結直腸息肉臨床特點及其與血管內皮生長因子的相關性分析

王沁園，王明瑞，丁向萍

（甘肅省第二人民醫院消化科，甘肅 蘭州 730030）

結直腸癌是常見的惡性腫瘤，該病在早期并無突出表現，只有部分患者出現腹瀉、身體消瘦等癥狀，部分患者確診時可能已錯過最佳手術機會[1]。腺瘤性息肉作為典型的癌前病變，其癌變速度較為緩慢，發展至腺癌的時間通常要持續幾年甚至十幾年，通過結腸鏡檢查能夠及早發現并確診結直腸息肉，但結直腸息肉切除術后仍有部分患者存在較高的癌變風險，因此尋找一項結直腸息肉的觀察指標用于評估其癌變風險具有重要意義[2-3]。血管內皮生長因子（VEGF）具有促進內皮細胞增殖、遷移、血管新生的作用，既往報道指出，VEGF 在多種癌癥的侵襲和轉移過程中均有參與，在腫瘤發生、發展和治療中均有一定的指導意義[4-5]。本研究通過檢測結直腸息肉組織中VEGF的表達情況，分析其與患者臨床特征的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2022 年1 月至12 月甘肅省第二人民醫院收治的75 例結直腸息肉患者為結直腸息肉組，選取同期甘肅省第二人民醫院收治的20 例結直腸癌患者為結直腸癌組，另選取同期在甘肅省第二人民醫院行腸鏡下活檢且病理結果為正常的50 名體檢者作為對照組進行回顧性分析。結直腸息肉組患者中男性42 例，女性33 例；年齡42～74 歲，平均年齡（57.62±12.84）歲；BMI 20～27 kg/m2，平均BMI（23.26±2.71）kg/m2。結直腸癌組患者中男性12 例，女性8 例；年齡45～75 歲，平均年齡（56.88±11.25）歲；BMI 20～27 kg/m2，平均BMI（23.75±2.10）kg/m2。對照組研究對象中男性28 名，女性22 名；年齡40～76 歲，平均年齡（56.27±11.94）歲；BMI 20～28 kg/m2，平均BMI（23.55±3.06）kg/m2。3 組研究對象一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經甘肅省第二人民醫院醫學倫理委員會批準。納入標準：①研究對象年齡為40～80 歲；②結直腸息肉、結直腸癌患者分別符合結直腸息肉[6]、結直腸癌[7]的診斷標準，并均經病理檢查確診；③無嚴重感染者；④胃腸道穿孔者；⑤無其他惡性腫瘤者。排除標準：①妊娠、哺乳期女性；②入組前已接受放療、化療及其他治療者。

1.2 研究方法結直腸癌組患者取腫瘤組織、結直腸息肉組患者取息肉組織、對照組研究對象取正常腸黏膜組織并制作石蠟標本，石蠟標本均連續切片為4 μm 厚度，之后進行免疫組化染色，具體步驟如下：使用二甲苯Ⅰ、Ⅱ（廣州化學試劑廠）5 mL 分別浸泡切片10 min，之后分別在無水乙醇、95%乙醇、75%乙醇中浸泡5 min，最后放入磷酸緩沖液（PBS）（武漢普諾賽生命科技有限公司）5 mL 中10 min。使用3%過氧化氫溶液浸泡切片10 min，之后使用PBS 沖洗5 min，共3 次。將切片置于枸櫞酸鹽緩沖液（上海尚寶生物科技有限公司）5 mL（pH=6.0）中，然后使用1 kW 微波爐加熱，持續10 min，加熱結束后待其降至室溫，再使用PBS 沖洗3 min，共3次。加入VEGF 抗體[羅丹明標記VEGF 抗體免疫球蛋白G（IgG），上海滬震實業有限公司]后在4 ℃冰箱中孵育，持續24 h，孵育后放入37 ℃保溫箱（北京福意電器有限公司，型號：FYL-YS-150L）中待其恢復室溫，之后使用PBS 沖洗3 min，共3 次。加入二抗后在37 ℃保溫箱孵育15 min，繼續PBS 沖洗3 min，共3 次。加入10 mg 二氨基聯苯胺（DAB）（上海翊圣生物科技有限公司）、1 mL 蘇木素（上海科匯生物技術有限公司）復染、脫水、透明、封片，生物顯微鏡（南京貝登醫療股份有限公司，型號：EX01）下觀察攝片。染色結果判定：經400×生物顯微鏡觀察，在切片隨機選擇5 個視野，VEGF 染色結果陽性的判定以細胞質存在棕黃顆粒為標準。染色結果根據細胞中染色強度和比例進行評估，染色強度依據無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別記為0、1、2、3 分，細胞陽性比例據0%～5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%分別記為0、1、2、3、4 分，最終評分為染色強度、細胞陽性比例評分的乘積，總分0～12 分，0～6 分為陰性表達，7～12 分為陽性表達[8]。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）檢測結直腸息肉組織、結直腸癌組織及正常結直腸黏膜組織的VEGF mRNA 相對表達水平。結果判定：設定正常結直腸黏膜表達水平為1，采用2-ΔΔCt法計算個樣品的VEGF mRNA 相對表達水平，分析各組的VEGF mRNA相對表達量[9]。

