川桂的生藥學(xué)鑒定

鄭佳浩, 戴麗萍, 姜偉珍, 戴 溈, 陳紅鋒, 鄭希龍

(1.廣東藥科大學(xué)中藥資源學(xué)院, 廣東 云浮 527399;2.中國(guó)科學(xué)院華南植物園/中國(guó)科學(xué)院植物資源保護(hù)與可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 廣州 510650)

川桂(CinnamomumwilsoniiGamble)為樟科(Lauraceae)桂屬(CinnamomumSchaeff.)常綠喬木[1],是我國(guó)特有植物,主產(chǎn)于廣東、廣西、湖南、江西、湖北、四川及陜西等省區(qū)。川桂臨床應(yīng)用較多,主要以其樹(shù)干干燥表皮及其嫩枝入藥,據(jù)《中藥大辭典》和《中華本草》記載,川桂皮具有溫經(jīng)散寒、行氣活血、止痛等功效[2-3],是桂皮類藥材的來(lái)源之一[4]。川桂枝具有發(fā)汗解肌,溫通經(jīng)脈,助陽(yáng)化氣,平?jīng)_降逆的功效[4],《藥性切用》中記載其為傷寒、中風(fēng)營(yíng)分散寒專藥,有“總理中外氣血”之功效[5]。《經(jīng)方實(shí)驗(yàn)錄》中將川桂枝作桂枝廣泛使用于風(fēng)寒、風(fēng)濕等多種疾病[6]。在進(jìn)行廣東連南瑤族藥浴植物調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn),瑤族草醫(yī)使用川桂樹(shù)皮、枝葉作為藥浴材料,用于舒筋活絡(luò)、祛風(fēng)除濕。

現(xiàn)代藥理及化學(xué)研究表明,川桂皮中的主要成分為揮發(fā)油類、苯丙素類、甾體類化合物等,其主要活性成分為桂皮醛及其化合物[7],不僅具有健胃、鎮(zhèn)痛、解熱、消炎等藥理作用,還具有一定的調(diào)節(jié)免疫活性[8]作用,而川桂枝的主要成分為揮發(fā)油及黃酮類[9],川桂葉除了含這兩種化合物之外,還含有萜類化合物以及黃酮類化合物等[10-15]。此外,川桂枝和川桂葉中的揮發(fā)油類化學(xué)組成基本相同,僅含量有所差異[16]。目前對(duì)于川桂的研究主要集中在揮發(fā)油、黃酮類化合物成分以及藥理活性等方面,而關(guān)于其生藥學(xué)鑒定方面的研究多以與同屬植物橫向?qū)Ρ瘸霈F(xiàn),其完整的生藥學(xué)鑒定研究尚待完善。本實(shí)驗(yàn)對(duì)川桂的樹(shù)皮、莖、葉等進(jìn)行系統(tǒng)的生藥學(xué)研究,為川桂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定及進(jìn)一步深入研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本次所用川桂采自廣東省連南瑤族自治縣瑤寨新村,經(jīng)廣東藥科大學(xué)中藥資源學(xué)院鄭希龍副研究員鑒定為樟科桂屬植物川桂。

1.2 儀 器

Nikon ECLIPSE E100生物顯微鏡(日本Nikon)、ScopeImage9.0顯微成像系統(tǒng)、凌生多功能粉碎機(jī)800C(永康市紅太陽(yáng)機(jī)電有限公司)、ATY124電子分析天平(島津菲律賓工廠),ZF-7暗箱式三用紫外分析儀(上海嘉鵬科技有限公司)。

1.3 試 劑

桂皮醛對(duì)照品(麥克林)為麥克林98%(HPLC)對(duì)照品,配成1 mg/μL的溶液;顯色劑為2,4-二硝基苯肼乙醇溶液,按照《中華人民共和國(guó)藥典》(2020年版)要求配置成0.1% 2,4-二硝基苯肼試液,硅膠G板(青島海洋化工有限公司),所用水為蒸餾水,正己烷、乙酸乙酯、乙醇、濃鹽酸,均為分析純?cè)噭?水合氯醛、稀甘油均為化學(xué)純。

2 方 法

2.1 性狀特征鑒別

觀察川桂的樹(shù)干表皮、枝葉以及果實(shí)的形態(tài)特征,并采用性狀鑒定法描述其性狀特征。

2.2 顯微特征鑒別

依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》(2020年版)[17]顯微鑒別法對(duì)川桂的樹(shù)干表皮粉末、莖橫切面、葉橫切面、葉表面進(jìn)行制片,利用光學(xué)顯微鏡觀察各部位組織結(jié)構(gòu)及特征,用顯微成像系統(tǒng)測(cè)量長(zhǎng)度、拍攝組織顯微照片,記錄其顯微特征。

