新型抗真菌聚硫烷的合成和篩選及對白色念珠菌的抑菌作用

姚依然,楊 普,吳浩東,甘 磊,畢師誠,曹禮靜,王慶華*

(1.西南大學 動物醫學學院,重慶 榮昌 402460;2.重慶市榮昌區職業教育中心,重慶 榮昌 402460)

白色念珠菌(Candidaalbicans)廣泛存在于大自然環境中,可引起多種動物感染,尤其是免疫力低下的幼齡動物,常常通過皮膚、口腔或陰道黏膜侵入機體,治療不及時會繼發多系統疾病[1-3]。該菌常引起家禽死亡,特別是幼禽,據報道4周齡內的幼禽病死率可達50%[4],而3月齡以上成年禽類的感染易治愈。其中雞感染白色念珠菌后常表現精神沉郁、食欲減退、羽毛蓬亂,食欲廢絕,常常在感染的2 d內就會出現大批死亡,而動物往往缺乏相應的抗真菌劑治療,導致雞群的病死率超過30%[5]。此外,據報道感染白色念珠菌后鴿子的發病率達10%,病死率達5%[6]。

現有的白色念珠菌治療藥物多為三唑類(如:氟康唑)、多烯類(如:兩性霉素B)、棘白菌素類(如:卡泊芬凈)等傳統的抗真菌性藥物,而這些藥物的大量使用會導致耐藥性白色念珠菌泛濫,且長期使用這些藥物還會產生各種毒副作用,影響肝、腎等臟器功能[7-10]。但目前在動物飼料和藥品中禁用絕大多數抗真菌藥[11-13],因此在這種政策背景下,開發新型的抗白色念珠菌的動物用抗真菌劑顯得極為迫切。很多研究表明,將有機硫化合物轉化為無機硫化物可以產生具有抑菌功效的聚硫烷[14-16],并且納米級聚硫烷顯示出高效的抗細菌活性、低細胞毒性、高生物相容性等優點[17-18],但目前尚缺乏聚硫烷抗侵襲性真菌(比如白色念珠菌)的相關研究報道。

本研究從發生了流行性皮膚病的重慶市某養雞場分離到疑似白色念珠菌的致病菌,對其進行形態學和分子生物學鑒定。采用皮膚涂布法構建白色念珠菌分離株的皮膚感染模型,并使用本實驗室合成的聚硫烷研究其抗真菌特性和對侵襲性真菌皮膚病的愈合作用。通過檢測其對致病菌的菌落大小、孢子萌發及凋亡與壞死、菌絲體數量等情況來探究其抑菌作用,為防控侵襲性真菌特別是白色念珠菌病的流行、開發新型抗真菌劑提供理論和技術支持。

1 材料與方法

1.1 病料來源及實驗動物經調研發現,重慶市某養雞場疑似發生侵襲性真菌流行性皮膚病,病雞精神萎靡,食欲不振,飲水量增加,皮膚發癢、干燥,羽毛雜亂無光澤,皮膚干燥,雞嗉囊腫大松馳,雞冠變暗,背腰部皮膚有一層灰白色鱗屑附著,用刀片采集作為檢測病料。

白來航雞140只,體質量1～2 kg,飼養于西南大學動物醫學院動物飼養室。每天定時飼喂,并清掃雞舍,提供良好的飼喂環境及條件。試驗結束后試驗雞被執行安樂死,本研究通過了西南大學實驗動物福利倫理審查(倫理審查號:IACUC-20200701-01)。

A.YPD平板上劃線培養出邊緣有皺褶的白色菌落;B.乳酸酚棉蘭染色后,顯微鏡下觀察到大量的藍色的芽生菌體(400×)

1.2 主要試劑酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基(YPD)購自北京索萊寶科技有限公司;藥敏紙片購自杭州濱和微生物試劑有限公司;乳酸酚棉藍染液購自青島海博生物科技有限公司;真菌DNA基因組提取試劑盒購自北京天根生化科技有限公司;2×Taq PCR Master Mix和DL2000 DNA Marker均購自北京擎科生物科技有限公司;凋亡壞死試劑盒購自上海碧云天生物科技公司;引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。

