清郁和降湯抑制反流性食管炎大鼠5-HT釋放及TGR5/TRPA1通路蛋白表達(dá)

周易， 黃雨晴， 葉松

（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北武漢 430065；2.湖北省中醫(yī)院，湖北武漢 430061）

反流性食管炎（reflux esophagitis，RE）為臨床常見的消化系統(tǒng)疾病，其癥狀表現(xiàn)復(fù)雜，典型癥狀包括反復(fù)發(fā)作的燒心和反酸，其他癥狀還包括胸痛、腹痛、吞咽困難、咳嗽、咽喉炎等[1]，且發(fā)病率仍在不斷增高[2]。本課題組前期研究已經(jīng)證實，清郁和降湯治療肝胃郁熱型RE 患者，有較好的療效及安全性[3-5]；但其具體機制尚不明確。現(xiàn)階段研究表明，RE 的發(fā)病機制與抗反流防御功能的減弱、反流物對食管黏膜的攻擊作用增強、胃排空延遲、內(nèi)臟高敏感、遺傳及精神心理因素等多種因素有關(guān)[2]，5-羥色胺（5-HT）分泌異常在RE的發(fā)病過程中扮演重要的角色。5-HT 由腸道中腸嗜鉻細(xì)胞（ECs）產(chǎn)生，能夠與腸神經(jīng)系統(tǒng)（ENS）上的多種受體結(jié)合，是胃腸反射的關(guān)鍵激活劑[6-7]，還是與抑郁、焦慮等情緒密切相關(guān)的激素之一[8-10]。G 蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體（TGR5）是ECs 細(xì)胞中的受體之一，能夠促使ECs 細(xì)胞釋放5-HT[11]。瞬時受體電位錨蛋白1（TRPA1）和瞬時受體電位香草酸亞型1（TRPV1）作為人體細(xì)胞中介導(dǎo)內(nèi)臟敏感性的物質(zhì)，同樣能夠受到TGR5 的影響，進而誘導(dǎo)神經(jīng)源性炎癥，介導(dǎo)病理條件下的內(nèi)臟感覺高敏感[12]，促進RE 的發(fā)生。因此，本研究通過構(gòu)建RE大鼠病理模型，觀察清郁和降湯對RE 大鼠TGR5/TRPA1 通路及血清5-HT 等的影響，進一步探討清郁和降湯對RE 的干預(yù)機制，以期為其臨床治療RE提供參考，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物48只SPF級雄性SD大鼠，體質(zhì)量180 ～200 g，購自三峽大學(xué)實驗動物中心，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（鄂）2022-0012。飼養(yǎng)于湖北中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心SPF級實驗室，實驗動物使用許可證號：SYXK（鄂）2023-0067。隨機分籠，自由進食飲水，12 h 光照、12 h 黑暗交替。實驗動物方案已獲得湖北中醫(yī)藥大學(xué)動物倫理委員會審批，批號：HUCMS202204018。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后開始進行造模。

1. 2 藥物清郁和降湯組成：柴胡10 g、枳殼10 g、厚樸10 g、炒萊菔子15 g、陳皮10 g、砂仁6 g、黃連6 g、吳茱萸3 g、佛手10 g、香櫞皮10 g、郁金10 g、延胡索10 g、川楝子10 g、赤芍10 g、白芍10 g、海螵蛸10 g。所有中藥材由湖北省中醫(yī)院中藥房提供。應(yīng)用自動煎藥機進行煎煮、濃縮，4 ℃冰箱中儲存。成人用量為日1劑，每日2次，每次200 mL。 泮托拉唑鈉腸溶片，由湖南九典制藥股份有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：H20093501，40 mg/片，成人用量每日2 次，每次1 片；枸櫞酸莫沙比利片，由成都康弘藥業(yè)集團股份有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：H19990313，5 mg/片，成人用量每日3 次，每次1 片。動物灌胃劑量按成人體表面積換算。