2.3 薄層色譜鑒別

取本品粉末3 g,加乙醇10 mL,密封,振搖,冷浸20 min,過(guò)濾,濾液作為供試液。另取桂皮醛加乙醇制成每毫升含1 μL的對(duì)照品溶液,吸取供試液10～15 μL,對(duì)照液2 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正己烷∶乙酸乙酯(4∶1)展開(kāi),取出晾干,噴0.1% 2,4-二硝基苯肼試液,觀察斑點(diǎn)位置,測(cè)量并計(jì)算Rf值。

3 結(jié) 果

3.1 性狀特征鑒別

性狀鑒別參考《中國(guó)植物志》[18]。

3.1.1表 皮

成熟樹(shù)干表皮和莖表皮多為灰褐色或褐色,部分表皮覆灰白色花紋;樹(shù)干表皮,剛剝下時(shí)呈片狀,稍微彎曲,干燥后呈卷筒狀,厚2～4 mm,外皮為灰褐色或褐色,粗糙,有不規(guī)則的細(xì)皺紋,皮孔為點(diǎn)狀或橢圓形突起,部分川桂皮可見(jiàn)灰白色花紋;內(nèi)表面較為平坦,有細(xì)縱紋,劃之有油痕,其質(zhì)地硬而脆,易折斷,斷面不平坦,淺棕色或棕色。香氣較淡,味辛涼、微辣(圖1A、B)。

注:A為川桂皮外側(cè);B為川桂皮內(nèi)側(cè);C為川桂葉背、葉面;D為川桂及果實(shí)標(biāo)本。

3.1.2葉

葉近對(duì)生,葉卵圓形或長(zhǎng)卵圓形,長(zhǎng)5～16 cm,寬2.5～5 cm,先端漸尖,基部漸狹下延至葉柄,一些為近圓形,葉革質(zhì),上面較鮮綠色,下面灰綠色,幼葉明顯被白色絲毛,成熟葉無(wú)毛,其葉脈為離基三出脈,側(cè)脈在距離基部5～15 mm處向上至葉端彎曲生長(zhǎng),中脈與側(cè)脈兩面凸起,干時(shí)均呈淡黃色,支脈大多不明顯,少數(shù)有3～8條支脈弧曲且與葉緣的肋連接,橫脈多且纖維化程度高(圖1C)。

3.1.3果 序

果序長(zhǎng)達(dá)10 cm,果序軸較其著生的小枝纖細(xì),果橢圓形,果托淺杯狀,頂端截平,邊緣具極短裂片,果期為6月以后(圖1D)。

根據(jù)以上性狀特征,經(jīng)與《中國(guó)植物志》描述對(duì)比鑒別,確定為樟科桂屬喬木川桂[18]。

3.2 顯微特征鑒別

3.2.1粉末顯微特征

川桂皮:粉末呈黃棕色。淀粉粒較多,單粒為主,少見(jiàn)復(fù)粒,圓形或類圓形,直徑3～15 μm,多集中在7 μm左右,層紋不明顯,臍點(diǎn)“人”字狀。纖維大多單個(gè)散在,長(zhǎng)梭形,長(zhǎng)195～920 μm,直徑約50 μm,壁厚,木化,紋孔不明顯。石細(xì)胞類方形或類圓形,直徑32～88 μm,壁厚。油細(xì)胞類圓形或長(zhǎng)圓形,直徑45～108 μm。草酸鈣方晶較多,8～15 μm;無(wú)明顯腺毛及非腺毛(圖2)。

3.2.2莖橫切面顯微特征

莖橫切面類圓形。皮表面有皮孔零散分布,寬110～160 μm;最外表皮由木栓細(xì)胞1～2緊密排列組成,最內(nèi)層木栓細(xì)胞外壁增厚;木栓細(xì)胞多角形,有紋孔,含紅棕色物,皮層細(xì)胞較小,方形或類三角形,排列整齊,壁增厚或內(nèi)壁增厚,含棕色內(nèi)含物(圖3)。

注:A為莖皮層顯微特征(10×);B為中柱鞘部位和石細(xì)胞群(40×);C為中柱鞘纖維(100×);D為川桂莖橫切面完整髓部顯微特征(100×);E為莖橫切面簡(jiǎn)圖(1為木栓組織;2為維管束;3為導(dǎo)管;4為石細(xì)胞群;5為皮層;6為形成層;7為髓部;8為射線);F為莖橫切面顯微特征(4×)(1為木栓組織;2為石細(xì)胞群與中柱鞘;3為韌皮射線;4為韌皮部;5為射線;6為形成層;7為髓部)。