1.3 白色念珠菌的形態學鑒定和分子生物學鑒定

1.3.1病原菌的分離培養和形態學鑒定 用刀片刮取病雞背腰部皮膚鱗屑,將其接種于YPD液體培養基中,30℃、150 r/min震蕩增菌培養48 h,再接種于YPD固體培養基上,置于30℃恒溫培養箱培養72 h,并繼續傳代培養,觀察菌落特征,從純化后的單個菌落挑取病原菌進行乳酸酚棉藍染色鏡檢,觀察菌體染色情況[19]。

1.3.2病原菌的分子生物學鑒定 以真菌核糖體RNA基因的內轉錄間隔區(rDNA-ITS)為擴增目的基因,選用真菌rDNA—ITS通用擴增引物,引物序列:上游引物:5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′;下游引物:5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′。預計擴增產物的大小為500 bp[20-21]。PCR反應的特異性引物是根據白色念珠菌ITS1-ITS2部分的保守序列,采用生物信息學軟件Primer select設計1對特異性引物。上游引物:5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′;下游引物:5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′。預計擴增產物的大小為471 bp[22]。引物均由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。使用真菌DNA基因組提取試劑盒提取純培養病原菌DNA。RCR反應體系25 μL:2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL,DNA模板2 μL,上、下游引物各1 μL,Sterilized ddH2O補足25 μL。PCR反應條件:94℃ 4 min;94℃ 30 s;55℃ 30 s;72℃ 1 min,共35個循環;72℃ 10 min。擴增反應結束后,取5 μL擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳30 min(110 V),然后在凝膠成像儀上成像,觀察是否擴增出目的條帶,記錄結果并拍照保存。

1.4 新型聚硫烷的不同合成方法和抑菌作用測定

1.4.1新型聚硫烷的不同合成方法 取無機硫(硫化鈉、硫酸鐵)、有機硫(半胱氨酸、胱氨酸)按照設定的配方(配方1:硫化鈉1.21 g、乙酸鈉3.6 g、半胱氨酸0.5 g;配方2:硫化鈉1.21 g、半胱氨酸0.5 g;配方3:硫酸鐵為1.21 g、乙酸鈉3.6 g、胱氨酸0.5 g;配方4:硫酸鐵為1.21 g、胱氨酸0.5 g)分別使用20 mL蒸餾水混勻,置于37℃溫箱中,使用磁力攪拌器混合,置于200℃高壓反應釜分別反應6,12,24,36 h[14-15,23],高溫反應結束后,使用高速低溫離心機,12 000 r/min,4℃離心后取上清,分離出聚硫烷。并于馬爾文激光粒度儀上進行粒徑的測定。

1.4.2使用藥敏試驗(濾紙片擴散法)篩選出具有最佳抑菌活性的聚硫烷 將上述不同合成方法獲得的聚硫烷進行濾紙片擴散試驗,在YPD固體培養基上均勻涂布濃度為105CFU/mL的白色念珠菌,濾紙片放到平皿中,將平板倒置于30℃恒溫培養箱中培養24 h,觀察聚硫烷對白色念珠菌(濃度為105CFU/mL)的抑菌效果,重復3次,取平均值。

1.4.3最低抑菌濃度(MIC)的測定 YPD液體培養基稀釋菌液至濃度為3.5×105CFU/mL備用,用微量二倍稀釋法測定聚硫烷對白色念珠菌的MIC,重復3次。

1.4.4最低殺菌濃度(MBC)的測定 在上述MIC測定實驗的基礎上,進一步將MIC試驗中反應孔內未出現渾濁的培養液,接種至YPD液體培養基上進一步培養,如無白色念珠菌生長則認為該濃度具有殺滅白色念珠菌作用,此時最低的殺滅白色念珠菌的濃度記錄為MBC。

1.5 聚硫烷的毒性試驗預試驗選取60只雞,試驗前禁食12 h,按照10,40,80 g/kg的劑量灌服聚硫烷,觀察和記錄雞死亡情況,根據預實驗灌服聚硫烷后雞的狀態和死亡數,來設置正式試驗中灌服聚硫烷的劑量。根據預試驗的結果,正式試驗采用改良寇氏法,按照預試驗計算所得劑量間距,將雞分5組,每組10只,馴化飼養3 d,試驗前禁食不禁水12 h,經口灌服聚硫烷,灌胃3 h后自由進食。觀察并記錄各組死亡情況,根據按公式LD50=log-1[Xm-i(Σp-0.5)]計算,求半數致死量(LD50)。(注:Xm為最大劑量組劑量對數值;i為相鄰2組對數劑量的差值;p為各組雞病死率;∑P:各組動物病死率之總和)。

