當歸精準煮散飲片質量均一性分析

畢武　孫輝　任強

【摘要】目的：研究考察當歸的精準煮散飲片與其原飲片的質量均一性，為中藥飲片的臨床應用質量均一性提供參考。方法：對當歸藥材原飲片和精準煮散飲片的干膏率進行比較，應用HPLC-DAD結合中藥指紋圖譜法對不同粒度精準煮散飲片及原飲片的煎煮液進行質量均一性評估。結果：就出膏率而言，精準煮散飲片高于原飲片。指標成分阿魏酸由0.32 mg/g提高至0.38 mg/g，同時共有峰的峰面積有不同程度增大，均勻度顯示相對標準偏差（RSD）由4.82%降低至2.63%。結論：當歸的精準煮散飲片與原飲片在本質屬性上沒有區別，但前者對于當歸的有效成分溶出量和質量均一性均有所提高。

【關鍵詞】當歸；精準煮散飲片；中藥指紋圖譜；高效液相色譜；阿魏酸

【中圖分類號】R286.0【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）19-0025-05

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.19.zgmzmjyyzz202319006

Analysis of Quality Homogeneity of Angelica sinensis Precise Decoction PiecesBI Wu1SUN Hui1REN Qiang2*

1. Hunan Institute for Drug Control， Changsha 410001， China; 2. Jining Medical University， Rizhao 276826， ChinaAbstract：Objective To investigate the quality homogeneity of Angelica sinensis and its original pieces for the quality uniformity and clinical effectiveness of Chinese herbal pieces. Methods The dry yield rate of the original and precise decoction pieces of A. sinensis were compared and determined. HPLC-DAD combined with fingerprint of traditional Chinese medicine was used to evaluate the quality homogeneity of decoction pieces of different particle sizes. Results As far as the extraction rate is concerned， the precision boiled pieces are higher than the original pieces. The content of ferulic acid increased from 0.32 mg/g to 0.38 mg/g， and the area of common peak increased to some extent. The relative standard deviation （RSD） of uniformity decreased from 4.82% to 2.63%. Conclusions There is no difference in essential properties between the accurate boiled pieces and the original pieces， but the former can improve the dissolution and quality uniformity of A. sinensis.

Keywords：Angelica Sinensis; Precise Boiled Pieces; Fingerprint of Traditional Chinese Medicine; HPLC-DAD; Ferulic Acid

當歸為傘形科植物當歸Angelica sinensis （Oliv.） Diels 的干燥根，是我國常用大宗中藥材之一，為歷版《中國藥典》所收載 ［1］。主產甘肅東南部，以岷縣產量多，質量好，其次為云南、四川、陜西、湖北等省。藥理研究表明，當歸具有活血、補血、促進造血、抗腫瘤等功用［2-7］；化學成分研究表明，當歸中主要含有有機酸類、黃酮類、多糖類、揮發油等化學成分［8］，其中阿魏酸在2020年版《中國藥典》作為定量測定的指標性成分。

中藥飲片是中藥臨床應用的主要形式之一，多以湯劑在臨床使用，因此中藥飲片質量均一性在臨床應用中意義重大。中藥飲片由于其來源藥材質量參差不齊，化學成分含量差異很大，從而影響臨床用藥的療效和穩定性。為克服中藥飲片這種應用形式的不足，近年來有專家提出“中藥精準煮散飲片”的概念［9］。中藥煮散最早可追溯至先秦，在唐宋盛行，是將中藥粉碎成一定粒度與水共煎，去渣取汁制成的中藥液體制劑。中藥煮散注重“藥力盡出”，但由于煮散需將藥材粉碎，導致藥材鑒別困難，到明清時期逐步被便于鑒別和流通的飲片所取代。

隨著現代科技的進步，中藥飲片應用形式的不足有望改進，中藥煮散被再度提出。中藥精準煮散飲片是通過標準化和規范化工藝將中藥飲片的形狀規格微小化、均勻化處理，使飲片批量規模穩定化，批內質量均一化，同時有利于有效成分的溶出和自動化調劑［10］。目前已有研究人員對制何首烏、雞血藤、三七、枳殼、肉桂等藥材進行了精準煮散飲片的研究［10-14］，近期也有人對當歸精準煮散飲片的指紋圖譜和含量測定進行了研究［15］，本研究重點對當歸精準煮散飲片的質量均一性進行了研究，以期為當歸精準煮散飲片的實際應用提供參考。

