艾曲泊帕乙醇胺的波譜學特征與結構確證

趙 燕，陳延安，李雨凡，程 強

（浙江海正藥業股份有限公司，浙江 臺州 318000）

艾曲泊帕（Eltrombopag）作為促血小板生成素受體激動劑，臨床上可用于血小板減少癥的治療[1]。2008 年11 月20 日，美國食品藥品監督管理局（USFDA）批準英國葛蘭素史克公司的艾曲泊帕上市[2]，艾曲泊帕成為首個獲準治療成人慢性免疫性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）的口服非肽類血小板生成素受體激動劑，其批準對治療ITP 是一重要的里程碑[3]。艾曲泊帕口服活性乙醇胺鹽是一種紅色或褐色粉末，其化學名稱為：3'-{（2Z）-2-[1-（3，4-二甲苯基）-3-甲基-5-氧代-1，5-二氫-4H-吡唑-4-亞基]肼基}-2'-羥基-3-聯苯基甲酸2-氨基乙醇鹽，分子式：C25H22N4O4·C4H14N2O2，相對分子量為564.6，CAS 登記號為[496775-62-3]，其化學結構式如圖1 所示。目前，已有文獻報道艾曲泊帕的溶出度方法研究[4]、合成工藝研究、治療療效研究[5]等，但尚未見到其波譜學數據的報道，而對化合物結構進行分析，波譜學數據的歸納是必要的。本文采用紫外吸收光譜（UV）、紅外吸收光譜（IR）、高分辨質譜（HRMS）、核磁共振（NMR）和X-射線粉末衍射（PXRD）等分析測試技術，對艾曲泊帕乙醇胺樣品進行全面完整的波譜學表征和結構確證，為其質量控制和結構解析提供較全面的參考依據。

圖1 艾曲泊帕乙醇胺的化學結構

1 儀器與材料

儀器：島津IRAffinity-1S 型傅里葉紅外光譜儀，SHIMADZU UV-2600 型紫外分光光度儀，Agilent 1260 LC-6540 Q-TOF 高分辨質譜儀，BRUKER AVANCE 400 型超導核磁共振波譜儀，NETZSCH DSC200F3 差示掃描量熱儀，Rigaku D/max-2200；RigakuSmartLab SE X-射線粉末衍射儀。

材料：艾曲泊帕乙醇胺（浙江海正藥業股份有限公司，HPLC 分析純度大于98%，符合化學藥物結構確證的需要）。

2 方法與結果

2.1 紅外光譜（IR）

以溴化鉀壓片法測試艾曲泊帕乙醇胺樣品的IR光譜，譜圖如圖2 所示，紅外光譜吸收峰見表1。經IR數據分析，艾曲泊帕乙醇胺分子結構中有芳環、氨基、羥基、羧酸根、酰胺、甲基和亞甲基等基團，與艾曲泊帕乙醇胺化學結構中主要官能團基本一致。

表1 艾曲泊帕乙醇胺的IR 數據

圖2 艾曲泊帕乙醇胺的紅外光譜圖

2.2 紫外吸收光譜（UV）

將適量樣品分別溶于水、0.1 mol·L-1HCl 溶液、0.1 mo·lL-1NaOH 溶液中，測定其紫外吸收光譜。樣品的紫外吸收數據表明樣品有紫外活性，樣品分子結構中含有不飽和基團共軛體系。紫外吸收光譜數據及解釋見表2。

表2 艾曲泊帕乙醇胺的UV 數據

2.3 核磁共振譜（NMR）

艾曲泊帕乙醇胺的核磁共振譜如圖3—圖8 所示，1H NMR 和13C NMR 數據歸屬見表3。

表3 艾曲泊帕乙醇胺的1H 和13C NMR 數據

圖3 艾曲泊帕乙醇胺的1H NMR 譜

圖4 艾曲泊帕乙醇胺的1H-1H COSY 譜

圖5 艾曲泊帕乙醇胺的13CNMR 譜

圖6 艾曲泊帕乙醇胺的DEPT 135°譜

圖8 艾曲泊帕乙醇胺的HMBC 譜

化合物結構片段1 的1H NMR 數據歸屬如圖9所示。

圖9 艾曲泊帕乙醇胺化合物結構片段1

1H NMR 譜中，根據積分面積、化學位移規律，δ=2.20 為單峰，相當于3 個質子，歸屬為25-CH3。1H-1H COSY 譜顯示與δ=7.07～7.11 的氫相關，δ=7.07～7.11 的氫歸屬為23-CH。1H-1H COSY 譜顯示δ=7.07～7.11 的氫與δ=7.80～7.85 的氫相關，δ=7.80～7.85 的氫歸屬為24-CH。

