2020-2022 年眉山市豬群病毒性疫病流行病學調查

沈愛梅，黃先奇*，楊治聰，劉 麗，黃海燕，葉 鵬，趙文靜，張玉群，鄭 強

（1.四川省眉山市動物疫病預防控制中心，四川 眉山 620010；2.四川省仁壽縣動物疫病預防控制中心，四川 仁壽；3.四川省青神縣動物疫病預防控制中心，四川 青神）

豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合癥病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬圓環病毒（PCV）、豬細小病毒（PPV）是危害我國養豬業的重要病原，主要導致豬群免疫障礙、繁殖障礙、呼吸系統和消化系統損傷，生長抑制甚至死亡。其中，豬群發生圓環病毒感染現象備受關注。明確豬群主要病死因素，科學開展風險評估，有助于制定針對性、適用性更強的防控措施，保障生豬產業健康穩定發展。本調查于2020年8 月至2022 年4 月對眉山市7 個縣（區）416份病死豬口鼻肛拭子進行了CSFV、PRRSV、PRV、PCV、PPV 核酸檢測，以期為全市生豬疫病防控工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品種類 采集無害化處置環節病死生豬的口、鼻、肛合并拭子，放置于含5 mL 病毒保存液的采樣管中。

1.1.2 樣品來源 對2020 年8 月至2022 年4 月期間8 輪無害化環節采集病死生豬的口、鼻、肛合并拭子（每份樣品以養殖戶為單位進行混合）檢測情況進行匯總，期間共采集眉山市7 個縣（區）口鼻肛混合拭子416 份，詳見表1。

表1 眉山市不同區域豬群6 種疫病的病原檢測結果

1.1.3 主要試劑和儀器 磁珠法核酸提取試劑盒購自天隆生物科技有限公司；豬圓環病毒2 型/偽狂犬病毒GE 基因雙重熒光PCR 檢測試劑盒、豬瘟/豬藍耳病病毒高致病性變異株雙重熒光RTPCR 檢測試劑盒、豬細小病毒熒光PCR 檢測試劑盒、豬圓環病毒3 型熒光PCR 檢測試劑盒購自北京森康生物技術開發有限公司；豬繁殖與呼吸綜合征病毒（通用型）和豬瘟病毒雙重實時熒光RT－PCR 檢測試劑盒購自北京世紀元亨公司；全自動核酸提取儀GeneRotex96 購自天隆生物科技有限公司；CFX96 熒光定量PCR 購自美國伯樂公司。

1.2 方法

1.2.1 核酸提取 從病毒管中取200 μL 口鼻肛混合拭子上清液，使用磁珠法核酸提取試劑盒和核酸全自動提取儀進行總核酸提取。提取程序掃描說明書二維碼導入，提取完成后進行核酸檢測。

1.2.2 核酸檢測 使用各病原對應的熒光RTPCR/PCR 檢測試劑盒進行病原核酸檢測，操作步驟按照試劑盒說明書進行。其中，2020 年8 月至2022 年1 月PRRSV 的核酸檢測使用豬瘟/豬藍耳病病毒高致病性變異株雙重熒光RT-PCR 檢測試劑盒，2022 年3 月至4 月PRRSV 的核酸檢測使用豬繁殖與呼吸綜合征病毒（通用型）和豬瘟病毒雙重實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒。

1.3 結果判定

根據各試劑盒說明書進行結果判定。陽性對照Ct 值≤陽性臨界值并出現典型擴增曲線，陰性對照無Ct 值且無特定擴增曲線，試驗結果成立。樣品Ct 值≤陽性臨界值并出現典型擴增曲線，判為陽性；樣品Ct 值≥陽性臨界值并出現典型擴增曲線，或者陽性臨界值<樣品Ct 值<陰性臨界值并出現典型擴增曲線，判為可疑，需重新提取總核酸，再次擴增后進行結果判定，結果為陽性或者仍然可疑，判為陽性；樣品未出現特異性擴增曲線或者樣品Ct 值≥陰性臨界值，判為陰性。

2 結果

2.1 監測結果

所有檢測的陽性對照、陰性對照均成立。416 份樣品中共檢出CSFV 陽性1 份，PRRSV 陽性9 份，PRV 陽性0 份，PCV2 陽性164 份，總體陽性率分別為0.24%、2.16%、0%、39.42%；46 份樣品中共檢出PCV3 陽性1 份，PPV 陽性1份，總體陽性率分別為2.17%、2.17%。全市不同區域豬群6 種病原檢測結果詳見表1，全市不同時間段6 種病原檢測結果詳見表2，全市不同區域6 種病原混合感染情況詳見表3。

表2 眉山市不同時間段豬群6 種疫病的病原檢測結果

2.2 不同區域樣品檢出陽性病種數不同

2020 年8 月至2022 年4 月，仁壽縣樣品檢出CSFV、PPRSV（兩者陽性率均為1.28%）、PCV2（陽性率為 33.33%）、PPV（陽性率7.69%）4 個病種，青神縣樣品檢出PPRSV（陽性率為3.13%）、PCV2（陽性率為26.56%）、PCV3（陽性率50.00%）3 個病種，東坡區、丹棱縣樣品檢出PPRSV（陽性率分別為1.67%、6.67%）和 PCV2（陽性率分別為 33.33%、54.67%）2 個病種，眉山天府新區、彭山區和洪雅縣樣品檢出PCV2（陽性率分別為68.29%、30.00%、33.82%）1 個病種，見表1。