1儀器與材料

1.1儀器高效液相色譜儀LC-20AT（Shimadzu Corporation）；Diamonsil（200 mm×4.6 mm， 5.0 μm）色譜柱；水浴鍋DZKW-D-2（北京市永光明醫療儀器有限公司）；電子天平（準確至千分之一，Shimadzu Corporation）；溶劑過濾器（天津津騰公司）；醫用離心機TGL-185（長沙平凡儀器儀表有限公司）；電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）。

1.2材料阿魏酸（純度98%，批號：20140928，國藥集團化學試劑有限公司）。乙腈、冰醋酸為色譜純（Fisher），其它試劑為分析純。

研究樣品為傘形科植物當歸Angelica sinensis （Oliv.） Diels 的干燥根，具體編號、產地及規格詳見表1。當歸原飲片形態如圖1所示，當歸精準煮散飲片如圖2所示。

2方法

2.1煮散飲片與原飲片出膏率比較取同一批次當歸原飲片（批號：180626016），粉碎，過篩，得到5～10目（2～4 mm），10～24目（0.8～2 mm）和24～65目（0.25～0.8 mm）等不同粒度的煮散飲片。稱取原飲片及不同粒度煮散飲片各100 g，加8倍量水浸泡30 min，煮沸30 min，濾得煎煮液，剩下的殘渣加6倍量水煎煮30 min。合并兩次煎煮液，濃縮成100 mL溶液，得到1.0 g/mL藥液。精密吸取各供試液2 mL于蒸發皿中，干燥至恒重，稱重，計算出膏率。

2.2煮散飲片與原飲片指標成分含量比較

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取適量阿魏酸對照品，加70%甲醇制成對照品儲備溶液，然后依次稀釋成每1mL含5μg、10μg、50μg、100μg、250μg、500μg的系列對照品溶液，備用。

2.2.2供試品溶液的制備分別稱取不同批次的市售原飲片（S1～S3）各100 g，3批當歸原飲片（S1～S3）等比例混合成400 g，粉碎過篩，取10～65目當歸煮散飲片300 g，于紙上均勻攤平，平均分為9份，任意選取3份（S4～S6），各稱量100 g，6份樣品按前述方法分別煎煮濃縮為1.0 g/mL藥液。精密量取，濃縮液2mL置20mL量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，取適量試液離心，取上清液，即得供試液。

2.2.3色譜條件Diamonsil C18 （2） （200 mm×4.6 mm， 5.0 μm）色譜柱，以乙腈（B）-0.1%冰醋酸水（A）為流動相；流速為1.0 mL/min；梯度洗脫0～18 min 19% B；18～30 min 19%～90% B；30～32 min 90%～19% B；32～40 min 19% B；檢測波長為316 nm，按阿魏酸峰計算理論板數應不低于5000。

2.2.4線性關系考察將配制好的系列對照品溶液按照“2.2.3”項下色譜條件進樣分析。以對照品的峰面積（Y）對濃度（X）進行線性回歸，計算回歸方程，考察阿魏酸在上述色譜條件下的線性關系。

2.3煮散飲片與原飲片指標成分一致性比較按 2.2 項下的方法制備供試液，準確吸取各供試品溶液注入HPLC記錄色譜峰信息。采用國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件”（2004A版）對市售原飲片處理前后指紋圖譜相似度進行比較。

3結果與分析

3.1不同粒度煮散飲片出膏率考察出膏率考察結果如表2所示，從結果可以看出，與原飲片（出膏率5.27%）相比，不同粒徑的煮散飲片出膏率隨著粒徑的減小呈顯著增加的趨勢，出膏率分別為5.17%、5.69%、6.31%。由于煮散飲片粒徑不同出膏率不同，其中10～24目和24～65目出膏率相對較高，所以在后續實驗中采用10～65目的煮散飲片。此外，實驗顯示，煮散飲片粒度越大，飲片的澄清度越高，所有飲片都沒有出現糊化。

3.2色譜條件考察將準備好的對照品溶液和供試品溶液按“2.2.3”項下的色譜條件進樣分析，對照品及提取液色譜圖如圖3所示，發現該色譜條件下阿魏酸分離度良好。以對照品的峰面積（Y）對濃度（X）進行線性回歸計算，回歸方程為：Y=13 176X-78 286（R²=0.9998），表明阿魏酸在10～500 μg/mL濃度范圍內線性關系良好。

