MYCN基因與PHOX2B基因聯(lián)合檢測對高危神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒危險(xiǎn)度及預(yù)后的評估價(jià)值

趙曉飛 毛曉燕

作者單位：450000 鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院,河南省兒童醫(yī)院,鄭州兒童醫(yī)院(趙曉飛);450006 河南省直第三人民醫(yī)院(毛曉燕)

神經(jīng)母細(xì)胞瘤(NB)是源于交感神經(jīng)系統(tǒng)的惡胚胎瘤,多發(fā)于兒童群體,占嬰幼兒期惡性腫瘤的8%～12%,在兒童腫瘤性死亡中高達(dá)15%[1-2]。近些年隨著放化療、骨髓移植等的發(fā)展,NB的治療取得實(shí)質(zhì)性進(jìn)展,低、中危的NB存活率得以提高[3-4]。但約有一半的NB患兒在確診時(shí)即為高危,高危患兒即便經(jīng)過多元化治療,仍有較高的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn),生存率較低,而初診時(shí)不精準(zhǔn)的危險(xiǎn)度分層與NB復(fù)發(fā)密切相關(guān)[5]。高危NB的生物學(xué)行為變異較大,故治療前對NB患兒進(jìn)行危險(xiǎn)度分層及預(yù)后評估意義重大?；诖?本研究以本院收治的106例高危NB患兒為研究對象,探究MYCN基因與PHOX2B基因聯(lián)合檢測在高危NB患兒危險(xiǎn)度與預(yù)后評估中的臨床價(jià)值。信息如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年10月至2021年5月本院收治的106例高危NB患兒,研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。(1)納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《兒童神經(jīng)母細(xì)胞瘤診療專家共識》[6]中NB有關(guān)標(biāo)準(zhǔn);②年齡≤14歲;③患兒意識、精神正常,可積極的配合本次研究;④患兒依從性較高;⑤患兒病歷有關(guān)資料齊全;⑥患兒家屬對本研究知情,且自愿簽訂知情同意書。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①存在神經(jīng)疾患者;②伴有其他腫瘤疾病者;③合并自身免疫性疾病者;④存在凝血功能異常者;⑤合并藥物依賴史者;⑥存有嚴(yán)重的腦器質(zhì)性疾病者;⑦合并血液系統(tǒng)疾病者。所有患兒中男性58例,女性48例;年齡2～13歲,平均年齡(8.25±1.03)歲;骨髓轉(zhuǎn)移:68例有,38例無;病灶長徑:59例≥10 cm,47例<10 cm;體重9.2～56.2 kg,平均體重(33.29±10.17)kg;身高77～167 cm,平均身高(117.09±15.29)cm。

1.2 方法

MYCN基因檢測:運(yùn)用熒光原位雜交(FISH)檢測,MYCN(2p24)探針購買自廣州安必平試劑公司,檢測時(shí)嚴(yán)格依據(jù)本實(shí)驗(yàn)室的FISH操作規(guī)程與判讀標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作與結(jié)果判讀。PHOX2B基因檢測:運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(FQ-PCR)檢測PHOX2B基因表達(dá)水平,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析,計(jì)算PHOX2B基因檢測濃度和內(nèi)參基因檢測濃度的比值。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)MYCN基因與高危NB患兒初診臨床特征[年齡、性別、原發(fā)病灶位置、病灶長徑、乳酸脫氫酶(LDH)水平、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)水平、腫瘤轉(zhuǎn)移部位]關(guān)系。(2)PHOX2B基因與高危NB患兒初診臨床特征(年齡、性別、原發(fā)病灶位置、病灶長徑、LDH水平、NSE、腫瘤轉(zhuǎn)移部位)關(guān)系。(3)MYCN基因、PHOX2B基因與高危NB患兒預(yù)后的關(guān)系:在化療6個療程后隨訪1年,以Kaplan-Meier法分析MYCN基因與PHOX2B基因與患兒預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 高危NB患兒MYCN及PHOX2B基因表達(dá)情況

106例患兒中MYCN基因擴(kuò)增60例(56.60%),PHOX2B基因陽性45例(42.45%)。

2.2 MYCN基因與高危NB患兒初診臨床特征關(guān)系

MYCN基因擴(kuò)增患兒初診時(shí)LDH≥1500 U/L占比高于基因正?；純?差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);2組年齡、性別、原發(fā)病灶位置、病灶長徑、NSE水平、腫瘤轉(zhuǎn)移部位等初診臨床特征占比相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 MYCN基因與高危NB患兒初診臨床特征關(guān)系(例,%)

2.3 PHOX2B基因與高危NB患兒初診臨床特征關(guān)系

PHOX2B基因陽性患兒中腫瘤轉(zhuǎn)移部位≥3個與NSE≥370 μg/L占比高于基因陰性患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);2組年齡、性別、原發(fā)病灶位置、病灶長徑、LDH水平等臨床特征占比相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 PHOX2B基因與高危NB患兒初診臨床特征關(guān)系(例,%)