δ=2.25 為單峰，相當于3 個質子，歸屬為26-CH3。1H-1H COSY 譜顯示與δ=7.80～7.85 的氫相關，δ=7.80～7.85 的氫歸屬為20-CH。

化合物結構片段2 的1H NMR 數據歸屬如圖10所示。

圖10 艾曲泊帕乙醇胺化合物結構片段2

δ=2.40 為寬單峰，相當于3 個質子，歸屬為18-CH3。δ=8.24 為單峰，相當于1 個質子，歸屬為7-CH。

δ=7.64 為二重峰，耦合常數為7.4 Hz，相當于2 個質子，一個歸屬為5-CH 和一個活潑氫。1H-1H COSY 譜顯示與δ=7.38～7.42 的氫相關，δ=7.38～7.42 的氫歸屬為4-CH。1H-1H COSY 譜顯示δ=7.38～7.42 的氫與δ=7.80～7.85 的氫相關，δ=7.80～7.85 的氫歸屬為3-CH。

δ=6.89 為寬單峰，相當于1 個質子，歸屬為10-CH。1H-1H COSY 譜顯示與δ=7.07～7.11，7.38～7.42 的氫相關，δ=7.07～7.11，7.38～7.42 的氫分別歸屬為11-CH 和9-CH。

化合物結構片段3 的1H NMR 數據歸屬如圖11所示。

圖11 艾曲泊帕乙醇胺化合物結構片段3

δ=2.89 和δ=3.63 均為三重峰，耦合常數分別為4.8、5.0 Hz，分別歸屬為28-CH2和27-CH2。28-CH2和27-CH2均有4 個質子，故從質子個數可推測化合物含有二分子的乙醇胺。

13C NMR 解析如下：從13C NMR 圖譜可知，共有23 個峰，由于樣品分子中存在兩分子乙醇胺結構，有2對碳原子的化學位移重疊，又由于樣品分子有4 對碳原子的化學位移重疊，因此樣品分子應該有29 個碳原子，與艾曲泊帕乙醇胺化學結構式相符。由DEPT135°譜可知，樣品分子的29 個碳原子分別為3 個伯碳，4個仲碳，10 個叔碳及12 個季碳原子。

甲基典型峰碳譜數據歸屬：DEPT135°譜表明，δ=17.58，19.27，20.24 為伯碳原子的化學位移，HSQC 譜表明，δ=17.58 的碳原子與18-CH3（δ=2.40）的氫相關，歸屬為18 號碳；δ=19.27 的碳原子與25-CH3（δ=2.20）的氫相關，歸屬為25 號碳；δ=20.24 的碳原子與26-CH3（δ=2.25）的氫相關，歸屬為26 號碳。

羰基典型峰碳譜數據歸屬：δ=162.50，DEPT135°譜不出峰，表明為羰基季碳原子，歸屬為16 號碳。δ=171.48，DEPT135°譜不出峰，表明為羰基季碳原子，HMBC 譜顯示與3，4，7 號氫遠程相關，歸屬為1 號碳。

化合物結構片段3 的碳譜數據歸屬：DEPT135°譜表明，δ=41.98，58.46 為仲碳原子的化學位移，從高度可以看出各含2 個碳原子，HSQC 譜表明，δ=41.98 的碳與28-CH2（δ=2.89）的氫相關，歸屬為28 號碳；HSQC譜表明δ=58.46 的碳與28-CH2（δ=3.63）的氫相關，歸屬為27 號碳。

四對重疊峰碳譜數據歸屬：DEPT135°譜表明，δ=127.64 為叔碳原子的化學位移，從高度可以看出含2個碳原子，HSQC 譜表明δ=127.64 的碳與3，4 號氫（δ=7.80～7.85，7.38～7.42）的氫相關，因此δ=127.64 的碳歸屬為3 和4 號碳。