皮層由數(shù)列類圓形木栓細(xì)胞和厚角組織等組成,散有較多油細(xì)胞等分泌細(xì)胞以及石細(xì)胞。石細(xì)胞類圓形,壁直徑20～40 μm,橢圓形,長(zhǎng)24～72 μm,厚8～22 μm,皮層薄壁細(xì)胞中含有較多的草酸鈣方晶,長(zhǎng)度4～8 μm。中柱鞘部位有石細(xì)胞,1～2列排列成群,間斷排列形成環(huán)帶,中間伴有纖維束;韌皮部細(xì)胞較小,有纖維及分泌細(xì)胞散在;形成層明顯,由4～10列長(zhǎng)方形扁形細(xì)胞組成;木射線1～2列或多列細(xì)胞,以髓部為中心向皮層輻射,至韌皮部形成呈漏斗狀射線密集分布,射線細(xì)胞直徑8～16 μm;纖維常2～3個(gè)成束,導(dǎo)管單個(gè)散列或2至數(shù)個(gè)相聚排列分布;髓部總體呈長(zhǎng)橢圓形,細(xì)胞類圓形,80～160 μm,細(xì)胞壁較厚,多木化。

3.2.3葉橫切面

上表皮和下表皮由單層薄壁細(xì)胞整齊排列組成,細(xì)胞外側(cè)無(wú)明顯腺毛及非腺毛;柵欄組織1～2列,由短柱狀、橢圓形細(xì)胞組成,與薄壁細(xì)胞、油細(xì)胞間斷排列,未過(guò)主脈;海綿組織排列較為疏松;油細(xì)胞較多且明顯,大小44～122 μm;薄壁細(xì)胞中含有較多草酸鈣方晶以及淀粉粒;中脈突起,葉面主脈為外韌型維管束,維管束較大;韌皮部位于下表皮側(cè),由4～6層較小細(xì)胞組成,木質(zhì)部中射線明顯(圖4)。

注:A為莖皮層顯微特征(10×);B為葉橫切面詳圖(1為上表皮;2為草酸鈣方晶;3為木栓組織;4為柵欄組織;5為木質(zhì)部;6為海綿組織;7為油細(xì)胞;8為韌皮部;9為厚角組織;10為下表皮);C為葉橫切面局部(100×)(厚角組織);D為葉橫切面局部(100×)(草酸鈣方晶);E為葉主脈木質(zhì)部、韌皮部。

3.2.4葉表皮特征

川桂葉為兩面葉,上表皮細(xì)胞不規(guī)則,垂周壁波浪狀彎曲,氣孔不明顯,下表皮細(xì)胞不規(guī)則,垂周壁波浪狀彎曲,氣孔類型為平軸式。

3.3 薄層色譜鑒別

按照薄層色譜法試驗(yàn),取硅膠板在105 ℃條件下加熱活化,吸取供試液10～15 μL,對(duì)照液2 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正己烷∶乙酸乙酯(4∶1)展開(kāi)[19],取出晾干,噴0.1%二硝基苯肼乙醇液,供試液色譜在與對(duì)照液色譜的相應(yīng)位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)(圖5),其中0為桂皮醛標(biāo)準(zhǔn)品溶液,1為川桂枝樣品溶液,2為川桂皮樣品溶液,其Rf值均約為0.81。

4 結(jié) 論

通過(guò)對(duì)川桂的形狀及顯微鑒別研究發(fā)現(xiàn),川桂具有以下特征:

1) 葉為離基三出脈,革質(zhì)葉,上表面光滑,下表面相對(duì)較為粗糙,其橫切面柵欄組織不過(guò)主脈,其皮層細(xì)胞內(nèi)具有明顯的方晶,成簇存在,油細(xì)胞較大,周韌性維管束,且有明顯木射線,上下表皮內(nèi)側(cè)具有厚角組織,上下表皮細(xì)胞均為一層,下表面具有明顯氣孔以及非腺毛,上表面無(wú)明顯氣孔。

2) 莖橫切面中柱鞘部位有石細(xì)胞群,間斷排列形成環(huán)帶,髓部較大,形成層明顯,皮層及韌皮射線等細(xì)胞內(nèi)具有較多方晶。

3) 色譜鑒別中以桂皮醛為標(biāo)準(zhǔn)物,斑點(diǎn)清晰,分離好,無(wú)拖尾,與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯有相同顏色的熒光斑點(diǎn),可以作為川桂質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)之一。

本研究結(jié)果可為川桂的藥材鑒別、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定以及進(jìn)一步深入研究提供科學(xué)依據(jù)。