1.3 試劑與儀器PCR產(chǎn)物Universal DNA 純化回收試劑盒[天根生化科技（北京）有限公司]；建庫試劑盒進行文庫的構(gòu)建：NEB Next?Ultra DNA Library Prep Kit（美國Illumina 公司）。5-HT、色氨酸羥化酶1（TPH1）、P 物質(zhì)（SP）、降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）等酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）試劑盒（江蘇酶免實業(yè)有限公司）；TGR5 抗體、TRPV1 抗體、磷脂酶C（PLC）抗體（武漢三鷹生物科技有限公司）；TRPA1 抗體、蛋白酶激活受體2（PAR2）抗體（美國Affinity 公司）；山羊抗小鼠/兔辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記IgG 二抗（美國Jackson 公司）。RM2016 病理切片機（上海徠卡儀器有限公司）；Eclipse E100 正置光學(xué)顯微鏡、DS-U3 成像系統(tǒng)（日本尼康公司）；CR21GⅡ高速冷凍離心機（日本日立公司）；ABI 5700 熒光定量PCR 儀（美國Applied Biosystems 公司）；FlexStation 3 多功能酶標(biāo)儀（美國Molecular Devices 公司）；DYCZ-24DN 垂直電泳槽、DYCZ-40 電轉(zhuǎn)儀（北京六一儀器廠）；TS-1 水平搖床（江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司）；CPA 電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.4 分組、模型制備與給藥將48只大鼠隨機分為假手術(shù)組，模型組，中藥低、中、高劑量組及西藥組，每組8 只。按照參考文獻方法[4]，采用前胃結(jié)扎結(jié)合外置幽門部分結(jié)扎術(shù)構(gòu)建RE 大鼠模型。操作步驟：所有大鼠于術(shù)前24 h 開始禁食，自由飲水。除假手術(shù)組，其余各組大鼠麻醉滿意后進行備皮，沿腹中線中段開口約2 cm，進入腹腔，尋找胃部組織并向下拉出，充分游離胃部及幽門附近組織。先以3-0 線繞過前胃并將前胃結(jié)扎，然后以3-0 線繞過幽門，把直徑為0.38 mm 的玻璃棒置于幽門上，將幽門與玻璃棒一同進行結(jié)扎，再將玻璃棒抽出，最后將胃部放入原位置后關(guān)腹。假手術(shù)組大鼠以同樣方式進行麻醉、開腹，將胃部組織提出暴露約5 min 后，放回原位置，關(guān)腹。造模后將所有大鼠給予常規(guī)消毒后放回動物房中，術(shù)后第1 天均禁食不禁水，術(shù)后第2 天均給予少量進食，術(shù)后第3 天恢復(fù)正常飲食。造模后2周，所有大鼠均存活。

術(shù)后第15天開始灌胃。按成人體表面積換算成動物給藥劑量。中藥低、中、高劑量組分別對應(yīng)給予清郁和降湯7.9、15.8、31.6 g·kg-1·d-1灌胃；西藥組給予泮托拉唑蒸餾水混懸液8.4 mg·kg-1·d-1、莫沙比利蒸餾水混懸液0.19 mg·kg-1·d-1灌胃，假手術(shù)組與模型組給予等體積蒸餾水灌胃。以上藥物及蒸餾水均以10 mL/kg進行灌胃，每日1次，連續(xù)灌胃14 d。

1.5 取材所有大鼠連續(xù)灌胃14 d 后，禁食不禁水24 h。所有大鼠麻醉滿意后，經(jīng)腹主動脈采血，離心取上清置于-80 ℃冰箱待檢。取賁門處及向上2 cm食管組織，將食管組織縱向分成2部分，一部分置于4%多聚甲醛溶液中進行固定和保存，用于病理切片制作，另一部分用于Western Blot 及PCR檢測，置于-80 ℃冰箱待檢。

1.6 觀察指標(biāo)與方法

1.6.1 大鼠一般狀態(tài) 每日觀察并記錄各組大鼠毛發(fā)色澤、體質(zhì)量、進食量、飲水量、精神狀態(tài)、活動等一般狀態(tài)。

1.6.2 食管黏膜病理學(xué)觀察 取食管組織，制備常規(guī)病理切片，HE 染色后，顯微鏡下觀察大鼠食管黏膜病理形態(tài)學(xué)表現(xiàn)。