1.3 觀察指標①比較3 組研究對象VEGF mRNA 相對表達量。②比較結直腸息肉組VEGF 陽性表達與陰性表達患者的臨床特征。③分析結直腸息肉組織VEGF 陽性表達與臨床特征的相關性。

1.4 統計學分析采用SPSS 22.0 統計學軟件處理數據。計量資料以（）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數資料以[例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗，等級資料比較采用秩和檢驗；采用Spearman 相關系數進行相關性分析。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3 組研究對象VEGF mRNA 相對表達量比較結直腸癌組、結直腸息肉組研究對象的VEGF mRNA 相對表達量高于對照組，結直腸癌組高于結直腸息肉組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 3 組研究對象VEGF mRNA 相對表達量比較（）

表1 3 組研究對象VEGF mRNA 相對表達量比較（）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與結直腸癌組比較，#P＜0.05。VEGF：血管內皮生長因子。

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2.2 結直腸息肉組VEGF 陽性表達與陰性表達患者的臨床特征比較75 例結直腸息肉患者中，26 例為VEGF 陽性表達，49 例為VEGF 陰性表達，兩組患者性別、年齡、病理類型比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；VEGF 陽性表達患者多發性息肉、息肉直徑＞2 cm、息肉表面為分葉狀及淋巴結轉移占比高于VEGF 陰性表達患者，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

2.3 結直腸息肉組織VEGF 陽性表達與臨床特征的相關性分析相關性分析顯示，VEGF 陽性表達與息肉數量、息肉直徑、息肉表面為分葉狀及淋巴結轉移呈正相關（P＜0.05），與性別、年齡、病理類型無明顯相關性（P＞0.05），見表3。

3 討論

結直腸息肉屬于消化系統常見病，依據病理分型可分為非腫瘤性和腫瘤性息肉兩大類型，前者主要為增生性息肉，后者則包含絨毛狀、管狀腺瘤性息肉等[10]。作為結直腸癌的癌前病變，結直腸腺瘤性息肉經過數年時間可能發展為腺癌，因此及早發現并抑制腺瘤息肉的癌變對于降低結直腸癌發病率具有重要意義，目前已發現“結直腸腺瘤-癌”這一病理過程中有多種關鍵參與基因，但結直腸息肉癌前病變的發生發展機制仍未完全闡明[11]。本研究通過觀察結直腸息肉組織中VEGF 的表達，并分析其與臨床特征的相關性，探究VEGF 與病理進程的關系。

本研究顯示，結直腸癌組、結直腸息肉組研究對象的VEGF mRNA 相對表達量高于對照組，結直腸癌組高于結直腸息肉組，提示VEGF 在結直腸息肉的形成和進展中具有重要作用，也可在一定程度上反映其癌變的進程。VEGF的生理作用在于能夠促進腫瘤血管生成，在腫瘤細胞的生長、遷移等生理病理過程中均有促進作用，VEGF 在缺氧環境中呈現高表達，而其高表達又會進一步促進腫瘤組織血管新生[12]。從正常結直腸黏膜到結直腸息肉，再到結直腸癌，VEGF mRNA 相對表達量逐漸升高，提示細胞增生的活性逐步提高，腫瘤癌變的風險提高，促進結直腸癌的發生[13]。蔣潤梅等[14]研究VEGF 在結直腸癌中的表達，發現VEGF 在結直腸癌組織中呈現高表達，且高于其在結直腸腺瘤組織中的表達，該結論與本研究結果互為印證。

本研究結果顯示，VEGF 陽性表達患者多發性息肉、息肉直徑＞2 cm、息肉表面為分葉狀及淋巴結轉移占比高于VEGF 陰性表達患者，提示VEGF 陽性表達與息肉數量、息肉直徑、息肉表面為分葉狀及淋巴結轉移等臨床特征有關，符合以上特征的結直腸息肉患者VEGF 陽性表達率較高，具有較高的癌變風險。結直腸息肉生長緩慢，臨床及早發現、確診并摘除息肉有利于改善患者的臨床癥狀，降低結直腸癌的發病風險。另外，本研究發現VEGF 陽性表達與息肉數量、息肉直徑、息肉表面為分葉狀及淋巴結轉移呈正相關，提示VEGF 的表達在結直腸癌的發生發展、侵襲和轉移等病理過程中均具有重要作用，臨床可通過檢測VEGF 陽性表達為該病的治療和腫瘤轉移的預測提供指導，也可作為預測結直腸息肉、結直腸癌患者預后的參考指標。

綜上所述，具有多發性息肉、息肉直徑＞2 cm、息肉表面為分葉狀及淋巴結轉移等臨床特征的結直腸息肉患者VEGF 陽性表達較高，并且以上臨床特征與VEGF 陽性表達呈正相關，通過檢測結直腸息肉組織VEGF 的表達，或可用于指導患者病情和預后的評估。