飼料中添加氯化膽堿對大口黑鱸生長、飼料利用及形體指標的影響

周良星 鐘雷 袁俊光 陳宇航 曹雙俊 劉建高 江坤生

[1 新希望六和股份有限公司,四川成都 610063; 2 廣東德寧水產科技有限公司,廣東佛山 528300; 3 廣東省水產高效健康養殖(德寧)工程技術研究中心,廣東佛山 528300; 4 華南農業大學,廣東廣州 510642]

膽堿是水產動物生長必需的一種物質,其分子式為(CH3)3N(CH2)2OH。在飼料中,常用的膽堿添加形式是以玉米芯粉為載體的氯化膽堿粉劑,通常氯化膽堿含量(質量分數)為50%或60%。膽堿的生理功能主要包括:作為磷脂的組成成分,參與構成和維持細胞結構;作為副交感神經遞質——乙酰膽堿的合成前體,參與機體神經傳遞活動;作為肝臟脂肪代謝必需物質,促進肝臟脂肪以脂蛋白的形式轉運,防止脂肪在肝臟過度積聚,具有預防脂肪肝的重要生理功能;提供甲基,合成激素、蛋氨酸、核酸、肉堿等物質,參與機體代謝活動[1]。水產動物自身合成的膽堿有限,遠遠不能滿足其生長的需求,而且會受到飼料中蛋氨酸、甜菜堿等甲基供體的影響,因此在實際生產中必須通過外源進行補充[2-3]。飼料中膽堿不足會導致水產動物的生長性能及其對飼料的利用效率下降,并伴隨器官病變退化等癥狀,這在黃鱔[4]、草魚[5]、斑點叉尾魚回[6]、羅非魚[7]等品種中已有相關發現。

近年來,由于商業配合飼料的全面使用,我國大口黑鱸(Micropterussalmoides)的養殖產量逐年攀升,在2020年已達61.9萬t[8]。但大口黑鱸在飼喂配合飼料的過程中易患糖脂代謝綜合征,具體表現為生長性能下降,飼料利用率下降,肝臟腫大,肝纖維化、壞死[9]。有研究表明,適量添加氯化膽堿可改善羅非魚[10]、龍膽石斑[11]、軍曹魚[12]等魚類的脂質代謝并提高其生長性能。目前,有關大口黑鱸配合飼料中膽堿添加水平的報道較少,且大多限于幼魚階段。為此,本研究以大口黑鱸成魚為研究對象,探討不同氯化膽堿添加量對大口黑鱸(體質量在40～160 g)生長性能、飼料利用率及形體指標的影響,以期為大口黑鱸飼料的配制提供依據。

1 材料和方法

1.1 試驗設計與飼料

以秘魯超級魚粉、雞肉粉、去皮豆粕、棉籽蛋白為蛋白源,羅非魚油和大豆油為脂肪源,木薯淀粉為淀粉源,外源添加蘇氨酸、DL-蛋氨酸、L-賴氨酸鹽酸鹽,配制基礎飼料(原料全部購自廣州希望飼料有限公司)。在基礎飼料中分別添加0(對照組)、3 000、6 000 mg/kg的氯化膽堿(純度50%,廣州希望飼料有限公司)制成3組膨化飼料,具體飼料配方見表1。

表1 試驗飼料配方及營養組成(干物質) 單位:%

所有飼料原料經粉碎后過80目篩(篩網孔徑0.180 mm),充分混合均勻,經飼料膨化機用孔徑3.0 mm模板制成膨化飼料,于95 ℃條件下烘干后,置于-18 ℃冰箱儲藏備用。

1.2 試驗魚及養殖管理

試驗在廣東德寧水生生物研究中心杏壇養殖基地進行。試驗用大口黑鱸購自養殖基地附近的苗種場,購買后在5.0 m×5.0 m×1.8 m(長×寬×高)的池塘網箱中暫養2周。養殖水源來自附近東海河,經處理后水中氨氮含量低于0.2 mg/L,亞硝酸鹽含量低于0.1 mg/L,溶解氧高于5.0 mg/L,pH為7.5～8.3。暫養期間,每日于7:00和17:00各投喂1次對照組飼料(見表1),表觀飽食投喂,待試驗魚適應養殖環境。

