D-阿洛酮糖的生物轉化及冷卻結晶工藝優化

孫震,程倩倩,季勤怡,朱鉬藍,夏雨

(江南大學 食品學院,江蘇 無錫,214122)

D-阿洛酮糖作為一種稀有酮糖,是果糖的C-3差向異構體,其甜度相當于蔗糖的70%,能量僅為蔗糖的0.3%,具有低卡、綠色、甜度高,口感和容積特性與蔗糖類似的特點,被認為是蔗糖的理想替代甜味劑[1-2]。D-阿洛酮糖具有改善胰島素抵抗[3]、抗肥胖[4]和調節血脂代謝[5]等多種生理功能。除此之外,它還能改善產品品質,如提高明膠軟糖彈性和含水量,保持烘焙類產品的濕度和硬度[6-7]等。因此,D-阿洛酮糖作為蔗糖的替代品和食品添加劑具有重要的開發價值。由于D-阿洛酮糖的極其稀缺性和良好的生理功能,如何以較低的成本和簡便的工藝生產出大量的D-阿洛酮糖是近年的研究熱點。與復雜繁瑣且產率低的化學合成法相比,綠色高效的生物合成法成為新的研究熱點。生物法合成D-阿洛酮糖目前最重要的途徑是利用D-阿洛酮糖3-差向異構酶(D-allulose 3-epimerase, DAEase)催化D-果糖在C-3進行可逆的差向異構化反應獲得。近年來已有20余種不同微生物來源的DAEase在真核及原核表達系統中成功進行異源表達的報道[8],轉化率普遍在20%～35%,具有較好的應用前景。

對于純度要求較高的食品和藥品,后期的分離提純效率對其產業化生產具有重要意義。D-阿洛酮糖的工業化生產制備面臨著酶催化后D-阿洛酮糖與殘留底物分離的問題,這使D-阿洛酮糖的生產成本大大增加。模擬移動床技術(simulated moving bed,SMB)是一種可規模化生產的連續色譜分離技術,可以將生物合成法得到的D-阿洛酮糖從混合糖液中分離出來[9],但是設備昂貴,操作繁瑣,目前尚未普及使用。色譜分離法是一種基于離子交換原理的成熟工藝,成本低廉,操作方便且分離效果較好,也被應用于D-阿洛酮糖的料液分離。D-阿洛酮糖由于其較高的溶解度,且易吸潮,受熱易呈玻璃態[10],因此結晶難度大,難以用加熱干燥法制得最終的產品,嚴重限制了D-阿洛酮糖工業化生產。現有的報道中多為乙醇結晶法[11],但是該工藝需要使用大量有機溶劑,存在潛在的安全隱患,且存在產品收率低,容易引入外來雜質,結晶困難,工藝不穩定和成本過高等問題,因此乙醇結晶法并不適合于工業化生產。而冷卻結晶法具備操作簡單,設備要求低等優點,但已報道的冷卻工藝中仍存有結晶周期長、晶粒不穩定及回收率低等不足,需要進一步優化,以建立回收率高、能耗低的結晶方法。

與生物法轉化合成D-阿洛酮糖的上游產業研究相比,目前針對D-阿洛酮糖的分離純化、結晶等下游研究較少,為進一步提高D-阿洛酮糖的生產效率,降低工業化生產D-阿洛酮糖的成本,簡化下游的分離提純、結晶、干燥等工藝步驟的研究必不可少。因此,本研究通過在大腸桿菌中異源表達不同微生物來源的酮糖3-差相異構酶,利用重組工程大腸桿菌獲得D-阿洛酮糖料液,并嘗試優化D-阿洛酮糖的冷卻結晶工藝,完成D-阿洛酮糖從生物合成到分離純化,再到冷卻結晶的小試階段,為工業化生產稀有酮糖提供重要依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 菌株與質粒

本實驗中分別合成3種不同的D-阿洛酮糖3-差向異構酶的目的基因片段,微生物來源分別為根癌農桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)、多爾氏菌(Doreasp. CAG317)、梭狀芽孢桿菌(ClostridiumscindensATCC 35704),分別命名為DAE01、DAE02、DAE03。重組大腸桿菌BL21(DE3,pET28a-DAE01)、BL21(DE3,pET28a-DAE02)、BL21(DE3,pET28a-DAE03)為本實驗室構建。引物合成、質粒構建及核酸測序由南京金斯瑞股份有限公司完成。宿主菌大腸桿菌BL21(DE3)、質粒pET28a(+)由本實驗室保存。