1.6 聚硫烷對雞白色念珠菌性皮膚病的治療作用在創建白色念珠菌性皮膚病疾病模型前,對實驗雞連續3 d注射地塞米松免疫抑制劑以降低雞的免疫力。而后劃破雞皮膚表皮層,制造10 mm×10 mm的傷口。創建皮膚傷口模型后,將實驗雞隨機分為白色念珠菌感染組、聚硫烷治療組、生理鹽水組(n=10)。吸取6.8×108CFU/mL白色念珠菌液50 μL均勻涂布到皮膚傷口處,創建白色念珠菌感染組。使用上述劑量的白色念珠菌感染傷口后,使用質量濃度為7.8 g/L的聚硫烷涂抹50 μL創建聚硫烷治療組,而生理鹽水組則在傷口處只涂抹50 μL的生理鹽水。

1.7 聚硫烷抑制白色念珠菌菌落生長分別取107,106,105,104,103CFU/mL白色念珠菌菌懸液10 μL滴至含不同質量濃度(0,0.10,0.20,0.39 g/L)聚硫烷的YPD固體平板上,于30℃恒溫箱中靜置培養10 d,以觀察聚硫烷對白色念珠菌菌落大小的影響。

1.8 聚硫烷抑制白色念珠菌孢子萌發率試驗使用液體YPD培養基將白色念珠稀釋至107CFU/mL,并用不同質量濃度的聚硫烷(0,0.10,0.20,0.39 g/L)30℃條件下處理4 h,加入PBS溶液重懸菌體,磁力攪拌器中攪拌8 min,使聚集成團的孢子均勻分散于溶液中。顯微鏡下觀察并計算孢子萌發率,孢子萌發率=萌發孢子數/總孢子數×100%[24]。每組設置3個重復,每個重復統計200個孢子的萌發率,取平均值。

1.9 聚硫烷抑制白色念珠菌菌絲體試驗根據參考文獻制備制備107CFU/mL的菌懸液,檢測聚硫烷抑制白色念珠菌菌絲體繁殖效果[8]。107CFU/mL的菌懸液用1 mL小牛血清重懸,于培養箱內30℃孵育4 h。取出1滴懸浮液,置于顯微鏡下確認有芽管出現后,將菌體重懸于RPMI-1640培養基中30℃恒溫培養箱中靜置孵育6 h,以生成菌絲體。根據聚硫烷質量濃度的不同,試驗分為4組,即:0,0.10,0.20,0.39 g/L,每組各設3個重復。使用RPMI-1640培養基將聚硫烷母液稀釋至所需的質量濃度(0,0.10,0.20,0.39 g/L)。于30℃恒溫培養箱處理24 h后用光學顯微鏡觀察不同質量濃度聚硫烷作用下的菌絲體。擴大培養至100 mL,記錄各組培養液中菌絲體的鮮重。

1.10 聚硫烷誘導白色念珠菌孢子凋亡和壞死試驗

1.10.1臺盼藍染色法檢測聚硫烷誘導白色念珠菌孢子的壞死率 臺盼藍染料正常情況下被細胞壁和細胞膜阻攔在活細胞外,只有細胞壁和細胞膜受損后,才能進入細胞,從而與壞死孢子的DNA結合,使DNA染為藍色,因此,活細胞一般不能被臺盼藍染色,而死細胞會被染成藍色[25]。具體操作方法是:白色念珠菌孢子懸浮液用生理鹽水稀釋至107CFU/mL,加入不同質量濃度的聚硫烷(0,0.10,0.20,0.39 g/L)到各試驗組。置于30℃恒溫培養箱培養4 h后取出,使用5 μL臺盼藍進行染色,10 min內于顯微鏡下計數染成藍色的白色念珠菌,并統計白色念珠菌壞死率。