3.3煮散飲片與原飲片指標成分含量的均一性采用高效液相色譜法測定了不同形式飲片中指標性成分阿魏酸的含量，不同批次精準煮散飲片提取液與當歸原飲片中指標成分的含量具體見表3和表4。結果表明，混合煮散前，各批次當歸飲片藥材中指標成分阿魏酸平均含量為0.32 mg/g，相對標準偏差為4.82%，批間差異較大；但將其混合制成煮散飲片后，阿魏酸成分的含量明顯增加，平均值為0.38 mg/g，相對標準偏差為下降為2.63%，說明煮散后質量均一性有所改善。

3.4煮散飲片與原飲片的指紋圖譜均一性由于飲片制成的湯劑成分較為復雜，因此采用了中藥整體質量控制常用的指紋圖譜法對煮散飲片和原飲片進行比較，具體結果如圖4所示，見表5。結果顯示：應用現有的檢測方法，當歸煮散飲片和原飲片樣品的色譜峰可以很好地匹配，相似度結果顯示：煮散飲片（S4～S6）的相似度均＞0.997，指紋圖譜匹配更好。說明了精準煮散飲片與市售的原飲片在提取出的成分屬性上沒有顯著差異，采用指紋圖譜相似度分析法可用來鑒別當歸煮散飲片的真偽情況。以精準煮散飲片水煎液中阿魏酸的平均峰面積為基準，計算精準煮散飲片和市售飲片水煎液主要共有峰的相對峰面積，結果見表6。精準煮散飲片與市售飲片無顯著差異。

4討論

為實現飲片的標準化和均勻化，精準煮散飲片首先需要將飲片粉碎混勻，飲片粉碎粒度與飲片的出膏率等指標密切相關，因此粉碎粒度是一個關鍵指標。為了考察當歸精準煮散的效果，本實驗比較了不同粒度的當歸煮散飲片與原飲片出膏率差異，當歸煮散飲片的出膏率與藥材粉碎的粒徑密切相關，粒徑減小出膏率明顯增加，據此獲得了合適的粉碎粒度，為下一步實驗的進行奠定了基礎。

為了解當歸精準煮散飲片與原飲片質量的一致性，進一步采用HPLC法對其指標成分阿魏酸含量測定，指紋圖譜法對飲片水煎煮后的總體成分相似度及其共有峰面積進行了綜合比較。含量測定結果表明，煮散后指標性成分阿魏酸雖有一定程度增加，但并不顯著，可能與藥材中阿魏酸含量情況有關，因此煮散飲片原藥材的質量及其評價指標也很重要；指紋圖譜評價結果顯示，當歸煮散飲片與其原飲片色譜峰數量基本一致，說明其提取物在種類上無顯著變化，但煮散飲片主要共有峰的峰面積有不同程度的增加。總的來說，煮散飲片可以較好地保持原飲片的質量。

值得注意的是，阿魏酸雖為《中國藥典》2020版當歸含量測定的指標成分，但專屬性不足，用于評價當歸煮散飲片的質量還有待商榷。此外，精準煮散飲片適合于根和莖類藥材、纖維含量較高且市場上飲片規格較多的飲片。一般含有揮發性成分的飲片，因粉碎過程中會導致揮發性成分損失，且藥材粉碎后表面積增大增加揮發性成分揮發的速度，制成精準煮散飲片需要重點關注。當歸質量標準中，揮發油總量也是其重要的控制指標，在考察當歸精準煮散飲片時需要考慮對該類成分的評價，本研究考慮到粉碎和煎煮過程損失較大會導致結果不準確，所以未考慮揮發性成分，這是本文的不足之處。由于煮散飲片經過粉碎后會出現性狀鑒定困難等不足，在實際應用過程中需借助指紋圖譜等現代技術展開深入的研究，探討在保證當歸煮散飲片原料真實性的基礎上，實現煮散飲片質量的有效性和均一性。俱蓉等［15］雖然考察了當歸主要揮發性成分藁本內酯和洋川芎內酯I，但未能考察揮發性成分的指紋圖譜以綜合評價揮發性成分的穩定性和均一性。

研究結果表明，當歸煮散飲片與原飲片質量具有良好的一致性，當歸煮散飲片具有臨床應用的可行性。由于煮散飲片可實現不同批次原料的均一性，因此，當歸煮散飲片具有良好的臨床應用前景。此外，隨著DNA條形碼鑒別技術、代謝組學技術和指紋圖譜技術等可克服煮散形態鑒別困難的技術的發展和應用，煮散飲片應用更加規范化、科學化和精準化。現階段，在眾多新型飲片中，精準煮散飲片因其更高的質量均一性將成為普通飲片向“精準化”轉型和升級的重藥飲片形式之一，也是中藥傳承、創新和發展的重要表現形式。參考文獻

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（收稿日期：2023-01-11編輯：劉斌）