1.1.2 基礎培養基及主要試劑

LB(Luria-Bertani)培養基(g/L):蛋白胨10、NaCl 10、酵母提取物5,121 ℃滅菌20 min,用于重組菌株的培養。T4 DNA連接酶、卡納霉素、異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG),生工生物工程(上海)股份有限公司;陽離子交換樹脂001×7、陰離子交換樹脂313、DTF-Ca2+色譜分離樹脂,江蘇蘇青集團;質粒小量提取試劑盒,上海捷瑞有限公司。D-阿洛酮糖標品(色譜純),阿拉丁;其他試劑均為國產分析純。

1.1.3 儀器與設備

Waters 1525EF高效液相色譜儀、Sugar-PakTM1糖柱,美國Waters公司;HL-2B型數顯恒流泵、DBS-100自動部分收集器,上海滬西分析儀器廠;ZQZY-70B振蕩培養箱,上海知楚儀器有限公司;Synergy H1多功能酶標儀,美國伯騰儀器有限公司;夾套結晶器,天津易普佳科技有限公司;YRE-201D型旋轉蒸發儀,鞏義市予華儀器有限責任公司;DZF-6096真空干燥箱,上海一恒儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 重組菌株的構建

在美國國家生物技術信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)數據庫上篩選得到3種不同微生物來源的編碼DAEase的基因序列,其中DAE01全長870 bp,DAE02全長870 bp,DAE03全長867 bp,通過密碼子優化后,將優化后的3條基因序列交由南京金斯瑞公司合成。在C端整合6×His tag,同時在基因序列的5′端與3′端分別引入NcoⅠ和XhoⅠ酶切位點,通過限制性位點將修飾的序列整合到pET-28a(+)載體中,構成重組質粒pET28a-DAE01、pET28a-DAE02、pET28a-DAE03。將上述3個重組質粒轉化到E.coilDH5α感受態細胞中,挑取陽性轉化子,接入帶有卡那霉素抗性的LB液體培養基中過夜培養,抽提質粒。將獲得的3個pET28a-DAEase重組質粒轉化到E.coilBL21(DE3)感受態細胞中,過夜培養,挑取單菌落驗證。驗證成功后,將菌液送上海生工公司測序,保存測序結果正確的重組菌。得到3株重組菌株E.coilBL21(DE3,pET28a-DAE01)、E.coilBL21(DE3,pET28a-DAE02)、E.coilBL21(DE3,pET28a-DAE03),圖1為質粒構建示意圖。

圖1 重組DAEase質粒構建Fig.1 The construction of DAEase recombinant plasmid

1.2.2 誘導表達及驗證

挑取驗證成功的重組菌,接種到卡那霉素終質量濃度為50 μg/mL的LB培養液中,37 ℃,200 r/min,培養8～10 h,以1.0%(體積分數)接種量轉接至卡那霉素終質量濃度為50 μg/mL的1 L LB培養基中擴大培養至OD600值為0.6～0.8,進行誘導表達。誘導表達條件為:IPTG終濃度為0.2～0.5 mmol/L,20 ℃,14～16 h。冰浴10 min停止誘導,管式離心機收集濕菌體后,使用Tris-HCl破胞緩沖液洗滌菌體,使菌液質量濃度控制在100 mg/mL,進行超聲波破胞,破胞條件為:功率300 W,工作1 s,停2 s,15 min。12 000 r/min離心15 min,取上清液進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)進行蛋白驗證。