1.10.2流式細胞儀進一步確認聚硫烷誘導白色念珠菌孢子的壞死率和凋亡率 107CFU/mL白色念珠菌孢子分別經不同質量濃度的聚硫烷(0,0.10,0.20,0.39 g/L)于30℃條件下處理4 h后,10 000 r/min離心5 min收集孢子。用400 μL Binding Buffer重懸,分別加入5 μL標記Ca2+依賴性結合蛋白的異硫氰酸熒光素(Annexin-FITC)、5 μL碘化丙啶(PI)進行染色。使用流式細胞儀檢測聚硫烷誘導的白色念珠菌孢子凋亡和壞死情況[26]。凋亡中期(Q2象限)和凋亡晚期的細胞(Q3象限)記錄為凋亡細胞,凋亡晚期細胞(Q2象限)和壞死細胞(Q1象限)記錄為壞死細胞。

A.不同配方(配方1、配方3、配方3原液)合成的聚硫烷對白色念珠菌的藥敏試驗;B.配方3合成的聚硫烷對白色念珠菌的MIC實驗

A.配方3合成的聚硫烷的粒徑分布特征;B.配方3合成的聚硫烷在自然光下呈棕黃色

A.在雞皮膚傷口涂抹白色念珠菌;B.在雞皮膚傷口涂抹白色念珠菌后,第3天涂抹聚硫烷;C.在雞皮膚傷口涂抹生理鹽水

A.不同質量濃度聚硫烷(0,0.10,0.20,0.39 g/L)抑制白色念珠菌在YPD固體培養基上的生長;B.不同質量濃度聚硫烷(0,0.10,0.20,0.39 g/L)抑制白色念珠菌菌落直徑的折線圖;C.顯微鏡下觀察不同質量濃度的聚硫烷抑制白色念珠菌孢子的萌發(放大10×40倍);D.不同質量濃度聚硫烷(0,0.10,0.20,0.39 g/L)抑制白念珠菌孢子的萌發率(與空白組(無)相比,**P<0.01)

A.未添加聚硫烷組的白色念珠菌菌絲體大量繁殖;B.0.10 g/L質量濃度的聚硫烷抑制了菌絲體數量;C.0.20 g/L質量濃度的聚硫烷聚硫烷抑制了菌絲體數量;D.0.39 g/L質量濃度的聚硫烷聚硫烷抑制了菌絲體數量

1.11 數據統計分析采用SPSS 22.0軟件進行數據處理,組間比較采用方差分析和t檢驗進行分析,以P<0.05為顯著水平,P<0.01為極顯著水平。

2 結果

2.1 白色念珠菌的形態學鑒定和分子生物學鑒定

2.1.1白色念珠菌的分離和形態學鑒定 分離菌在YPD固體培養基上劃線培養48 h后,平板上可見乳白色、圓形的菌落,其表面略粗糙,邊緣有皺褶出現,無色素沉著,菌落直徑為2 mm左右(圖1A);在YPD液體培養基中呈渾濁生長;經乳酸酚棉蘭染色,顯微鏡下鏡檢可見藍色的圓形或卵圓形單個、成堆排列的菌體,外部有莢膜,有的可見較小的芽生菌體,背景為淡藍色乳酸酚棉蘭染液(圖1B)。

2.1.2白色念珠菌的分子生物學鑒定結果 在提取病原菌DNA經PCR擴增后,用1%瓊脂糖凝膠進行電泳,其rDNA-ITS PCR擴增產物大小靠近500 bp左右(圖2A),白色念珠菌PCR產物在471 bp附近出現目的條帶(圖2B),擴增目的片段與預期白色念珠菌片段大小均一致。

2.2 不同方法合成的聚硫烷對白色念珠菌的藥敏試驗、MIC和MBC藥敏試驗結果表明(圖3A):和其他合成方法相比,使用配方3(硫酸鐵為1.21 g、乙酸鈉3.6 g、胱氨酸0.5 g)在200℃高溫反應釜中反應12 h合成的聚硫烷對白色念珠菌的抑菌效果最好,抑菌圈直徑是15.3 mm,白色念珠菌對使用配方3合成的聚硫烷是高度敏感的。而使用配方1(硫化鈉1.21 g、乙酸鈉3.6 g、半胱氨酸0.5 g)在200℃高溫反應釜中反應12 h合成的聚硫烷對白色念珠菌的抑菌效果比較好,抑菌圈直徑是11.2 mm。另外,白色念珠菌對配方1～配方4的原液均不敏感,具體見表1。