1.6.3 ELISA法檢測血清5-HT、TPH1、SP、CGRP含量 將大鼠血液于4 ℃、3 000 r/min（離心半徑4 cm）離心20 min，收集上清液，按照5-HT、TPH1、SP、CGRP ELISA試劑盒說明書進行檢測。

1.6.4 Western Blot法檢測食管組織TRG5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 的蛋白表達(dá) 取食管組織，置于冰上裂解30 min，離心，收集上清。將蛋白樣品放入沸水浴10 min 進行變性，然后電泳，轉(zhuǎn)膜（PVDF），封閉。加入TRG5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 等一抗（1∶1 000 稀釋）4 ℃孵育過夜，洗膜；加入HRP 標(biāo)記IgG 二抗（1∶5 000 稀釋），洗膜；加入增強化學(xué)反應(yīng)試劑，待熒光帶明顯后，進行顯影和定影。最后應(yīng)用Image-pro Plus 軟件分析膠片條帶灰度，結(jié)果以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參蛋白灰度值比值表示目的蛋白的相對表達(dá)量，內(nèi)參為GAPDH。

1.6.5 實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）法檢測食管 組織TRG5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2的mRNA 表達(dá) 取食管組織，提取總RNA 后，在42 ℃、30 min，85 ℃、5 s 的條件下，用第一鏈cDNA 合成試劑盒將提取的總RNA 反轉(zhuǎn)成cDNA，在95 ℃預(yù)變性30 s，1 個循環(huán)，95 ℃變性15 s，60 ℃退火30 s，40個循環(huán)的條件下，對cDNA 進行PCR 擴增。引物序列：TGR5 上游5’-CCCTCATCG TCATCGCCAACC-3’，下游5’-GGAAGAAGCAG CCAGCAGGTG-3’，片段長度87 bp；TRPA1 上游5’-ATCCAAATAGACCCAGGCACG-3’，下游5’-CAAGCATGTGTCAATGTTTGGTACT-3’，片 段 長度227 bp；TRPV1 上游5’-GTGACGCTGATTGAA GAC-3’，下游5’-CCGATGGTGAACTTGAAC-3’，片段長度168 bp；PLC 上游5’-GCCGAGTATTGCC GATTA-3’，下游5’-ACTTCCCTCTGACTACTT-3’，片段長度235 bp；PAR2 上游5’-CAGTGGCA CCATCCAAGGAA-3’，下游5’-CAGTGGCACCAT CCAAGGAA-3’，片段長度138 bp。引物由武漢賽維爾生物科技有限公司合成。最后采用2-ΔΔCt方法計算目的基因的相對表達(dá)水平，內(nèi)參為GAPDH。

1.7 統(tǒng)計方法采用SPSS 26.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，多組比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用最小顯著性差異法檢驗；若數(shù)據(jù)為非正態(tài)分布，則采用非參數(shù)秩和檢驗。以，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 各組大鼠一般狀態(tài)比較所有大鼠均存活。其中：假手術(shù)組大鼠毛發(fā)色澤光鮮、精神充沛、活動敏捷，食量較多；給予造模手術(shù)的大鼠出現(xiàn)不同程度的精神萎靡，活動減少，毛發(fā)色澤晦暗，進食飲水量減少，體質(zhì)量增加不明顯等表現(xiàn)；開始藥物灌胃后，中藥低、中、高劑量組及西藥組大鼠的癥狀均出現(xiàn)不同程度的改善。

2.2 各組大鼠食管病理學(xué)表現(xiàn)比較圖1 結(jié)果顯示：假手術(shù)組大鼠食管黏膜中未見明顯炎癥反應(yīng)；模型組大鼠可見食管鱗狀上皮增厚及少量基底細(xì)胞增生，部分黏膜糜爛；中藥低、中、高劑量組及西藥組大鼠食管黏膜鱗狀上皮增生及炎性細(xì)胞浸潤均有所改善，未見明顯糜爛或潰瘍，其中，中藥中劑量組對食管黏膜的恢復(fù)作用最佳，可見食管黏膜無鱗狀上皮及基底細(xì)胞增生，未見糜爛和潰瘍。