1.2.3 全細胞轉化反應條件優化

將一定濃度的濕菌體與不同的緩沖體系(醋酸鹽緩沖液pH 5.0～6.0,磷酸鹽緩沖液pH 7.0～8.0,Tris-HCl緩沖液pH 9.0～10.0),充分混合得到的反應混合物在15～65 ℃下反應,以確定3種不同重組菌全細胞反應的最佳pH和溫度。接下來,再分別將終濃度為5 mmol/L的MnSO4、CoCl2、ZnCl2、NiCl2、MgCl2或EDTA加入反應混合物,反應10 min,然后高溫煮沸5 min停止反應。單位D-阿洛酮糖全細胞催化活力定義在全細胞反應條件下單位時間(1 min)內生成1 μmolD-阿洛酮糖所需要的全細胞的量,活力最高的值被確定為相對最高活力(100%)。在上述研究基礎上,分別將3株重組菌(濕菌體質量濃度為20～120 mg/mL)在不同質量濃度的D-果糖(50～750 g/L)下合成D-阿洛酮糖,在最佳的反應體系下反應5 h,以考察濕菌體濃度和底物濃度對全細胞反應的影響。

1.2.4D-阿洛酮糖的色譜分離

全細胞轉化得到的反應液使用陰、陽離子大孔樹脂吸附分離其中的鹽離子,脫鹽脫色處理后得到的混合溶液使用DTF-Ca2+分離樹脂進行分離純化。參考邢慶超等[12]的方法,具體參數為:DTF-Ca2+分離樹脂處理再生后裝填入型號為26 cm×100 cm帶夾套的層析柱中,填料體積為400 mL。待柱平衡后,將脫鹽處理后的D-果糖和D-阿洛酮糖混合溶液緩慢滴入到樹脂表面,一次進樣量為10 mL。洗脫條件為:去離子水為流動相,柱溫60 ℃,流速1 mL/min,用自動收集器收集洗脫樣品,通過HPLC檢測,與D-阿洛酮糖和D-果糖標準樣品比較,定性定量各管樣品中的D-果糖和D-阿洛酮糖的濃度。

1.2.5D-阿洛酮糖冷卻結晶工藝優化

采取冷卻結晶法對D-阿洛酮糖的料液進行結晶,利用HPLC檢測結晶率和純度來確定最優的結晶條件。基本方法為:分離純化后得到的阿洛酮糖料液經60 ℃旋轉蒸發后,濃縮至一定的料液質量濃度(1.1、1.2、1.3、1.4、1.5 g/mL),接著往體系中加入過篩的質量分數為2.0%D-阿洛酮糖晶種,然后按照一定降溫速率(1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ℃/h)降溫至終點溫度(5、10、15、20、25 ℃),終點溫度停留時間不超過2 h,攪拌速率分別為20、40、80、120,150 r/min,結晶析出晶體后,8 000 r/min離心過濾,4 ℃無水乙醇洗滌濾餅2～3次,50 ℃真空干燥至恒重。對料液濃度、終點溫度、降溫速率、攪拌速率等因素進行工藝優化。

1.2.6 HPLC定量分析

HPLC檢測條件[13]:Waters 600高效液相色譜儀、Sugar-pakTM1柱,Waters 2410示差遮光檢測器。流動相為超純水,柱溫85 ℃,流速0.4 mL/min,進樣量10 μL。D-阿洛酮糖標樣質量濃度為5 mg/mL。所有樣品均需用0.22 μm微孔濾膜過濾。D-阿洛酮糖轉化率計算如公式(1)、公式(2)所示:

(1)

(2)

式中:R1,D-阿洛酮糖生物轉化率,%;R2,D-阿洛酮糖結晶率,%;CA,D-阿洛酮糖溶液質量濃度,g/mL;CF,D-果糖溶液質量濃度,g/mL;mA,D-阿洛酮糖結晶后的干重,g;VA,D-阿洛酮糖料液體積,mL。

2 結果與分析

2.1 DAEase 的SDS-PAGE結果分析

由圖2的SDS-PAGE結果可知,誘導后的3株重組大腸桿菌破胞上清液均在25～35 kDa處有清晰可見的條帶,與目的蛋白的分子質量大小一致,說明3種酮糖3-差向異構酶在E.coliBL21(DE3)中均能實現正確表達,且為可溶性表達,目的蛋白的表達量也較高,得到的粗酶液可以進行后續的實驗。

圖2 重組大腸桿菌破胞上清液SDS-PAGE圖Fig.2 SDS-PAGE analysis of the recombinant E.coli BL21(DE3) cell-free extractsM-蛋白Marker;1-誘導后的E. coli BL21(DE3,pET28a-DAE01)破胞上清液;2-誘導后的E. coli BL21(DE3,pET28a-DAE02)破胞上清液;3-誘導后的E. coli BL21(DE3,pET28a-DAE03)破胞上清液(3種目的蛋白分子質量均約為32 kDa)