表1 不同合成方法獲得的聚硫烷對白色念珠菌的藥敏試驗結果

通過采用96孔板進行微量二倍稀釋法檢測本課題組合成的聚硫烷對白色念珠菌的MIC。通過微量二倍稀釋實驗發現聚硫烷對白色念珠菌的MIC是0.78 g/L(圖3B)。取MIC孔內澄清的培養液接種到新鮮的YPD固體培養基上培養,無菌生長的最低質量濃度為1.56 g/L,即聚硫烷對白色念珠菌的MBC是1.56 g/L。

2.3 聚硫烷的最佳合成方法(配方3)及粒徑測定使用藥敏篩選發現:使用配方3的無機硫和有機硫可以有效的轉化為具有最佳抗菌效果的聚硫烷,其合成方法為:硫酸鐵為1.21 g、乙酸鈉3.6 g、胱氨酸0.5 g使用蒸餾水20 mL混勻,置于37℃溫箱中,使用磁力攪拌器混合2 h后,置于200℃高壓反應釜反應12 h。聚硫烷合成反應結束后,12 000 r/min離心5 min,取上清,于馬爾文激光粒度儀上進行聚硫烷粒徑的測定。制得的聚硫烷平均粒徑在162 nm左右(圖4A),溶液澄清透明呈棕黃色(圖4B)。4℃保存備用。

2.4 聚硫烷(配方3)的毒性試驗毒性試驗發現當聚硫烷灌服劑量達到39.60 g/kg時,幼雞開始出現死亡,聚硫烷灌服劑量越高,幼雞的病死率越高。當聚硫烷灌服劑量達到101.86 g/kg時,幼雞全部死亡。據公式LD50=log-1[Xm-i(Σp-0.5)]計算,得出LD50為65 g/kg。在下述的聚硫烷對雞白色念珠菌性皮膚病的治療試驗中,要求治療劑量遠遠低于本研究得出的中毒劑量。

2.5 聚硫烷(配方3)對雞白色念珠菌性皮膚病的治療作用使用聚硫烷治療雞白色念珠菌性皮膚病的實驗結果顯示,與生理鹽水(圖5C)組相比,白色念珠菌感染組(圖5A)的傷口紅腫明顯,在伍德氏燈下發現傷口周圍有大量的黃綠色熒光,說明白色念珠菌大量繁殖,在第4～5天,傷口擴大,觸摸傷口有疼痛表現(雞表現興奮、狂躁),第6～9天傷口大小變化不明顯,在第10～13天傷口逐漸縮小自愈,痂皮脫落,伍德氏燈下沒有發現黃綠色熒光。而聚硫烷治療組(圖5B)在第6天,結痂脫落,傷口及周圍黃綠色熒光消失,伍德氏燈下沒有發現黃綠色熒光。

2.6 聚硫烷(配方3)抑制白色念珠菌菌落直徑、抑制孢子萌發率聚硫烷抑制白色念珠菌菌落直徑結果顯示(圖6A):在相同生長周期下(均培養10 d),在YPD固體培養基上,不同質量濃度的聚硫烷能夠抑制白色念珠菌菌落的直徑增長(圖6B),而且聚硫烷對白色念珠菌的抑制作用隨其質量濃度的增加而增加,呈劑量依賴性。

聚硫烷抑制白色念珠菌孢子萌發率測定結果顯示(圖6C):不同質量濃度的聚硫烷能夠顯著抑制孢子萌發率(P<0.01),其抑制作用隨其聚硫烷質量濃度的增加而增加,而且在光學顯微鏡下(放大10×40倍)也驗證了其抑菌作用隨聚硫烷質量濃度的增加而遞增的特征(依據培養液中聚硫烷質量濃度從低到高的順序,孢子萌發率依次平均為86%,25%,8%,2%)(圖6D)。綜上,聚硫烷可以有效抑制白色念珠菌菌落的生長,降低孢子萌發率,并呈劑量依賴效應。