圖1 各組大鼠食管病理學(xué)表現(xiàn)比較（HE染色法，×100）Figure 1 Comparison of pathological manifestations of the oesophagus among each group of rats（HE staining method，×100）

2.3 各組大鼠血清5-HT、TPH1、SP、CGRP含量比較圖2結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清5-HT、TPH1、SP、CGRP 含量均顯著增高（P＜0.01）；與模型組比較，中藥低、中、高劑量組及西藥組大鼠血清5-HT、TPH1、SP、CGRP 含量均顯著降低（P＜0.01）；中藥中劑量組大鼠血清5-HT、TPH1、SP、CGRP含量最接近假手術(shù)組。

圖2 各組大鼠血清5-HT、TPH1、SP、CGRP含量比較Figure 2 Comparison of serum 5-HT，TPH1，SP and CGRP levels among each group of rats

2.4 各組大鼠食管組織中TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 的蛋白表達(dá)比較圖3、表1 結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠食管組織TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 蛋白表達(dá)水平均顯著增高（P＜0.01）；與模型組比較，中藥低、中、高劑量組及西藥組大鼠食管組織TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.05），其中，以中藥中劑量組表達(dá)最低。

表1 各組大鼠食管組織TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 蛋白相對表達(dá)量比較Table 1 Comparison of relative protein expressions of TGR5，TRPA1，TRPV1，PLC and PAR2 in oesophageal tissue among each group of rats （±s）

表1 各組大鼠食管組織TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 蛋白相對表達(dá)量比較Table 1 Comparison of relative protein expressions of TGR5，TRPA1，TRPV1，PLC and PAR2 in oesophageal tissue among each group of rats （±s）

注：①，P＜0.01，與假手術(shù)組比較；②，P＜0.05，與模型組比較

組別假手術(shù)組模型組西藥組中藥低劑量組中藥中劑量組中藥高劑量組鼠數(shù)/只888888 TGR5 0.09±0.02 0.61±0.05①0.23±0.07②0.24±0.05②0.18±0.05②0.25±0.02②TRPA1 0.53±0.05 0.89±0.05①0.66±0.06②0.69±0.01②0.60±0.01②0.67±0.01②TRPV1 0.38±0.03 0.78±0.05①0.49±0.05②0.51±0.09②0.41±0.06②0.45±0.04②PLC 0.34±0.02 0.64±0.08①0.50±0.04②0.52±0.03②0.38±0.05②0.55±0.02②PAR2 0.64±0.05 0.96±0.06①0.80±0.05②0.81±0.07②0.69±0.07②0.78±0.02②

圖3 各組大鼠食管組織中TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2的Western Blot電泳條帶圖Figure 3 Western Blot electrophoretic strip plots of TGR5，TRPA1，TRPV1，PLC，PAR2

2. 5 各組大鼠食管組織TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2的mRNA表達(dá)比較表2結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠食管組織TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 的mRNA 表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，中藥低、中、高劑量組及西藥組大鼠食管組織TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 的mRNA 表達(dá)水平降低（P＜0.05）；中藥中劑量組上述各指標(biāo)的蛋白表達(dá)水平最接近假手術(shù)組。

表2 各組大鼠食管組織TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 的mRNA相對表達(dá)量比較Table 2 Comparison of relative mRNA expressions of TGR5，TRPA1，TRPV1，PLC and PAR2 in oesophageal tissue among each group of rats （±s）

表2 各組大鼠食管組織TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 的mRNA相對表達(dá)量比較Table 2 Comparison of relative mRNA expressions of TGR5，TRPA1，TRPV1，PLC and PAR2 in oesophageal tissue among each group of rats （±s）