2.2 重組大腸桿菌轉化能力分析及優化

全細胞反應可以一定程度上減少反應的環境對游離酶的影響,在復雜的體系內,全細胞比游離酶更穩定,同時全細胞反應避免復雜的蛋白酶純化步驟[14]。構建成功的3株重組大腸桿菌按照1.2.3節中所述方法進行D-阿洛酮糖的全細胞生物轉化。為研究溫度對重組酮糖差相異構酶催化活性的影響,分別在不同溫度(15～65 ℃)條件下進行全細胞反應,結果如圖3-a所示。在一定范圍內隨著反應溫度的升高,3種不同重組全細胞的催化活性都逐步升高,這是因為當反應溫度升高,可逆反應的平衡向生成D-阿洛酮糖的方向移動,目的產物的產量越高,因此在較高的溫度下反應有利于提高D-阿洛酮糖的生物轉化率。DAE01和DAE03在45～55 ℃時相對催化活性較高,都能保持在80%以上。當溫度高于55 ℃時,DAE01和DAE03重組菌的活力急劇下降,相對催化活性低于60%,原因是溫度過高,導致酮糖差相異構酶的酶活性降低,從而使得重組大腸桿菌催化活性快速降低。在全細胞催化轉化過程中,反應溫度會通過影響酮糖差相異構酶的催化活力,進而顯著影響靜息細胞的催化活性。因此DAE01和DAE03重組菌的最適反應溫度為45～55 ℃,而DAE02的最適溫度為65 ℃,是3種不同重組菌中耐熱性最好的。

a-反應溫度;b-pH;c-底物質量濃度;d-濕菌體質量濃度圖3 不同因素對全細胞生物轉化能力的影響Fig.3 Effect of different factors on whole-cell bioconversion capacity

為研究pH對3株重組菌全細胞催化活性的影響,按照1.2.3節中所述,在不同pH條件的緩沖體系下分別進行了全細胞反應并測定了相對催化活力。由圖3-b可知,反應環境的pH值會影響酶蛋白的構象,同時影響活性中心殘基和底物分子的解離狀況,進而影響全細胞的催化活性。DAE01的最適pH和大多數其他的酮糖差相異構酶一樣是在偏堿環境下(pH 8.0)且當pH低于6.0或高于9.0時,幾乎失去了催化活性。DAE03在中性環境下呈現出其相對最高催化活力,而當處于偏酸或偏堿的體系下,其催化活力顯著降低,這與DAE01存在明顯差異,而DAE02則展現了較寬的pH適應性,其在弱酸條件下(pH 6.0)呈現最高的催化活性,并且在pH 7.0～8.0的反應環境中相對催化活力均高于60%。

金屬離子也會對全細胞催化反應產生一定的作用,金屬二價離子對重組菌相對催化活性的影響結果見表1。DAE01和DAE03為非離子依賴型酶,添加部分金屬離子可以提高其催化活性,如Co2+、Mn2+、Mg2+均有促進作用,而其他的金屬離子則會強烈抑制全細胞的催化活性;DAE02為Co2+依賴型酶[15],只有添加了Co2+才可以充分發揮其催化活性,當體系中未添加Co2+或是添加了其他金屬輔因子均會降低其催化活性。此外EDTA作為一種金屬螯合劑,添加到反應體系中,使得3種不同的重組細胞的催化活性受到顯著抑制,3種重組菌的相對催化活性均低于10%。因EDTA在反應體系中螯合了金屬離子,導致DAE02完全失去了催化活性。考慮到添加過多的金屬離子,在生產中不僅會提高生產成本,也會為下游生產的分離純化造成困難,因此DAE03在這一方面表現出較好的生產潛力。