DEPT135°譜表明，δ=129.81 為叔碳原子的化學位移，HSQC 譜表明δ=129.81 的碳與15，23 號氫（δ=7.07～7.11）的氫相關；從高度可以看出δ=129.81 應該含有2 個碳原子。因此，δ=129.81 的碳歸屬為15 和23號碳。

δ=136.40 碳原子，DEPT135°譜不出峰，表明為季碳原子，HMBC 譜顯示與25、26、23 號氫遠程相關，歸屬為21 和22 號碳。

δ=138.17 碳原子，DEPT135°譜不出峰，表明為季碳原子，從高度可以看出含有2 個碳原子，HMBC 譜顯示與4，5，10 號氫遠程相關，歸屬為6 和13 號碳。

其他峰碳譜數據歸屬：δ=129.54 碳原子，DEPT135°譜不出峰，表明為季碳原子，HMBC 譜顯示與3，4 的氫遠程相關，歸屬為2 號碳。

DEPT135°譜表明，δ=130.52，130.86 為叔碳原子的化學位移。HSQC 譜表明δ=130.52 的碳與7 號氫（δ=8.24）的氫相關；δ=130.86 的碳與5 號氫（δ=7.64）的氫相關；因此δ=130.52，130.86 的碳分別歸屬為7 和5號碳。

DEPT135°譜表明，δ=115.56，119.21 為叔碳原子的化學位移。HSQC 譜表明δ=115.56，119.21 的碳與24，20 號氫（δ=7.80～7.85）的氫相關，結合HMBC 譜，δ=119.21 的碳和26-CH（3δ=2.25）的氫遠程相關，因此δ=115.56，119.21 的碳分別歸屬為24 和20 號碳。

δ=138.97 碳原子，DEPT135°譜不出峰，表明為季碳原子，HMBC 譜顯示與20，23，24 號氫遠程相關，歸屬為19 號碳。δ=140.16 碳原子，DEPT135°譜不出峰，表明為季碳原子，HMBC 譜顯示與9 號氫遠程相關，歸屬為8 號碳。δ=149.99 碳原子，DEPT135°譜不出峰，表明為季碳原子，HMBC 譜顯示與11 號氫遠程相關，歸屬為12 號碳。δ=138.34 碳原子，DEPT135°譜不出峰，表明為季碳原子，歸屬為17 號碳。

2.4 高分辨率質譜（HRMS）

樣品的HRMS 圖譜結果顯示質荷比為443.170 0的離子峰為[M-C4H14N2O2+H]+，高分辨質譜確定[MC4H14N2O2+H] +443.170 0 離子峰的元素組成為C25H23N4O4（與理論值偏差1.3 mDa），證明本化合物的元素組成為C25H22N4O4·C4H14N2O2，與艾曲泊帕乙醇胺的分子式一致。樣品的HRMS 圖譜如圖12 所示。

圖12 艾曲泊帕乙醇胺的HRMS 譜

2.5 熱分析（DSC）

DSC 升溫范圍為30～160 ℃，升溫速率為10 ℃/min。結果顯示，樣品隨溫度升高經歷1 個吸熱峰，推測為樣品熔融峰，切點溫度為137.5 ℃。樣品的熱分析DSC 曲線如圖13 所示。

圖13 艾曲泊帕乙醇胺的DSC 圖

2.6 X-粉末射線衍射（PXRD）

采用X 射線粉末衍射儀對艾曲泊帕乙醇胺樣品進行檢測。在2θ=3～60°范圍內掃描，工作電壓為40 kV，工作電流為40 mA，掃描速率為6°/min，步長為0.01°。其主要特征峰見表4，與專利（CN102448942A）中晶型I 的衍射峰對比[6]，2θ/°基本一致，故可確定艾曲泊帕乙醇胺的晶型為晶型I。

表4 艾曲泊帕乙醇胺的PXRD 數據

3 結束語

通過UV、IR、HRMS 及NMR 一維及二維譜檢測技術，對樣品進行檢測分析獲得了目標化合物的波譜學數據，經解析分析其分子結構與艾曲泊帕乙醇胺一致。并且通過熱分析、X-射線粉末衍射測試技術進行佐證，最終準確確證艾曲泊帕乙醇胺的化學結構和晶型。以上波譜學特征分析不僅能夠準確說明艾曲泊帕乙醇胺的化學結構，也為該藥物定性化學合成研究和質量控制提供了客觀的參考依據。