正式試驗開始前,對試驗魚進行24 h饑餓處理,之后挑選健康活潑、規格均勻的大口黑鱸1 500尾,經稱量,其初始體質量為(44.87±0.15)g,將試驗魚隨機分成3組,每組設5個重復,每個重復100尾魚。試驗網箱的規格為2.0 m×2.0 m×1.8 m(長×寬×高)。

正式試驗期間,根據表1的飼料配方,每日于7:00和17:30各投喂1次飼料(表觀飽食投喂)。光照為自然光源,水溫為28.6～32.4 ℃,水體氨氮含量為0.05～0.20 mg/L,亞硝酸鹽含量為0.05～0.10 mg/L,溶解氧為4.54～8.41 mg/L,pH為8.0～8.4。觀察并記錄大口黑鱸攝食、健康及死亡情況,試驗周期為60 d。

1.3 樣品采集

試驗結束后,對試驗魚進行停飼24 h處理,然后對全部網箱進行稱重計數。每個網箱隨機抽取3尾魚,測定魚的體長、體質量,將魚解剖后取出其內臟團,稱取內臟和肝臟質量,用于計算臟體比和肝體比,對分離的肝臟拍照并統計肝臟發白(白肝)的比例。

1.4 測定指標及方法

采用以下公式計算成活率(RS,%)、日攝食率(RDF,%/d)、增重率(RWG,%)、特定生長率(RSG,%/d)、飼料系數(CF)、肥滿度(K,g/cm3)、臟體比(IV,%)、肝體比(IL,%)、白肝比例(RW,%)等指標。

RS=100×Nt/N0

(1)

RDF=Wd/(Wt+W0)×2/t×100

(2)

RWG=(Wt-W0)/W0×100

(3)

RSG=(lnWt-lnW0)/t×100

(4)

CF=Wd/(Wt-W0)

(5)

K=100×Wt/Lt3

(6)

IV=Wv/Wt×100

(7)

IL=WL/Wt×100

(8)

RW=NW/N×100

(9)

式(1)～(9)中,N0和Nt分別為試驗魚開始和結束時的數量,Wt和W0分別為試驗終末和初始時魚的平均體質量(g),t為試驗時長(d),Wd為總投飼量(g),Lt為試驗魚的終末體長(cm),WL為試驗魚肝臟質量(g),WV為試驗魚內臟質量(g),NW為解剖發現有白肝的數量,N為解剖的肝數量。

1.5 數據分析

試驗數據用(平均值±標準差)表示,采用SPSS 18.0軟件對數據進行單因素方差分析(one-way ANOVA),若差異顯著,采用Duncan’s多重比較法分析試驗結果的差異顯著性,設P<0.05為差異顯著。

2 結果

由表2可見,各試驗組間日攝食率和成活率均無顯著差異(P>0.05),日攝食率隨著氯化膽堿添加量的增加有下降趨勢。在生長性能方面,隨著氯化膽堿添加量的增加,大口黑鱸終末體質量、增重率和特定生長率升高,其中3 000 mg/kg組和6 000 mg/kg組的增重率和特定生長率與對照組相比均顯著提高(P<0.05),6 000 mg/kg組的增重率和特定生長率較3 000 mg/kg組有所提高,但組間無顯著差異(P>0.05)。在飼料利用方面,隨著氯化膽堿添加量的增加,大口黑鱸的飼料系數有下降的趨勢,但組間沒有顯著性差異(P>0.05)。

表2 氯化膽堿不同添加水平對大口黑鱸生長、飼料利用效率的影響

從表3可見,隨著氯化膽堿添加量的增加,大口黑鱸的臟體比、肝體比和肥滿度有下降趨勢,但均無顯著性差異(P>0.05),而3 000 mg/kg和6 000 mg/kg兩個試驗組之間也沒有顯著差異(P>0.05)。與對照組相比,兩個氯化膽堿添加組的白肝比例均有所下降,但組間無明顯差異(P>0.05)。