表1 金屬離子對重組菌催化活性的影響Table 1 Effect of metal ions on recombinant enzymes activity

在上述實驗結果基礎上,將3種重組全細胞在各自最佳的反應溫度和pH下,添加合適的金屬輔離子,進行后續的轉化實驗。研究不同底物濃度和濕菌體對于D-阿洛酮糖生物轉化率的影響。反應5 h后取樣,離心并稀釋后過濾膜除菌,用HPLC檢測D-阿洛酮糖生成量并計算轉化率。結果如圖3-c和圖3-d所示。表達3種不同來源的DAEase的全細胞反應轉化率都隨著底物濃度和濕菌體濃度的增加而升高,在到達反應平衡后,不再持續增長。由結果也可知,3種全細胞的D-阿洛酮糖生物轉化率基本在20%～32%,其中表達DAE01的全細胞在pH 8.0,45 ℃條件下進行催化反應,在D-果糖達到600 g/L時,反應達到平衡后產物轉化率達到29.34%,反應液中D-阿洛酮糖溶液質量濃度約為176 g/L。表達DAE03的重組全細胞在pH 7.0,反應溫度為45 ℃,D-果糖質量濃度為750 g/L,添加濕菌體質量濃度為100 mg/mL時,達到最高的轉化效果,轉化率為32.19%。而表達DAE02的全細胞在pH 6.0,反應溫度為65 ℃,濕菌體質量濃度為120 mg/mL的條件下反應5 h后,最高轉化率達到32.60%,HPLC結果見圖4。綜合以上分析和未來工業化生產潛力等多重因素的考慮,DAE02在耐熱性、嗜弱酸性以及催化活性等方面都展現出更好的生產價值,因此后續將以表達DAE02的重組全細胞為主要研究對象繼續下游的D-阿洛酮糖生產工藝研究。

圖4 全細胞反應產物HPLC結果圖Fig.4 The HPLC analysis of whole-cell bioconversion

2.3 D-阿洛酮糖的色譜分離結果

色譜分離技術是利用不同物質在固定相和流動相中分配系數差異來分離混合物。基于上述結果,選擇全細胞轉化率最高的E.coliBL21(DE3,pET28a-DAE02)進行后續實驗,將所述的重組菌在最佳條件下反應,得到的反應液按照1.2.4節所述方法,進行脫鹽脫色及色譜分離后,由自動收集器收集后的樣品通過HPLC檢測,分別與標品進行比較,圖5為定量檢測每管洗脫樣品中的D-阿洛酮糖和D-果糖的濃度的結果。由圖5可知,實驗成功除去了反應體系中的鹽離子,并且實現了分離D-果糖和D-阿洛酮糖這兩種性質接近的組分的目的,且分離效果較好,可以得到純度為98.10%的D-阿洛酮糖。

a-每管中D-果糖和D-阿洛酮糖兩種不同組分的濃度;b-分離后的樣品HPLC結果圖圖5 色譜分離結果Fig.5 Chromatographic separation results

2.4 D-阿洛酮糖冷卻結晶工藝的優化結果分析

根據現有報道,目前D-阿洛酮糖結晶產率最高的工藝是采用乙醇體系進行結晶,通過優化乙醇用量等提升結晶率,但該法需添加大量有機試劑且未對結晶過程進行分析。而目前采用純水體系對D-阿洛酮糖進行重結晶的方法包括減壓蒸發及線性降溫結晶法[16]。這些方法的突出缺點在于能耗大,結晶周期長,收率一般不高于50%。因此本研究在現有冷卻結晶工藝的基礎上,采用純水體系進行D-阿洛酮糖的結晶,對關鍵因素進一步優化,提高結晶效率。

分別設置質量濃度為1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5 g/mL的D-阿洛酮糖料液以研究料液對結晶率的影響,結果見圖6-a。隨著D-阿洛酮糖溶液的料液濃度的升高,結晶率也在不斷升高。當料液質量濃度低于1.2 g/mL時,D-阿洛酮糖基本無法結晶析出,這與郭元亨等[11]的研究結果一致。說明在D-阿洛酮糖冷卻結晶過程中,析出晶體的總重量受料液濃度影響,料液濃度越大,析出的D-阿洛酮糖晶體質量越大。因為在一定溫度下,料液濃度越高,溶液的過飽和度越高,導致可析出的D-阿洛酮糖越多。但考慮到實際生產中,若要進一步升高D-阿洛酮糖溶液的料液濃度,能耗會急驟升高,旋蒸濃縮耗費時間也會顯著增加。另外,當濃度過高時,轉移濃縮的料液更為困難,物料損耗會很大,不利于工業生產,因此最佳的料液質量濃度應在1.4～1.5 g/mL。

a-不同料液質量濃度下結晶回收率;b-不同終點溫度下結晶回收率;c-不同降溫速率下結晶回收率;d-不同攪拌速率下晶體純度圖6 不同因素對D-阿洛酮糖冷卻結晶的影響Fig.6 Effect of different factors on the cooling crystallization of D-allulose