注：①，P＜0.01，與假手術(shù)組比較；②，P＜0.05，與模型組比較

組別假手術(shù)組模型組西藥組中藥低劑量組中藥中劑量組中藥高劑量組PAR2 48.12±13.51 148.12±35.19①82.30±27.34②70.40±30.96②65.26±21.20②90.10±21.54②鼠數(shù)/只888888 TGR5 10.48±10.28 65.65±37.21①29.84±12.90②29.11±14.49②18.55±13.64②22.84±18.45②TRPA1 8.84±0.64 57.80±39.71①23.54±17.36②21.31±18.66②10.78±7.09②18.45±6.49②TRPV1 7.84±8.20 54.75±15.94①29.84±11.76②31.59±20.14②19.24±9.84②33.45±17.68②PLC 149.20±38.03 286.01±20.01①192.20±19.75②163.66±24.67②188.17±20.24②198.54±31.75②

3 討論

反流性食管炎（RE）歸屬于中醫(yī)學(xué)“吐酸”“食管癉”等范疇，其基本病機為“胃失和降，濁氣上逆”，以和胃降逆為治療大法。RE的中醫(yī)病機特點有三，“一為逆，二為熱，三為郁”，均與肝密切相關(guān)[1]。肝屬木，主疏泄，喜條達(dá)而惡抑郁，肝氣郁滯，再乘脾土，導(dǎo)致肝胃、肝脾不和；氣機郁滯日久，有余而化火，火邪生酸，肝膽邪熱犯及脾胃，致脾氣不升，胃氣不降，肝不隨脾升，膽不隨胃降，最終出現(xiàn)胃氣挾火熱之邪而上沖；脾胃虧虛，無以運化水濕，進而導(dǎo)致痰濁內(nèi)蘊，痰濁與郁滯的氣機阻隔于胸膈，胃氣不得降而終上逆，最終出現(xiàn)胃中內(nèi)容物侵襲食管，造成黏膜損傷及反酸、燒心等癥狀。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究[13-14]表明，內(nèi)臟高敏感是包括RE 在內(nèi)的多種消化道系統(tǒng)疾病的主要發(fā)病原因。由內(nèi)臟高敏感所形成的內(nèi)臟超敏反應(yīng)與情緒不佳、潛在心理異常等原因相關(guān)[15-16]，該觀點與中醫(yī)觀點中的“肝郁”表現(xiàn)出的情志活動異常有異曲同工之妙。而不良情緒與心理會導(dǎo)致機體對生理和有害刺激的感知增強，同時也對食管造成更多的反流[16]，最終導(dǎo)致RE 的發(fā)生。

在本研究中，清郁和降湯以和胃降逆為主、佐以清熱疏肝為治療大法。方中以柴胡疏肝解郁，條達(dá)肝氣，鼓舞脾胃清陽上行，為君藥。枳殼、厚樸調(diào)中焦之氣機升降，以降為主，與柴胡相伍，一升一降，加強氣機之調(diào)理；黃連與吳茱萸一清一溫，辛開苦降，使肝氣得疏，肝火得清，胃氣得降；郁金既可助柴胡疏肝解郁，條達(dá)肝氣，又可活血行氣止痛：故以枳殼、厚樸、黃連、吳茱萸、郁金共為臣藥。萊菔子消食降氣除脹，陳皮理氣健脾和中，砂仁醒脾和胃，三藥合用，可健運中州，恢復(fù)中焦氣機升降；佛手、香櫞皮同歸肝經(jīng)、胃經(jīng)，善疏肝解郁，理氣調(diào)中；川楝子疏肝氣、瀉肝火，延胡索行氣活血止痛，兩藥相配，可使氣行血暢，疼痛自止；白芍酸斂肝陰，養(yǎng)血柔肝止痛；赤芍善清肝瀉火、泄血分郁熱；海螵蛸制酸斂瘡降逆，為治療胃酸過多之佳品：共為佐藥。如葉松教授所言：蓋氣行則氣血痰火濕食等邪皆能消散矣[17]。本課題組前期應(yīng)用清郁和降湯治療肝胃郁熱型RE 患者，獲得良好的療效[3-4]。本研究結(jié)果表明，清郁和降湯可明顯改善RE大鼠食管黏膜病理損傷。