2.7 聚硫烷(配方3)抑制白色念珠孢子轉化為菌絲體聚硫烷抑制白色念珠孢子轉化為菌絲體結果顯示(圖7):在未添加聚硫烷組中,由小牛血清和RPMI-1640培養基誘導培養的白色念珠菌在培養10 h后形成了相互交錯、致密細長的菌絲體(圖7A)。而和未添加聚硫烷組相比,添加0.10 g/L聚硫烷的菌絲體數量顯著較少(圖7B)(P<0.01),并且隨著聚硫烷質量濃度升高(圖7C、D),菌絲體鮮重(依據聚硫烷質量濃度從小到大的順序,每100 mL培養液中菌絲體的鮮重依次變為為6.9,1.1,0.9,0.4 g)逐漸降低,與聚硫烷質量濃度呈負相關的關系。因此聚硫烷抑制了孢子向侵襲性菌絲體的轉變,阻斷白色念珠菌的增值和傳播。

2.8 聚硫烷(配方3)誘導白色念珠菌孢子凋亡與壞死白色念珠菌孢子經臺盼藍染色后使用顯微鏡觀察并計算了聚硫烷處理下白色念珠菌孢子的壞死率。結果發現,在聚硫烷的作用下,白色念珠菌孢子出現壞死,并且壞死率隨著聚硫烷質量濃度的升高而增大(圖8A)。此外,還通過PI和Annexin-FITC雙染后使用流式細胞儀檢測了聚硫烷誘導白色念珠菌孢子的凋亡和壞死情況,結果發現隨著聚硫烷質量濃度(0,0.10,0.20,0.39 g/L)的升高,白色念珠菌孢子凋亡率(根據聚硫烷質量濃度的增加,凋亡率依次為3.30%,30.70%,43.00%,57.50%)和壞死率(根據聚硫烷質量濃度的增加,壞死率依次為0.39%,12.37%,16.81%,21.51%)相應升高(根據聚硫烷質量濃度的增加,依次為圖8B～E)。以上結果表明,聚硫烷通過劑量依賴性方式誘導白色念珠菌孢子發生凋亡和壞死。

3 討論

據統計,由真菌引起的皮膚感染中,白色念珠菌占感染的80%～90%[27],尤其在氣候劇烈變化、飼料和飼養環境變化和長途運輸情況下,白色念珠菌感染率更高[28]。本研究在重慶地區養雞場流行性皮膚病的皮屑中分離鑒定出白色念珠菌,通過動物回歸試驗,確認分離出的致病菌白色念珠菌可以引起雞皮膚感染,并合成和篩選了具有抗白色念珠菌特性的抗真菌劑聚硫烷,為當地侵襲性白色念珠菌的預防和治療打下了基礎。

采用不銹鋼釜體和聚四氟乙烯的熱反應體系,具有合成方法簡單,化學反應時間比較短的優點[29],適合大多數科研院所的科學試驗甚至小規模中試生產。多個文獻報道,通過化學方法制備的無機納米材料硫化物抗細菌和抗腫瘤效果明顯[30-31]。本研究采用次熱反應體系快速合成了具有抗侵襲性真菌的聚硫烷,而且在同樣的化學合成條件下,胱氨酸比半胱氨酸對白色念珠菌抑菌作用更強,其原因可能是胱氨酸比半胱氨酸的有機含硫量大,從而產生較多的聚硫烷。

本研究發現,聚硫烷能夠抑制白色念珠菌孢子萌發、抑制孢子向侵襲性菌絲體轉變,從而阻斷白色念珠菌的增值和傳播,其抑菌作用與聚硫烷濃度呈正相關。白色念珠菌孢子通常附著在宿主細胞上,當機體免疫屏障機能下降時白色念珠菌孢子萌發,往往通過角質層和上皮層侵入機體,也就是導致皮膚和黏膜損傷后隨之損傷其他內臟器官,最終導致動物大范圍發病甚至大規模死亡[32]。根據毒性試驗結果,聚硫烷對雞LD50為65 g/kg,遠遠大于本感染模型使用的治療劑量,因此本研究使用的劑量為安全劑量。本課題組相信后期經過合成工藝、合成配方的深入的優化后,期待聚硫烷可以更安全和更廣泛地應用于生物及醫藥領域。

綜上,本研究合成并篩選了抗侵襲性真菌的新型抗真菌劑聚硫烷,探究了其對流行性白色念珠菌的抑菌作用,填補了無機納米級硫化物抗侵襲性真菌的研究空白。