結晶的終點溫度同樣對D-阿洛酮糖的結晶過程影響顯著,計算D-阿洛酮糖在不同終點溫度的結晶率結果見圖6-b,在5～20 ℃區間內,隨著終點溫度的升高,結晶率也在顯著增加,而終點溫度低于25 ℃后,結晶率迅速降低,最適宜的結晶終點溫度應該選擇為20～25 ℃區間內。分析原因可能是體系中加入D-阿洛酮糖的晶種后,隨著晶體的長大,料液濃度逐漸下降;此時溫度下降又會導致料液的過飽和度增加量,大于晶體生長引起的過飽和度降低量,導致溶液絕對過飽和度不斷變大,使體系處于不穩定區,從而引發二次成核。當然終點溫度的升高可降低料液的黏度,提升溶質分子的擴散速率,從而提高晶體的生長速率,進而顯著降低介穩區寬度,促進成核發生[17]。而終點溫度過高時,料液的溶解度進一步增大,反而抑制了晶核的生長,不利于晶體的析出。

圖6-c為降溫速率對結晶的影響,料液冷卻的降溫速率越大,最終的結晶產率越低。這是因為冷卻速率越大,料液的最終過飽和度也越大,整個結晶周期耗時越短,而晶體生長速度是保持一定的,所以冷卻速率越快,D-阿洛酮糖的有效結晶時間越短,結晶出來的物質越少。而另一方面降溫速率過低,結晶周期過長,會增加結晶過程的能耗成本。因此綜合結晶率和結晶周期的時間成本兩方面因素,最佳的降溫速率2～2.5 ℃/h。

攪拌轉速也是結晶過程中的重要因素之一,利用HPLC測定不同攪拌轉速下D-阿洛酮糖結晶晶體純度,檢測結果見圖6-d,結晶過程中攪拌速率越高,最終的晶體純度會越低,當轉速為20 r/min時,產品的純度最高,達到98.70%。攪拌速率越高,導致結晶的推動力過大,易在體系中形成大量微晶,難以附著在晶核上,在溶液中直接以微晶形式存在,致使在離心過程中晶體微小無法從黏液中分離,也容易吸附雜質離子,導致產品的純度降低。

使用優化后的冷卻結晶工藝進行D-阿洛酮糖的結晶,其結晶率達到77.43%,得到D-阿洛酮糖結晶產品。由生物法轉化得到的D-阿洛酮糖和D-果糖混合料液經脫鹽脫色、色譜分離純化及濃縮后,再通過優化的冷卻結晶工藝得到的D-阿洛酮糖結晶產品沒有發生黏結現象、晶體粒度較為均一,且在全過程中均未發生美拉德反應,未產生結晶產品的褐變,產品品質較佳。

3 結論與展望

本研究成功構建了pET28a-DAE01、pET28a-DAE02、pET28a-DAE03重組質粒,并在E.coliBL21(DE3)中實現異源表達,進一步對不同全細胞反應條件進行探究,對比發現來源于Doreasp.CAG317的DAE02的相對催化活性更高,最高轉化率達到32.60%。與此同時對D-阿洛酮糖的下游生產工藝進行探索開發,總結出D-阿洛酮糖最佳結晶工藝條件為:D-阿洛酮糖料液質量濃度為1.4～1.5 g/mL,結晶終點溫度區間為20～25 ℃,降溫速率和攪拌速率分別為2～2.5 ℃/h和20 r/min。在此最佳條件下進行冷卻結晶,結晶率最高為77.43%。此工藝簡單易行,且不需要添加有機溶劑,可行性高。在之后的研究中仍需對D-阿洛酮糖的結晶動力學進行深入研究,獲得更為確切的晶體參數和結晶動力學方程,探究更穩定的工業化D-阿洛酮糖結晶工藝理論依據,降低生產成本。