5-HT 是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中的一種關(guān)鍵神經(jīng)遞質(zhì)，在調(diào)節(jié)腸道動力和神經(jīng)功能方面均發(fā)揮著十分重要的作用[18]。研究[19]表明，5-HT 可激活結(jié)腸中含降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）感覺神經(jīng)元上的5-羥色胺4（5-HT4）/5-HT1P 受體，啟動結(jié)腸蠕動反射，同時亦可通過與5-羥色胺3（5-HT3）受體結(jié)合，引發(fā)結(jié)腸節(jié)律性推進運動的產(chǎn)生和傳播，推動糞便顆粒由近端結(jié)腸向肛門移動。5-HT 除了能夠在腸道中發(fā)揮作用之外，同樣能夠影響到大腦[20]。5-HT 以色氨酸（Trp）作為前體，在色氨酸羥化酶（TPH）的參與下生成；TPH 能夠控制5-HT 的合成速率[21]。TPH 又包含TPH1 和TPH2 兩種亞型，前者存在于ECs細(xì)胞內(nèi)，后者主要在大腦中縫核中發(fā)現(xiàn)[22]。作為腦-腸互動中重要的神經(jīng)遞質(zhì)之一，5-HT 的過度表達(dá)和堆積能夠觸發(fā)興奮性毒性，損傷迷走神經(jīng)調(diào)控功能，進而導(dǎo)致內(nèi)臟高敏感狀態(tài)[23]。TGR5 能夠在ECs 細(xì)胞中激活細(xì)胞膜上的磷脂酶C（PLC），進而促進5-HT 的分泌[24]，與此同時，細(xì)胞中的蛋白酶激活受體2（PAR2）受到PLC活化的影響，激活蛋白激酶C，引起TRPV1 磷酸化，激活TRPV1，提高TRPV1 對內(nèi)源性激動劑的敏感性[25]。TRPA1 也會被激活[26]。二者均是瞬時受體電位（TRP）通道家族中的成員，該家族的蛋白與疼痛相關(guān)通路表達(dá)密切相關(guān)[27]。TRPV1 磷酸化后，細(xì)胞外的鈣離子內(nèi)流，引發(fā)神經(jīng)末梢去極化反應(yīng)，釋放CGRP 和SP[28]，進而導(dǎo)致滲出及炎癥反應(yīng)，反應(yīng)在機體上即為疼痛和燒心等癥狀[29-30]。TRPV1 和TRPA1 的激活形成正向聯(lián)動效應(yīng)，加重炎癥及疼痛[31]。目前認(rèn)為，RE 與TRPV1 密切相關(guān)，其作用機制可能與內(nèi)臟高敏狀態(tài)有關(guān)[29]，TRPA1 是TRPV1 的受體之一，且廣泛分布于胃腸道中[32]，其所介導(dǎo)的通路同樣能夠引起內(nèi)臟敏感性及感覺異常的情況[33]。故推測，TGR5/TRPA1 通路異常，影響5-HT 分泌，進而導(dǎo)致內(nèi)臟高敏感情況的出現(xiàn)，最終發(fā)生RE。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠血清中5-HT、TPH1、SP、CGRP 含量顯著增高，食管組織中TRG5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 的mRNA 及蛋白表達(dá)水平顯著增高，與假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；中藥低、中、高劑量組及西藥組各指標(biāo)均得到明顯改善。表明清郁和降湯可有效抑制食管TGR5/TRPA1通路，減少5-HT的釋放，改善食管敏感性。

綜上所述，本研究成功建立了RE 大鼠模型，食管TGR5/TRPA1 信號通路關(guān)鍵產(chǎn)物如TRPA1、TRPV1、5-HT 表達(dá)均有所增高，呈內(nèi)臟高敏感狀態(tài)，而應(yīng)用清郁和降湯可顯著降低RE 大鼠血清中5-HT、TPH1、SP、CGRP 的釋放，同時降低大鼠食管TGR5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 的蛋白及mRNA 表達(dá)，進而糾正大鼠內(nèi)臟高敏感，對RE起到良好的治療作用。