2.3 不同病種陽性檢出率存在差異

2020 年8 月至2022 年4 月，全市樣品PCV2 陽性檢出率最高為39.42%，陽性樣本來源7 個區縣，在8 個監測時段均有檢出；PRRSV 陽性檢出率2.16%，陽性樣本來源4 個區縣，在3個監測時段有檢出；CSFV、PCV3、PPV 陽性檢出率分別為0.24%、2.17%、2.17%，陽性樣本均來源1 個區縣，均在1 個監測時段有檢出；PRV陽性檢出率為0.00%，以上結果表明不同病種間陽性檢出率差異較大，見表1 和表2。

2.4 病毒混合感染陽性檢出較低

所有樣品共檢出混合感染樣品4 份，其中，3 份為PRRSV-PCV2 雙重感染，1 份為PRRSVPCV2-PPV 三重感染，雙重感染和三重感染率分別為0.72%、0.24%，見表3。

3 討論

3.1 CSFV 防控成效顯著

2020 年8 月至2022 年4 月，全市CSFV 總體感染率為0.24%，且只在1 個場點檢出；四川省2017 年CSFV 感染率6.29%[1]，2020 年感染率0%[2]，眉山市CSFV 感染情況與全省同期處于較低水平，防控效果良好，發生區域性重大疫情可能性不大。

3.2 PRRSV 感染普遍存在

2020 年8 月至2022 年4 月，全市PRRSV高致病性毒株陽性檢出率為0.54%，2022 年3 月至 2022 年 4 月，PRRSV 通用型檢出率為15.22%，表明PRRSV 高致病性變異株不是本市流行優勢毒株，這與四川省動物疫病預防控制中心在眉山市未檢出高致病性變異株的結論相吻合[3]。本市PRRSV 通用型陽性檢出率與南充市17.11%[4]、樂山市15%[1]、涼山14.29%[1]等吻合，2016-2017 年四川 PRRSV 陽性檢出率22.15～26.92%[5]，2018 年四川PRRSV 陽性檢出率18.25%[6]，全省及眉山市PRRSV 感染普遍存在。下一步，本市將持續跟蹤PRRSV 感染情況，并進一步做好分型鑒定，以期提供更精準防控指導。

3.3 PCV 感染較為嚴重

2020 年8 月至2022 年4 月，全市PCV2 總體感染率為39.42%，與四川省達州市38.46%、巴中40%、樂山40%[1]基本吻合。2017、2018年，全省病死豬 PCV2 陽性檢出率分別為74.48%[1]、49.2%[7]，全省感染情況較為嚴重。近兩年，全市1～3 月PCV2 平均陽性檢出率為33.78%，4～8 月為45.04%，呈現春夏季陽性檢出率略高于秋冬季，這與已有報道相吻合[7-8]。通過分析近兩年生豬病死率和PCV2 陽性檢出率，可以看出兩者呈現正相關，PCV2 陽性率明顯升高后，生豬病死率也隨之明顯上升，提示可通過開展PCV2 日常監測預判疫病流行趨勢，科學預警預報。

眉山市PCV3 陽性檢出率2.17%，低于全省平均水平 11.19%[1]，但這也有可能與本試驗PCV3 檢測次數和樣本數偏少有關，后續將持續開展監測，獲得更多的數據。

3.4 未檢出PRV 感染

2020 年8 月至2022 年4 月，本市病死豬PRV 陽性檢出率0%，與2017 年四川省13 個市州病死豬PRV 陽性檢出率0%[1]，2020 年內江市病死豬PRV 陽性檢出率0%一致[9]。2010、2011年，眉山市PRV-gE 抗體陽性率分別為1.7%[10]、3.5%[11]，說明豬PRV-gE 基因缺失苗免疫效果確實，為本市豬偽狂犬病凈化工作奠定良好基礎。下一步眉山市將同步開展養殖場生豬感染抗體和核酸檢測，準確掌握疫病動態。

3.5 PPV 感染整體平穩

眉山市PPV 陽性檢出率為2.17%，遠低于四川省2012 年17.22%[12]以及2021 年40%[13]，這可能與監測頻次和樣本數偏少，以及本試驗采集樣品為病死豬口鼻肛拭子，未采集死胎、病弱胎組織以及臍帶血液、胎衣、母豬分泌物等有關，導致試驗結果與臨床實際感染率有所偏差。

3.6 混合感染情況

眉山市檢出兩種和兩種以上病毒混合感染率為0.96%，遠低于全省混合感染率32.52%[1]，內江20.4%[9]，南充13.82%[4]。這可能與本市2020年8 月至2022 年1 月采用高致病性變異株檢測PRRSV 有關，未完全覆蓋PRRSV 所有毒株，導致檢測結果與實際感染情況有偏差。本市混合感染均為PRRSV、PPV 與PCV2 混合感染，結果表明，上述混合感染會明顯促進PCV2 復制，從而強化PCV2 的致病作用[14-15]。PRRSV 和PCV2有免疫抑制作用，故本市規模養殖場在做好常規疫苗免疫的同時，更應從生物安全角度加強疫病防護。

4 結論

眉山市豬瘟、豬偽狂犬、豬細小病毒病流行情況平穩，豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環病毒病感染情況較為嚴重，建議市、縣（區）疫病控制機構和養殖場（戶）積極應對，做好疫病基礎免疫的同時，著重提高養殖場生物安全水平，科學制定疫病凈化方案，實現疫病防控效益最大化。