2.4 MYCN基因、PHOX2B基因與高危NB患兒預(yù)后的關(guān)系

Kaplan-Meier結(jié)果顯示:MYCN基因擴(kuò)增患兒與PHOX2B基因陽性患兒的1年生存率分別為48.33%(29/60)、44.44%(20/45),明顯低于MYCN基因正常患兒65.22%(30/46)與PHOX2B基因陰性患兒63.93%(39/61),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.285、3.986,P=0.012、0.046)。見圖1-2。

圖1 MYCN基因與高危NB患兒預(yù)后關(guān)系的Kaplan-Meier圖

圖2 PHOX2B基因與高危NB患兒預(yù)后關(guān)系的Kaplan-Meier圖

3 討論

NB是兒童最為常見的顱外實(shí)體腫瘤,是由身體多個部位的未成熟神經(jīng)細(xì)胞發(fā)展所致的一種癌癥,通常來源于腹部或胸部的交感神經(jīng),最常起源于腎上腺,疾病起源與擴(kuò)散部位不同的患兒其臨床表現(xiàn)亦不盡相同[7-8]。由于NB生物學(xué)行為變異很大,少數(shù)可自發(fā)性消退,或分化成熟為神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤,而多數(shù)患兒病情會急速進(jìn)展,致死風(fēng)險(xiǎn)較高[9-10]。臨床針對NB多采用綜合療法,但該病惡性程度較高,經(jīng)有效的治療后仍會有復(fù)發(fā)的情況發(fā)生。NB復(fù)發(fā)后病情更為嚴(yán)重、復(fù)雜,治療難度大,極大程度降低了患兒生存率,而在初診時(shí)未施行精準(zhǔn)的危險(xiǎn)度分層或治療期間骨髓或外周血內(nèi)微小殘留病(MRD)的存在,是造成復(fù)發(fā)的重要原因,故在疾病早期進(jìn)行精準(zhǔn)的危險(xiǎn)度分層尤為重要。

臨床研究表明,初診時(shí)精確的危險(xiǎn)度分層和在治療過程中密切監(jiān)測腫瘤細(xì)胞內(nèi)的MRD水平,有利于評估腫瘤負(fù)荷及藥物反應(yīng),適時(shí)調(diào)節(jié)危險(xiǎn)度,繼而降低腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn),改善高危NB患兒預(yù)后[11]?，F(xiàn)階段,臨床主要運(yùn)用影像學(xué)、形態(tài)學(xué)等對MRD予以評估,但均存在不同程度局限性。MYCN基因擴(kuò)增為影響NB患兒預(yù)后的獨(dú)立因素,可用于NB危險(xiǎn)度的判定。MYCN基因是一種細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子,在正常情況下MYCN基因僅在胚胎組織及發(fā)育中的神經(jīng)組織內(nèi)表達(dá),具有促使細(xì)胞生長周期縮短、加快細(xì)胞增殖等作用[12-13]。本研究結(jié)果顯示,106例患兒中MYCN基因擴(kuò)增60例(56.60%),MYCN基因擴(kuò)增患兒初診時(shí)LDH≥1500 U/L占比高于基因正?；純?表明MYCN基因擴(kuò)增在病初的危險(xiǎn)度分層方面原因價(jià)值較高。qPCR法檢測腫瘤細(xì)胞具有高度的敏感性,且該方式操作簡便,為監(jiān)測高危NB患兒的MRD的重要措施。PHOX2B基因是參與腎上腺髓質(zhì)與交感神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子,在NB腫瘤細(xì)胞內(nèi)特異性的表達(dá)而在正常細(xì)胞內(nèi)不表達(dá)[14-15]。本研究結(jié)果顯示,PHOX2B基因陽性45例(42.45%),PHOX2B基因陽性患兒多部位轉(zhuǎn)移≥3個與NSE≥370 μg/L占比高于基因陰性患兒,提示PHOX2B基因可用于高危NB患兒的危險(xiǎn)度分層。本研究Kaplan-Meier結(jié)果顯示:MYCN基因擴(kuò)增患兒與PHOX2B基因陽性患兒的1年生存率低于基因正?；純号c基因陰性患兒,表明MYCN基因擴(kuò)增與PHOX2B基因陽性患兒的生存率更低,預(yù)后更差,兩項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測可有效評估高危NB患兒的預(yù)后。但仍需注意的是,本次研究尚存在納入樣本量較少等不足,可能會對本次試驗(yàn)結(jié)果構(gòu)成一定的影響,后續(xù)臨床還需不斷的完善試驗(yàn)設(shè)計(jì),繼續(xù)擴(kuò)大樣本量的納入,以進(jìn)行更深層次的研究。

綜上所述,MYCN基因與PHOX2B基因可用于高危NB患兒的危險(xiǎn)度分層,聯(lián)合檢測可有效評估高危NB患兒預(yù)后,臨床應(yīng)用價(jià)值較高,可進(jìn)行大力推廣。