藥典》（2020年版）第四部通則規定，對常規檢查項目檢驗后發現，3批天麻熄風膠囊的水分含量均高于標準規定，可能是由于所使用的原料藥水分較高、藥品貯存條件不達標或生產加工過程不規范等原因所致。裝量差異超出限度范圍，表明藥品生產工藝，尤其是灌裝過程存在風險。由此可見，醫院制劑的質量問題尚多，應密切關注[14-15]。

4 結論

本實驗建立了醫院制劑天麻熄風膠囊的性狀特征、內容物粉末的顯微特征以及個別藥味的薄層色譜鑒別方法，便于實驗操作，具有較強專屬性強和實用性，可用于醫院制劑天麻熄風膠囊的質量控制，為保障藥品提供技術支持。但是目前的試驗尚不夠全面，后續還要加強對該醫院制劑處方中其他尚未涉及的藥味的質量控制標準及方法，進行深入的研究。