表3 氯化膽堿不同添加水平對大口黑鱸形體指標和肝臟顏色的影響

3 討論

膽堿能夠促進水產動物的生長,其主要機理被認為是膽堿在水產動物肝臟膽堿脫氫酶的作用下釋放出活性甲基,參與機體的合成代謝[13]。在本研究中,對照組大口黑鱸的增重率和特定生長率均為最低,隨著飼料中氯化膽堿添加量的增加,試驗組大口黑鱸的增重率和特定生長率也隨之提高,飼料系數隨之降低,表明膽堿具有促進大口黑鱸生長的作用。這在對其他魚類的研究中有相似的發現。例如,楊代勤等[4]發現,隨著飼料中膽堿添加量的增加,黃鱔的增重率增加,飼料系數下降,并且在氯化膽堿添加量達0.8%時有顯著差異(P<0.05);王廣軍等[14]的研究表明,在軍曹魚飼料中添加3 000 mg/kg的膽堿對于降低飼料系數、提高增重率和成活率效果顯著(P<0.05);Jiang等[15]發現,團頭魴的增重率隨著膽堿添加量的增加而顯著提高(P<0.05)。本研究中,大口黑鱸的飼料配方中是以膽堿含量較高的魚粉、雞肉粉等作為主要蛋白源的。有研究表明,魚粉、雞肉粉中的膽堿含量分別高達2 953 mg/kg[16]、5 980 mg/kg[17],但因膽堿在飼料原料中為結合態的有機堿,其生物學效價只有87.42%[16]。這說明飼料原料中的膽堿不能完全被魚類利用,天然膽堿的生物利用率值得被關注;同時,加工工藝也會導致飼料原料中膽堿含量的較大差異[15]。因此,配制飼料時,在計算飼料原料中膽堿含量的同時也應考慮原料中膽堿的生物學效價。

周越等[18]對大口黑鱸的研究表明,飼料中添加氯化膽堿(2 100 mg/kg)可顯著提高大口黑鱸(體質量為20.14～93.71 g)的增重率和特定生長率(P<0.05)。本研究中,添加氯化膽堿(6 000 mg/kg)組大口黑鱸的生長表現和飼料利用率均為最優,但與周越等[18]研究中氯化膽堿的適宜添加量有所差異,分析其原因,可能是飼料營養組成的差異造成的。本研究中試驗飼料的粗脂肪含量接近于商業飼料的粗脂肪含量(12.81%～13.55%),高于相關研究(9.81%～10.02%)[18],因此對于膽堿的需求也相應會增加。有研究表明,增加高脂飼料的膽堿能夠明顯提升武昌魚的生長性能,而低脂飼料的提升效果則不明顯[19]。此外,同一種魚類在不同生長階段,其自身的生長及代謝、合成能力等會有差異,從而導致對膽堿的需求量不同[13]。研究表明,羅非魚幼魚期(56.63～231.21 g)的最適膽堿需求量為625.42 mg/kg[20],而在成魚期(220.25～512.87 g)的最適膽堿需求量為506.43 mg/kg[21]。因此,不同規格的大口黑鱸,其最適膽堿需求量亦有差異。

大口黑鱸在養殖過程中易出現因糖脂代謝障礙誘發的疾病,表現為肝臟發白(白肝)、代償性腫大、肝體指數增加等[22-23]。膽堿可通過調節糖異生、糖氧化代謝、脂肪轉運等途徑改善動物的糖脂代謝[24-25]。相關研究表明,在飼料中添加適量的膽堿后,石斑魚[26]、草魚[27]、異育銀鯽[28]的肝體比和臟體比下降,脂質代謝得到改善。本試驗結果表明,在飼料中添加膽堿,大口黑鱸的白肝比例和肝體比均有一定的下降,這證實了在飼料中添加膽堿可改善大口黑鱸的糖脂代謝,并在一定程度上改善大口黑鱸肝臟的表觀健康狀況。

4 結論

本研究表明,在飼料中添加適宜的氯化膽堿可以顯著改善大口黑鱸(體質量為40～160 g)的生長。以生長性能作為評價指標,氯化膽堿(飼料級,50%)在大口黑鱸配合飼料中的推薦添加量為6 000 mg/kg。